疗癣卡西甫散的药效学研究

彭晓明 霍仕霞 吴培培 闫明 高莉

[摘要] 目的：探讨疗癣卡西甫散的药效作用，并比较传统粉末制备与现代工艺制备间药效的差异。方法：根据药物对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂变化的作用以及药物含药血清对角质形成细胞增殖作用的影响，评价药效作用，并对比分析传统粉末制备组（粉末组）与现代工艺制备组（浸膏组）之间的药效。结果：疗癣卡西甫散各制备组均能够显著抑制小鼠阴道上皮细胞的有丝分裂，对角质形成细胞的增殖具有抑制作用,且现代工艺制备组对小鼠阴道上皮细胞的有丝分裂和角质形成细胞的增殖抑制作用较之传统粉末组有所增强。结论：疗癣卡西甫散对银屑病具有治疗作用，且现代工艺制备组的药效作用明显优于传统粉末制备组。

[关键词] 疗癣卡西甫；银屑病；药效；评价

[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A[文章编号]1673-7210（2011）11（c）-064-03

Study on the effect of Liao Xuan Kaxipu San

PENG Xiaoming1,2, HUO Shixia1,2, WU Peipei3, YAN Ming1,2, GAO Li1,2

1.Pharmaceutical Institute of Xinjiang Uyghur Traditional Medicine, Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830049, China; 2.Key Laboratory of Xinjiang Uyghur Traditional Medicine Prescription, Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830049, China; 3.College of Pharmaceutical, Shihezi University, Xinjiang Uygur Autonomous Region, Shihezi 832003, China

[Abstract] Objective: To investigate the medicine effect of Liao Xuan Kaxipu San and compare the effect differences between traditional powder and modern technics. Methods: The medicine effect differences were evaluated by observing the mitosis changes in mice vaginal epithelial cell and the influence of the proliferation effect to keratinocytes in medicated serum, then the medicine effects between traditional powder group (powder group) and modern technics group (extracts group) were compared and analysed. Results: All groups of the Liao Xuan Kaxipu San could restrain the mitosis in mice vaginal epithelial cell and the proliferation effect to keratinocytes, and the inhibition effect in the modern technics group was stronger than that in the traditional powder group. Conclusion: The Liao Xuan Kaxipu San has treatmental effect on psoriasis and the effect of the modern technics is better than that of the traditional powder group.

[Key words] Liao Xuan Kaxipu San; Psoriasis; Medicine effect; Evaluate

银屑病是常见的慢性炎症性皮肤病之一，顽固且易复发。由于其发病机制较为复杂，且有机体免疫系统参与，因而其治疗在世界范围内仍属医学难题。银屑病在维吾尔医学中被称之为“库岜”，目前其发病机制尚未完全明确[1]。维吾尔医理论认为，人体内碱性黏液质过剩及沉积，阻止血液的正常运行，机体气质异常，影响了皮肤的营养力、摄住力、生长力等，从而导致了银屑病的发生[2]。疗癣卡西甫散是在维吾尔医药学古方的基础上研制而成的复方制剂，被广泛应用于皮肤瘙痒、体癣、银屑病等皮肤疾病的治疗。该药由欧菝葜（洋菝葜）、菝葜和黄连三味主药组成，具有燥湿、止痒、清除碱性异常黏液质的作用[3]。本实验主要通过研究疗癣卡西甫散传统粉末制剂与现代工艺提取浸膏对小鼠银屑病模型（体内）和角质形成细胞（体外）的药效作用，为疗癣卡西甫散的临床用药、药理学研究以及剂型的改良提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 实验动物与细胞培养

昆明小鼠，体重（20±2） g；SD大鼠，体重180～200 g，均由新疆实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（新）2003-0002，使用许可证号：SYXK（新）2003-0003。

人永生化角质形成细胞株HaCat购自于中国典型培养物保藏中心。将HaCat细胞接种于含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的DMEM（高糖）培养基中，置于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养。

1.2 主要试剂

己烯雌酚注射液（上海通用药业股份有限公司，国药准字H31021403）、消银颗粒（陕西康惠制药股份有限公司，国药准字Z20000019），噻唑蓝、秋水仙碱（Sigma公司）、高糖（DMEM）培养基（GIBCO产品）、胎牛血清（杭州四季青生物工程科技有限公司）、氨苄青霉素钠和硫酸链霉素（Amersco公司）。

