AFP、GGT、GPC3联合检测在原发性肝癌诊断中的应用

白吉明，李建华，王新杰，刘 雷，钱 浩

(1.承德医学院，河北承德 067000;2.承德市中心医院肿瘤科)

原发性肝癌(primary hepatic cancer，PHC)是一种恶性程度高、预后差的恶性肿瘤[1]。由于缺乏理想的血清学检测指标，大多数患者确诊时已经处于中晚期，缺乏有效的治疗手段，预后较差。目前治疗PHC最有效的手段是手术治疗，对于晚期PHC患者，切除后复发率高、易转移，故早期诊断PHC对提高患者生存率和生活质量尤为重要，并且能减轻患者的经济负担。血清肿瘤标志物是诊断PHC的重要指标，其中甲胎蛋白(AFP）是诊断PHC的重要指标之一，但30%-40%的PHC患者AFP为阴性。因此，寻找更特异、敏感的肿瘤标志物和诊断方法对于研究肝癌显得尤为重要。

1 材料与方法

1.1 材料 承德市中心医院2009年8月-2011年7月住院经手术确诊的PHC患者55例，年龄30-81岁。选取同期体检、肝功能正常的健康者30例作为对照，年龄25-71岁。两组患者年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义，具有可比性(P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 检测指标:空腹采集外周血2ml，无溶血、脂血，2000r/min离心8min，分离血清，-20℃保存。采用电化学发光免疫分析仪(罗氏公司）及配套AFP化学发光免疫试剂检测AFP;采用GGT速率法检测试剂盒、8150全自动生化分析仪(日本日立公司）检测谷氨酰转肽酶(GGT）;采用酶联免疫法检测血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3）(美国BioMosaics公司)。

1.2.2 Cut-off值确定:AFP≥25μg/L为阳性[2]。GGT≥50U/L为阳性。绘制受试者工作曲线(receiver operator characteristic curve,ROC)，以曲线下面积最大确定GPC3，GPC3≥2ng/ml为阳性。

1.3 统计处理 应用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。计量资料以(±s）表示，组间比较采用t检验;计数资料及率的比较采用χ2检验。敏感度:[a/(a+c)]，特异度:[(d/(b+d)]，准确度[(a+d)/(a+b+c+d)](a为真阳性数，b为假阳性数，c为假阴性数，d为真阴性数）。联合检测判断标准:组合中任何一项超过临界值，即判断为阳性;组合中所有值均低于临界值，则判断为阴性。

2 结果

2.1 各标志物检测结果 PHC患者的AFP、GGT、GPC3明显高于健康人群，差异具有统计学意义(P＜0.01）。见表1。

表1 两组患者血清AFP、GGT、GPC3水平检测结果(±s）

表1 两组患者血清AFP、GGT、GPC3水平检测结果(±s）

组别 例数 AFP(μg/L)GGT(U/L)GPC3(ng/L)对照组 30 28.2±5.3 25.7±12.7 107.6±11.3 PHC组 55 242.3±12.5 322.4±78.12 321.5±23.7 t 5.86 2.49 4.33 P ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

2.2 PHC组患者各指标的阳性率 GPC3的ROC曲线:曲线下最大面积为0.755，95%可信区间为0.644-0.866，标准误为0.057(见附图）。PHC组患者各指标阳性率(敏感度）见表2;在AFP＜25μg/L的39例患者中，GPC3阳性率为82.0%(32/39）、GGT阳性率为89.7%(35/39）。

附图 GPC3的ROC曲线图

2.3 AFP、GPC3、GGT单独检测对PHC的诊断价值 三个指标诊断PHC的敏感度依次为GGT＞GPC3＞AFP，特异度:GPC3＞AFP＞GGT，准确度:GPC3＞AFP＞GGT。特异度及准确度GPC3最高，敏感度虽然GGT高于GPC3和AFP，但其特异度仅为66.7%，故单独检测诊断PHC GPC3检出率最高(见表2）。

2.4 三项指标联合检测诊断PHC的价值 三个指标联合检测时，敏感度依次为AFP+GGT＞GPC3+GGT＞AFP+GPC3;特异度及准确度AFP+GPC3最高;AFP+GPC3优于任一单独指标。三项指标联合检测敏感性及准确度虽有所升高，但特异度明显下降;三项指标联合检测与AFP+GPC3比较，敏感度及特异性无明显差异(P＞0.05)(见表2）。

