吗替麦考酚酯对老年系统性红斑狼疮患者免疫细胞水平变化的影响①

李倩倩 姜振宇 赵 令 马 宁 王 凯 张彦东

(吉林大学白求恩第一医院风湿免疫科，长春130021)

系统性红斑狼疮是(SLE)是一种自身免疫性疾病，病因及发病机制目前尚未完全阐明，SLE好发于育龄期女性，但也可发生于老年人，由于老年SLE临床上较少见，且与青年SLE的临床表现有较多不同，常易误诊。尽管目前对SLE发病机制的研究取得较大的发展，但主要是集中在疾病与适应性免疫系统的关系上，自身免疫性疾病的共同病理基础是自身抗原和抗体形成免疫复合物，激活补体系统，是导致多器官损伤，除产生自身抗体外，还有免疫细胞、细胞因子等免疫异常，而淋巴细胞亚群特别是T细胞、B细胞及NK细胞对疾病均有一定的影响。现阶段，SLE的治疗仍以糖皮质激素和免疫抑制剂为主。单纯应用糖皮质激素治疗SLE，激素用量大，易复发;激素联合免疫抑制剂治疗SLE可减少激素用量，有效控制病情，而吗替麦考酚酯(MMF)作为最初用于抑制器官移植后的排斥反应的免疫抑制剂，近年来开始试用治疗多种自身免疫性疾病。本研究探讨MMF对老年SLE的外周血T细胞、B细胞、NK细胞水平变化的影响。

1 材料与方法

1.1对象与方法 依据1997年美国风湿学会(ACR)修订的SLE分类诊断标准选取30例2011年1月到2012年1月吉林大学第一医院老年SLE(≥60 岁)［1］，男2 例，女28 例，年龄(59.40 ±0.96)岁，系统性红斑狼疮活动指数(SLEDAI)12(4～32)，抗-双链DNA阳性率82%，C3为0.42(0.31～0.92)，C4为0.13(0.04～0.20)。将SLE患者随机分为MMF联合激素治疗组，给予 MMF 600 mg/(m·d)口服，1 mg/(kg·d)泼尼松龙静点;单纯激素治疗组，给予泼尼松龙1 mg/(kg·d)静点，每组15例患者，均治疗4周。治疗中，除激素和MMF外，仅给予其他对症支持治疗，但对患者的淋巴细胞水平均无影响。SLE疾病活动指数(DAI)≥6分为疾病活动期。所有SLE患者均为初发SLE，排除系统性硬化、肌炎或其他自身免疫疾病，或过去的6个月已经给予免疫抑制剂或糖皮质激素治疗的SLE患者。同期门诊健康患者30例，男1例，女29例，年龄(59.20±1.151)岁。既往无风湿病及其他重大疾病病史。

1.2流式细胞技术检测外周血淋巴细胞比例 于治疗前及治疗后4周采集所有研究对象的外周血，采用各种单抗染色及流式细胞术测定各淋巴细胞亚群的分数比。每个采样管采集50 μl血液，加入5 μl单克隆抗体。单抗包括：FITC偶联CD4单克隆抗体、PE偶联CD8单克隆抗体、PerCP偶联CD3单克隆抗体、FITC偶联 CD3单克隆抗体，PE偶联CD16CD56单克隆抗体，PE偶联CD19抗体，样本在室温下放置0.5小时，之后加入美国BD公司生产的FACS细胞裂解液，静置6分钟。用PBS缓冲液洗过2遍后，应用流式细胞仪的数据分析软件(v5.7.2)分析细胞水平。

1.3统计学方法 计量资料以中位数和范围表示，计数资料以率表示，采用SPSS14.0统计软件分析秩和检验和卡方检验。两个变量的关系用等级相关分析评估。

2 结果

2.1老年SLE患者淋巴细胞亚群的水平变化 与对照组比较，老年SLE患者CD3+CD4+Th细胞明显降低(P＜0.000 1)，CD3+CD8+Ts细胞明显升高(P=0.000 3);老年SLE患者CD3-(CD16CD56)+NK、CD3+(CD16CD56)+NK细胞较对照组明显降低(P＜0.000 1)，而CD3-CD19+B细胞较对照组明显增高(P=0.000 2)。

2.2老年SLE患者外周血淋巴细胞亚群与SLEDAI的相关性 老年SLE患者外周血CD3-CD19+B细胞与 SLEDAI呈正相关性(P=0.003 4，R=0.267 8)。但我们发现CD3+CD4+Th(P=0.071 0，R=0.315 0)、CD3+CD8+Ts(P=0.126，R=0.245 6)、NK(P=0.098 7，R=0.574 1)细胞与SLEDAI活动指数无明显相关性。