1.3 实验用药

疗癣卡西甫散传统粉末制备组由山东倍力公司负责药材的超微粉碎。疗癣卡西甫散浸膏组由新疆维吾尔医药研究所基础医学研究室提取浓缩，重新组方。

2 方法与结果

2.1 疗癣卡西甫散对小鼠阴道上皮细胞模型的抑制作用

取昆明种雌性小鼠80只，适应性喂养3 d后，称取体重，随机分成8组，分别为空白对照组、消银颗粒组（阳性药组）、粉末高剂量组、粉末中剂量组、粉末低剂量组、浸膏高剂量组、浸膏中剂量组、浸膏低剂量组。参照文献方法[4-5]，各组小鼠以0.2 mg的己烯雌酚腹腔注射，1次/d，连续3 d，使小鼠处于雌激素期。从第4天起，开始对小鼠灌胃给药。空白对照组用生理盐水灌胃，阳性药组灌以消银颗粒1.365 g/kg。粉末高剂量组和浸膏高剂量组（20×临床用药剂量）浓度为10.4 g/kg，粉末中剂量组和浸膏中剂量组（10×临床用药剂量）浓度为5.2 g/kg，粉末低剂量组和浸膏低剂量组（5×临床用药剂量）浓度为2.6 g/kg，每日1次，连续给药30 d，所有用药剂量均折算成生药量。期间，所有小鼠每隔2 d注射1次己烯雌酚，以稳定动物模型。末次（给药第30天）给药1 h后，所有小鼠注射秋水仙碱2 mg/kg或长春新碱6 mg/kg，使有丝分裂停止于M期便于计数，5 h后处死小鼠。取小鼠阴道标本，用10%甲醛固定，石蜡包埋，HE染色。制片流程：石蜡切片→二甲苯脱蜡→无水乙醇→95%酒精→水洗→苏木素→HCl分化→水洗→伊红染色→95%酒精→无水乙醇→二甲苯→光学树胶封片→烘片。病理切片制备完成后，在光学显微镜（最好目镜带有刻度，便于计数）下观察小鼠阴道上皮细胞的有丝分裂情况，拍照。并计算出200个基底细胞的有丝分裂数，然后核算出每100个细胞的有丝分裂数。利用SPSS 17.0软件统计分析数据，并进行t检验，以此评价疗癣卡西甫散对小鼠阴道上皮细胞模型的抑制作用。具体的结果，见图1和表1。

1.空白对照组；２.阳性药组；３.粉末低剂量组；４.浸膏低剂量组；

５.粉末中剂量组；６.浸膏中剂量组；７.粉末高剂量组；８.浸膏高剂量组

在光学显微镜下观察组织病理切片（图1）及统计数据分析（表1）结果显示，小鼠阴道上皮有丝分裂细胞主要分布在基底层，空白对照组中有丝分裂（核分裂）数最多，表明银屑病小鼠阴道上皮细胞有丝分裂模型造模成功。与空白对照组比较，疗癣卡西甫散粉末组和浸膏组对该模型均具有不同程度的有丝分裂抑制作用。此外，在相同给药剂量水平下，浸膏组在对小鼠阴道上皮细胞的有丝分裂的抑制方面，作用较之粉末组均有所增强。这可能与传统粉末制备组的有效药物成分始终保留在植物组织细胞之内有关，因细胞壁的阻隔作用，影响了机体对药效成分的直接吸收。

2.2 疗癣卡西甫散含药血清对HaCat细胞的增殖作用

选取40只SD大鼠，称取体重，随机分成8组，每组5只，分别为正常组、消银颗粒组（阳性药组）、粉末高剂量组、粉末中剂量组、粉末低剂量组、浸膏高剂量组、浸膏中剂量组、浸膏低剂量组。SD大鼠禁食12 h后，空白对照组用0.5%的CMC-Na灌胃，阳性药组灌以消银颗粒1.365 g/kg，其余各组用药剂量均折算成生药量，粉末高剂量组和浸膏高剂量组（20×临床用药剂量）浓度为10.4 g/kg，粉末中剂量组和浸膏中剂量组（10×临床用药剂量）浓度为5.2 g/kg，粉末低剂量组和浸膏低剂量组（5×临床用药剂量）浓度为2.6 g/kg，每天给药2次，连续给药3 d。末次给药2 h后，乙醚麻醉，腹主动脉取血，静置1 h，3 000 r/min离心10 min，吸取上层血清，56℃水浴灭活后，超净工作台中0.22 μm过滤除菌，-20℃冰箱保存备用。取对数期生长的HaCat细胞以1.0×104/ml接种于96孔培养板中，每孔100 μl；24 h后弃培养液，加入粉末和浸膏的高、中、低3种剂量含药血清和正常血清，各组设20%的血清浓度，每孔均为100 μl，设8个复孔；共培养48 h后，每孔加入20 μl MTT（5 mg/ml），孵育4 h，弃上清，每孔加入200 μl DMSO，待沉淀充分溶解后，用酶标仪测定490 nm波长下光密度（optical density，OD）值。生长抑制率=（1-给药组OD值/空白组OD值）×100%。见表2。

