HBsAg采用胶体金试纸法检测时的漏检情况探讨

王业坤

郴州市中心血站，湖南郴州 423000

病毒表面抗原（HBsAg）作为输血相关传染病主要筛查项目之一，广泛开展应用酶联免疫吸附试验（ELISA），在经血传播疾病筛查中起到重要作用，如乙肝、丙肝、艾滋、梅毒检测等。 并取得显著成效，其灵敏度和特异性得到国家认可。 同时我国作为乙肝大国，乙肝是无偿献血不合格比率主要组成部分之一，如能提高在血液采回血站之前的检出率，将进一步降低经血传播的风险，节约血液资源，降低采供血的各种成本。 随着目前医疗科技的进一步发达，胶体金试纸法因不需特殊检测设备和仪器，方便操作的优势，在HBsAg 筛查中发挥了较为重要的作用。但当标本中HBsAg 在ELISA 酶标法测定时滴度太高，易有假阴性情况出现，而导致漏检发生[1]。对HBsAg 标本为低滴度时，采用胶体金试纸法进行检测，因检测不出有假阴性情况存在，导致漏诊发生。该研究选择2011年5—10月该站无偿献血者标本，采用国产和进口两种ELISA 酶标试剂筛查HBsAg 均为阳性的标本185 例。分男女两组分别行胶体金试法检测， 对两组漏检资料进行回顾性对比分析， 再与文献提供的ELISA 酶标法提供的漏检情况进行比较，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该站14 309 例无偿献血筛查中用国产和进口两种试剂HBsAg 均检测为阳性标本185 例。 为无偿献血者，对其血清标本进行胶体金试纸法对比检测。 男性110 例，女性75 例。

1.2 方法

1.2.1 ELISA 酶标法 国产试剂采用珠海丽珠生物工程有限公司生产的（HBsAg）酶标试剂盒，进口试剂采用意大利索林公司生产的（HBsAg）酶标试剂盒，严格按说明书在有效期内操作，行实验同时均行质控检测。 结果评定：阳性为OD 值>cut off 值。 洗板机：瑞士FAME24/20 型全自动酶免仪。 酶标仪：瑞士FAME24/20型全自动酶免仪。

1.2.2 胶体金试纸法 采用胶体金试纸条， 在试纸条箭头区内滴2 滴全血，后加1 滴推进液，行5 min 静止后对结果进行判断，只1 条红色对比线在测试区为阴性，2 条为阳性。

1.3 统计方法

采用SPSS13.0 统计软件，计数资料行χ2检验。

2 结果

2.1 ELISA 酶标法

185 例血清标本检测中，HBsAg 阳性185 例。

2.2 胶体金试纸法

185 例血清标本检测中，110 例男性样品中HBsAg 阳性65例，阳性率为59%。 75 例女性样品中HBsAg 阳性40 例，阳性率为53%。

HBsAg 阳性标本采用胶体金试纸法未检出的80 例采用ELISA 酶标法检测，OD 值较低，但全部为阳性，与cut off 值接近，表明此例标本HBsAg 浓度相对较低。而现有胶体金法对此例标本灵敏度不够，而造成漏检。 根据资料，标本中HBsAg 滴度太高，对原血清采用ELISA 酶标法检测有后滞现象发生，而导致漏诊出现。

2.3 胶体金试纸法与ELISA 酶标法的漏检情况比较

两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）,两种方法的漏检情况比较，差异有统计学意义。

2.4 不同性别组比较

ELISA 酶标法105 例阳性患者中，胶体金试纸法阳性患者中，性别组差异无统计学意义，两组比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。