表2 AFP、GGT、GPC3单独及联合检测诊断PHC的效果[%(例数)]

3 讨论

PHC是我国常见肝脏肿瘤,在高危人群中，早期检测和诊断可明显提高远期生存率，目前临床上尚无单一指标能够明确诊断。

AFP是人胎儿血清中发现的一种专一性的甲种球蛋白，长期以来，AFP作为诊断肝癌的最佳标志物，对PHC的诊断和治疗起着重要作用。目前国内的研究显示，AFP以25μg/L为阳性界值，诊断PHC的敏感度为75%-90%[3]。如此，仍有10%-20%的PHC患者血清AFP偏低或是阴性，发现时往往肿瘤体积较大，中位生存率低，预后差。另外一些良性肝病患者血清AFP也有升高现象，使单独应用AFP诊断PHC有一定的局限性。GPC3是通过磷脂酰糖基锚定在细胞膜上的硫酸乙酰肝素聚糖蛋白，属于分泌蛋白，在细胞增殖与分化中发挥重要作用，通过结合胞外基质、生长因子和蛋白酶等对细胞生长分化以及肿瘤形成和转移起重要作用。GPC3的血清浓度与AFP的浓度无相关性，在AFP阴性的PHC诊断中有重要作用。GGT广泛存在于人肝、肾、胰腺、肠管等组织器官中，主要分布于这些组织中具有高度分泌功能的细胞膜上。GGT是人肝脏疾病中检出阳性率最高的酶。研究发现，PHC患者血清GGT升高，提示GGT与PHC的相关性，但目前尚未得到广泛关注。

本研究选择AFP、GGT、GPC3三个指标联合检测，结果显示GGT对诊断PHC的敏感度为90.9%，高于AFP和GPC3。因此，对于GGT升高的患者，应提高警惕，应给患者尽早行肿瘤标志物联合检测，消化系B超、CT检测，以及密切观察病情变化。需要指出的是，GGT虽然敏感度高，但特异度比较低，需要配合其它指标联合检测，以提高诊断的准确性。

为提高诊断率，许多医学科研工作者尝试应用AFP联合其它肿瘤标志物对PHC进行诊断，均取得一定效果[4-6]。本研究显示，应用单个指标诊断时，当AFP≥25μg/L时，诊断的特异度为83.3%，而敏感度只有74.5%，GPC3的特异度为86.7%，与AFP比较差异无统计学意义(P＞0.05）。当联合检测多项指标进行诊断时，AFP联合GPC3诊断的敏感度为92.7%，准确度为85.9%。当三项指标联合检测时，敏感度虽达到98.2%，但特异度下降至46.6%。因此，AFP联合GPC3的诊断率最高。在PHC的血清学诊断中，血清GPC3是AFP最重要的互补指标，AFP联合GPC3能显著提高PHC诊断的灵敏度和特异度。

[1]汤钊猷.现代肿瘤学[M].第2版.上海:上海医科大学出版社，2001.553.

[2]Stefaniuk P, Cianciara J, Wiercinska-Drapalo A.Present and future possibilities for early diagnosis of hepatocellular carcinoma[J].World J Gastroenterol, 2010, 16(4): 418-424.

[3]Gupta S, Bent S, Kohlwes J.Test characteristics of alphafetoprotein for detecting hepatocellular carcinoma in patients with hepatitis C.A systematic review and critical analysis[J].Ann Intern Med, 2003, 139(1): 46-50.

[4]Marrero JA, Feng Z, Wang Y, et al.Alpha-fetoprotein,desgamma carboxyprothrombin, and lectin-bound alpha-fetoprotein in early hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterology, 2009,137(1): 110-118.

[5]中国抗癌协会肝癌专业委员会.原发性肝癌的临床诊断与分期标准[J].中华肝脏病杂志，2001，9(6):324.

[6]盛家和，曹伟娟，焦扬.AFP、铁蛋白、CEA、CA199的联合检测对原发性肝癌的诊断[J].中国卫生检验杂志，2009，19(10):2339-2341.