牙膏中三氯生的高效液相色谱法检测

田富饶，王旭强，孙文闪

（义乌出入境检验检疫局综合技术服务中心，浙江 义乌322000）

牙膏中三氯生的高效液相色谱法检测

田富饶，王旭强，孙文闪

（义乌出入境检验检疫局综合技术服务中心，浙江 义乌322000）

利用甲醇超声提取牙膏样品中的三氯生，采用高效液相色谱法（紫外检测器）测定了其含量；探讨了最佳提取和色谱检测条件.结果表明，该方法对牙膏中三氯生的检出限为1.0μg/g，在三氯生浓度10.5～210mg/L范围内线性关系良好，相关系数R＝0.999 98；样品加标回收率为99.81%～103.33%，相对标准偏差为0.03%.该方法具有简便、快速、准确、灵敏的优点，适用于牙膏中三氯生的测定.

牙膏；三氯生；高效液相色谱；检测

近些年，牙膏行业发展非常迅猛，多功能牙膏层出不穷.牙膏种类的发展及功效性的增强，意味着牙膏中辅助原材料越来越多，各种杀菌剂、抑菌剂等广泛地应用，近日刮起的“三氯生致癌”风波，让广大消费者无所适从.

三氯生（2，4，4－三氯－2′－羟基－二苯醚）是一种广谱抗菌剂，具有高效杀菌作用，可杀死金黄色葡萄球菌大肠杆菌和白色念球菌，对化脓性球菌、肠道致病菌和真菌具有消毒作用，同时对乙型肝炎病毒也有抑制作用.以往认为三氯生对环境和人体高度安全[1]，因此得到了广泛应用[2－3].1974年美国FDA提出报告，建立了有关杀菌剂的使用法规，规定最大允许浓度，对其使用的安全性进行了评价.欧共体（EEC）和GB7917 87标准均规定化妆品中三氯生的最大允许质量分数为0.3%.

目前三氯生的检测集中在日化产品、环境样品、纺织品等领域，主要采用高效液相色谱法（LC－UV、LC DAD、LC－MS）[4－7]、超高效液相色谱法[8]、GC－MS法[9]、分光光度法[10]等.作者采用高效液相色谱紫外检测器法（HPLC－VWD）建立了牙膏中三氯生的检测方法，该方法操作简单，快速、所用试剂毒性小，测定结果准确可靠，能满足对进出口牙膏中三氯生含量的监管需要.

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

高效液相色谱仪 （带紫外检测器）：Agilent 1200型，美国Agilent公司；超声波清洗器：D－78224，德国Elma公司；高速离心机：3－30K，德国Sigma公司；分析天平：AL204，梅特勒－托利多仪器上海有限公司；超纯水仪：Milli－Q，美国 Milli－Q公司；0.45μm 样品滤膜；甲醇：色谱纯；三氯生标准物 （99.5%），德国 Dr.Eh renstorfer公司.

1.2 标准溶液的配制

精密称取三氯生标准品0.052 5g，用甲醇溶解后定容至50mL容量瓶中，得到1.05g/L的三氯生标准储备液.分别精密量取一定体积的标准储备液用甲醇稀释成浓度依次为10.5、21.0、42.0、84.0、210.0mg L标准工作溶液.

1.3 样品前处理

准确称取样品1.000g于50.0mL具塞比色管中，加流动相至25.0mL，振摇，使试样与提取溶剂充分混匀，超声波提取20min，冷却至室温，转移至50mL刻度离心管中，以5 000r/min离心10min，上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用，同时作试剂空白.

1.4 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB－C18（4.6×250mm，5μm），柱温：30℃，流动相：甲醇－水（体积比为90∶10），流速：1.0mL/min，紫外检测波长280nm，进样量10μL.

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

在190～400nm波长范围内进行全波长扫描，三氯生标准液在230、280nm处都有较大的紫外吸收.但考虑到在280nm处其溶剂干扰较小，故选择280nm作为检测波长.标准品和样品的色谱图分别见图1和图2.

图1 三氯生标准溶液的色谱图Fig.1 Chromatogram of triclosan standard solution

图2 牙膏样品的色谱图Fig.2 Chromatogram of a tooth paste sample

2.2 提取溶剂的选择

先后用流动相（甲醇－水）、甲醇、无水乙醇作提取溶剂测定三氯生的紫外最大吸收，结果显示，它们均可作为溶剂使用，综合考虑，使用流动相作溶剂可以降低噪声、提高检测灵敏度、保护色谱柱，故选用流动相为提取溶剂.