表1 老年SLE患者淋巴细胞亚群的水平变化(%)Tab．1 The change of lymphocyte subsets in elderly SLE patients(%)

2.3MMF对老年SLE患者外周血淋巴细胞亚群的影响 单用激素组治疗后CD3-CD19+B细胞较治疗前明显降低(P=0.035 9)。MMF联合激素组，治疗后CD3+CD4+Th细胞较治疗前明显升高(P=0.002)，CD3-CD19+B细胞较治疗前明显降低(P＜0.000 1)。MMF联合激素组对淋巴细胞亚群的影响优于单用激素组。见表2。

表2 MMF对老年SLE患者外周血淋巴细胞亚群的影响Tab．2 The effect of MMF on levels of peripheral blood lymphocyte subsets in elderly SLE patients

3 讨论

T、B细胞亚群数量异常在SLE发病中的作用近年来一直是国内外学者研究的热点。本研究发现老年SLE患者外周血CD4+T细胞数目降低和CD8+T细胞数目增加，进一步导致CD4+/CD8+比例失调，与既往研究成果相一致［2］。研究表明尽管在SLE患者外周血CD4+T细胞数目降低、CD8+T数目增加，但是仍然可以导致B细胞过度活化，进而产生各种自身抗体，引起发病［3］。

B细胞功能亢进，过度活化产生大量的自身抗体，可以导致SLE的发生和发展［4］。活动期SLE患者外周血B细胞中，TRAF作为细胞凋亡调控中的TNF信号负性调节因子，可能通过和抗凋亡蛋白连接而抑制其凋亡，从而导致B细胞存活延长，产生更多的自身抗体而致病［5］。本研究亦发现老年狼疮患者B细胞明显升高，且与SLEDAI呈明显正相关。

有文献报道NK细胞数量在SLE患者体内明显下降［6］。本研究结果也提示，老年SLE患者NK细胞数较正常对照组明显降低。研究发现在SLE中由于循环免疫复合物和血清细胞因子所引起的NK细胞凋亡可能导致NK细胞的减少［7］。

治疗SLE的药物主要是糖皮质激素和免疫抑制剂。MMF被认为是治疗狼疮肾的重要治疗方法，且毒副作用小［8］。研究证实，MMF具有高度抗B、T细胞增生作用，减少自身抗体及抗DNA抗体的产生［9］，从而减少循环免疫复合物浓度及相应减少免疫复合物在肾脏的沉积，延缓肾脏损害。但迄今为止，有关MMF治疗作用的研究仅限于狼疮肾，并且它对于肾脏相关的非肾脏临床表现的症状的研究并不多。本研究发现，激素和MMF联合治疗4周后，CD3+CD4+Th细胞较治疗前明显升高，B细胞较治疗前明显降低。单用激素治疗4周后，仅有B细胞较治疗前明显降低，说明对于老年SLE患者MMF和糖皮质激素都可以调节免疫细胞的分布，但联合应用MMF和激素在调节免疫细胞的效应方面优于单用激素，为了证明此项研究，还需要大样本试验。

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3 Filaci G，Bacilieri S，Fravega M et al．Impairment of CD8+T suppressor cell function in patients with active systemic lupus erythematosus［J］.J Immunol，2001;166(10)：6452-6457.

4 张传文.系统性红斑狼疮发病机制的研究进展［J］.医学信息，2011;7(9)：3165-3166.

5 周 玲，柴华旗，戴 兰 et al.系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞CD40、TRAF的表达及其意义［J］.苏州大学学报，2008;28(3)：441-443.

6 Park Y W，Kee S J，Cho Y N et al．Impaired differentiation and cytotoxicity of natural killer cells insystemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum，2009;60：1753-1763.

7 Shibatomi K，Ida H，Yamasaki S et al．A novel role for interleukin-18 in human natural killer cell death：high serum levels and low natural killer cell numbers in patients with systemic autoimmune diseases［J］.Arthritis Rheum，2001;44：884-892.

8 Cortés-Hernández J，Torres-Salido M T，Medrano A S et al．Longterm outcomes-mycophenolate mofetil treatment for lupus nephritis with addition of tacrolimus for resistant cases［J］.Nephrol Dial Transplant，2010;25：3939-3948.

9 Allison A C，Eugi E M.Mycophenolate mofetil arationaly de sigmed immunosuppressive drug［J］.Clin Tram Splant，1993;7：96-112.