3 讨论

目前，在临床肝炎病毒中，乙肝发病率占有较高比例，对患者的生命健康和社会稳定造成严重影响，人群中受感染的患者慢性携带者占10%，且乙肝携带患者中大部分将发展至慢性肝炎，具有较严重的危害型。 据国内外医学报道，目前判断乙肝患者病情变化以检测乙肝二对半和HBV-DNA 的定量作为治疗效果和预后成效的分析依据。但由于乙肝二对半比较复杂和HBVDNA 的特异性指标，检测判断相对棘手。以往对乙肝进行诊断过程中，酶联免疫法为对乙肝两对半进行检测的主要方法，但由于检测结果是患者在对HBV 感染后的免疫状态，血清中抗体蛋白存在变性状况，直接影响检测后的结果。 有报道采用荧光定量PCR 荧光探针法（FQ—PCR）进行实时荧光检测，对反应体扩增后的荧光信号进行捕捉。 荧光信号变化到某一值，会呈循环状，利于循环次数与DNA 量进行定量，有效对乙肝病毒本身进行检测。 采用此方法可直接可靠的对HBV 复制情况进行反应，成为有效的判断依据。 相关研空显示[2]，采用ELISA 进行乙肝两对半进行检测的几种常见模式中，大三阳患者有较高的PCR 检测符合率，小三阳符合率表现普通。 表明HBeAb 有较低的复杂HBV能力。 在PCR 法检测之下，检测出患者有较低的病毒复制，小三阳对乙肝病毒的复制变化情况表现不明显。 通过酶联免疫法检测乙肝二对半为全阴，在PCR 法检测的时候，在PCR 的高灵敏度检测之下，可以检测变异的HBV 变异体，弥补酶联免疫法的不足。

目前，因胶体金试纸条法检测快速，操作方便，在大量样本现场检测中较为适用，胶体金试纸法有较低敏感性，HBsAg 低浓度阳性标本敏感度低，有较高漏检率，ELISA 酶标法相对敏感，0.1～0.2 ng/mL 的HBsAg 采用ELISA 酶标法即可检测，有较低漏诊率，但该研究结果中，ELISA 酶标法14 309 例无偿献血者血清标本检测中，HBsAg 阳性185 例，阳性率为1.29%。胶体金试纸法185 例ELISA 法阳性血清标本检测中，HBsAg 阳性105 例，阳性率为56.8%，其中假阴性80 例，为43.2%。 两组比较差异有统计学意义 （P＜0.05）。 胶体金试法检测的HBsAg 阳性结果中，与ELISA 法检测结果有差异性，故采用金试纸测法检测容易造成漏诊。

目前，在国内采供血机构及各大医院中对血液标本检测HBsAg 时通常应用ELISA 酶标法，但因所用ELISA 酶标试剂盒内反应孔里有一定的抗体量包被，各标本抗原量存在差异，其OD 值在含量与试剂盒相近时，与标本含量成正比，而抗原在血清中呈较高水平时，则有后滞现象出现，可导致假阴性发生，造成漏检发生。 故在采用ELISA 酶标法对血清标本进行检测时，需采用卫生部临检中心提供的低值质控血清测定值，宜在cut off 值比值2～3 间的ELISA 酶标试剂盒为佳，为1 ng/mL。 再联合0.5 ng/mL 低界值血清做质控，保证HBsAg 检出低值弱阳性标本。

总之，临床采用ELISA 法检测无偿献血者标本大概检出比率在1%～2%，这样给采供血的质量把关形成很大的压力，同时造成很大的采供血物资、检测成本、不合格血液处理等成本的上升。 如能将金标法作进一步的改进，提高其检测的灵敏度，这样在采血现场用金标法提高乙肝快检的准确率，一是节约了献血员的血液，降低了实验室的风险，二是降低了采供血的成本，提高了采供血的质量和效率。 故针对胶体金试纸法和ELISA 检测HBsAg 的漏诊情况，用胶体金试纸法检测阳性的标本在成一定倍数稀释后，采用ELISA 酶标法进行检测，可使对强阳性标本的漏检降低，同时在利用ELISA 酶标法对HBsAg 进行检测时，需应用相关部门提供的血清临界值做质控，以降低漏检发生率。

[1] 李宏杰.胶体金免疫层析试验检测HBsAg 等项目与医疗安全[J].中国医学文摘·检验与临床，2006，20(6)：321.

[2] 李文新.金标法测HBsAg 漏检原因分析[J].检验医学，2004，19(2)：92.