2.3 流动相的选择

在文献报道的方法中[4－6]，流动相均采用pH值较低的磷酸盐缓冲液和醋酸溶液，该体系对色谱柱损害较大，对此我们进行了改进.采用甲醇－水的流动相体系可使三氯生达到有效分离.在此流动相中，甲醇含量增加，保留时间缩短，峰形更加对称，灵敏度高；甲醇含量减少，保留时间延长，灵敏度降低，峰形出现脱尾故选择甲醇－水的体积比为90∶10进行实验.

2.4 线性方程和方法检出限

将配制好的标准工作溶液（10.5～210.0mg/L）按照1.4条件进行高效液相色谱分析，以浓度－峰面积计算其线性方程和相关系数，得到线性方程：y＝10.300x＋4.000，相关系数R为0.999 98.以3倍信噪比（S/N＝3）计算其方法检出限为1.0μg/g.

2.5 精密度和加标回收实验

为检验本测定方法的准确性，本实验对浓度为84.0mg/L的三氯生标准溶液连续测定6次，得其相对标准偏差为0.03%；同时对牙膏样品进行加标回收实验.由表1可以看出，平均回收率为100.47%～102.94%，说明本方法的测定数据准确、可靠.

2.6 样品测定

按照所述实验步骤，对送检的牙膏样品进行测定.在测定10余批次的产品中，均检出含有三氯生，浓度范围为0.006%～0.036%，虽然都没有超出标准规定的化妆品中最大允许浓度质量分数（0.3%），但作者在此仍温馨提醒相关企业慎重使用该抗菌剂，并建议有关执法部门加强监督管理，以保障广大消费者的身体健康.

结语：建立了牙膏中三氯生含量的高效液相色谱测定方法，该方法简便、快速、准确、灵敏度高，为牙膏产品的质量监督提供了参考依据.

[1]BHARGAVA H N，LEONARD P A.Triclosan：application and safety[J].Am J Infect Contr，1996，24（3）：209－218

[2]DAUGHTON C G，TEMES T A.Pharmaceuticals and personal care products in the environment：agents of subtle chang[J].Environm Health Perspect，1999，107（6）：907－938.

[3]SINGER H，MULLER S，TIXIER C，et al.Triclosan：occurrence and fate of a widely used biocide in the aquatic environ ment：Field measurements in wastewater treatment plants，surface waters，and lake sediments[J].Environm Sci Techn 2002，36（23）：4998－5004.

[4]甘宾宾，廖庆明.HPLC法测定日化产品中三氯生的含量[J].广西预防医学，2005，11（3）：161－162.

[5]朱杰民，胡 静，杨 业，等.HPLC法测定牙膏中三氯生[J].中国公共卫生，2001，17（10）：886.

[6]李显波，郑 伟，安晓光.牙膏等口腔用品中三氯生含量的测定方法[J].牙膏工业，2009，19（1）：59－61.

[7]孙 静，赵汝松，王 霞，等.液液萃取－HPLC－ESI－MS法同步测定环境水样中的三氯卡班和三氯生[J].山东轻工业学院学报，2011，25（1）：35－37.

[8]王成云，谢堂堂，杨左军，等.超高效液相色谱法测定纺织品中三氯生的含量[J].分析测试学报，2010，29（12）：1231－1234.

[9]王成云，张伟亚，谢堂堂，等.气相色谱－质谱联用测定抗菌纺织品中抗菌剂三氯生的方法[J].产业用纺织品，2011（2）45－48.

[10]王成云，钟声扬，李泳涛，等.分光光度法快速测定纺织品中的三氯生[J].光谱实验室，2011，28（3）：1097－1100.

Determination of triclosan in tooth paste by highperformance liquid chromatography

TIAN Fu－rao，WANG Xu－qiang，SUN Wen－shan

（Center of Integrated Technical Service，Yiwu Entry－exit Inspection ＆Quarantine Bureau，Yiwu322000，Zhejiang，China）

Triclosan in tooth paste was extracted with methanolvia20min of ultrasound irradiation.Then the content of triclosan was determined by high－performance liquid chromatography（HPLC；ultraviolet detector），and the optimal conditions for extraction and HPLC analysis were discussed.Results show that the present method can be adopted to determine triclosan in tooth paste with a detection limit of 1.0μg/g；and good linear relationship is obtained in triclosan concentration range of 10.5－210mg/L.Corresponding correlation coefficient is 0.999 98，recoveries at addition levels of 31.5－94.5mg/L are 99.81%－103.33%，and relative standard deviation is 0.03%.The method is simple，rapid，accurate and sensitive，and is suitable for the determination of triclosan in tooth paste.

tooth paste；triclosan；HPLC；determination

O 657.7

A

1008－1011（2012）04－0042－03

2012－01－13.

田富饶（1981－），女，中级工程师，主要从事进出口化妆品、食品方面的理化检测工作，E－mail：tianfr－5430＠126.com.