根据生长抑制率公式可知，生长抑制作用的强弱与药物的OD值密切相关，并呈一定的负相关。由表2的HaCat细胞给药结果显示，无论是传统粉末制剂还是提取后的浸膏制剂，均对HaCat细胞的增殖具有抑制作用（各给药组OD490明显较空白对照组降低），这表明疗癣卡西甫散具有治疗银屑病的作用。利用t检验发现，经现代工艺提取后，浸膏组对HaCat细胞的增殖抑制作用要明显强于传统的粉末制剂组。

3 讨论

银屑病的治疗相当复杂漫长，但维吾尔医药在治疗该病方面具有其独到之处。根据新疆40多家维吾尔医医院对银屑病的治疗效果显示，维吾尔医药在治疗银屑病方面，具有疗效显著，无毒副作用的特点。维吾尔医学非常重视人体的整体性，系统治疗，内外同治。依据维吾尔医理论，银屑病的病变虽在皮肤局部，但机体内环境的改变却是最为重要的。因而，银屑病的治疗应平衡体液，调整气质。清除碱性黏液质和异常黑胆质以清血之热，止痒消炎为主[6]。银屑病的发病机制，迄今为止仍无定论。现代医学研究表明，银屑病患者大都表现为角质形成细胞的过度增殖和分化异常[7]。当前，银屑病治疗药物的临床研究资料中，其非临床有效性评价所选模型，均选择了3个主要试验进行，即对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响试验、对大鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的影响试验、对动物心得安致耳廓皮损的试验[8]。该3项试验均是针对银屑病患者表皮的主要病理特点而设计，即角质形成细胞的过度增殖和分化异常。

疗癣卡西甫散是维吾尔医治疗银屑病的常用药方，目前关于该复方的研究资料很少，对于其治疗银屑病的作用机制也不明确。本研究分别通过动物体内（小鼠银屑病模型）和体外（角质形成细胞HaCat）药效学实验，揭示了疗癣卡西甫散可能是通过抑制角质形成细胞的过度增殖，来达到治疗目的的。但是，该药对角质形成细胞的增殖抑制机制，仍需进一步通过细胞和分子生物学实验来阐明。此外，疗癣卡西甫散是维吾尔药仅有的几个散剂当中的一个具有清除碱性异常黏液质的复方制剂。尽管其散剂粉状颗粒的比表面积大、容易分散、起效快、剂量容易控制，但由于其吸湿性较强，颗粒极易聚集，表面会形成一层水系黏膜，不利于机体对药效成分的吸收。加之，传统粉末制剂的有效药物成分仍保留在植物组织细胞之内，因细胞壁的阻隔作用，阻碍了机体对药效成分的直接吸收。这些都可能是导致传统粉末制剂不如现代工艺提取制剂组药物作用效果的原因。因而，利用现代医药学技术研究高效的维吾尔医制剂，突出维吾尔医的特色，是维吾尔医药发展的必由之路。本研究通过在相同给药剂量下，比较疗癣卡西甫散传统粉末制备组和现代工艺制备组的药效作用，从而为疗癣卡西甫散传统粉末制剂的制备工艺现代化奠定理论基础。

[参考文献]

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[7]陈玉欣,郑淑云,李巍,等.人角质形成细胞中K14基因及蛋白表达与角蛋白14反义寡核苷酸的抑制效应[J].中国组织工程研究与临床康复,2007,11(32):6490-6493.

[8]韩玲,程龙.申报治疗银屑病中药新药的现状及存在问题[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志,2008,7(1):54-56.

（收稿日期：2011-07-12）

[基金项目] 新疆维吾尔自治区自然科学基金项目（项目编号：2009211B38）。

[作者简介] 彭晓明（1983-），男，硕士，助理研究员；研究方向：分子药理学。

[通讯作者] 高莉（1981-），女，2009级在读博士，助理研究员；研究方向：皮肤病分子药理。