草金鱼浸制标本最佳保存法与保色法的探讨

魏华 张玉淼 柳海东

摘要：以不同颜色（红色、黄色、黑色）的草金鱼为研究对象，不同体积分数（５％、８％、１０％）的福尔马林或７０％的酒精作为浸制液，并加入不同体积分数（０．８％、２％、５％）的苯酚与8%福尔马林组合，研究不同组配的浸制液对草金鱼标本的最佳保存及保色效果。结果表明，８％福尔马林与２％苯酚的混合浸制液对草金鱼标本色彩的保持效果最好。

关键词：草金鱼；浸制标本；保存；保色

中图分类号：Ｑ９５－３４＋２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）16－3358-03

Ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎ of ｔｈｅ Ｂｅｓｔ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｌｏｒ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Methods ｏｆ Grass Goldfish

ＷＥＩ Ｈｕａ，ＺＨＡＮＧ Ｙｕ－ｍｉａｏ，ＬＩＵ Ｈａｉ－ｄｏｎｇ

（Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ １００８６６，China）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒａｓｓ ｇｏｌｄｆｉｓｈ （Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ） of ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｌｏｒｓ （ｒｅｄ， ｙｅｌｌｏｗ， ｂｌａｃｋ）． Extract of ｆｏｒｍａｌｉｎ（５％， ８％， １０％）ｏｒ ７０％ ａｌｃｏｈｏｌ， ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆｐｈｅｎｏｌ （０．８％， ２％， ５％） ｗａｓ ａｄｄｅｄ to study the best preservation and color protection composite extract． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｗａｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｌｏｒ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｗａｓ ８％ ｆｏｒｍａｌｉｎ ａｄｄｅｄ ｗｉｔｈ ２％ ｐｈｅｎｏｌ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｇｒａｓｓ ｇｏｌｄfｉｓｈ（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ）； ｓｐｅｃｉｍｅｎ； ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ； ｃｏｌｏｒ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

鱼类色彩丰富，特别是观赏鱼（如金鱼、锦鲤、热带鱼等），色彩艳丽，极具观赏价值，受到人们的欢迎与喜爱［１］。浸制标本是延续鱼类色彩的一种方式，但是作为鱼类浸制标本，其艳丽的色彩往往难以保持。因此，制作色彩保持度高的鱼类标本，无论在科学研究还是在观赏效果上都具有一定的价值。

浸制标本的常用浸制液是福尔马林和酒精，用它们制作标本程序简单、购置方便、成本也较低，但却不能很好地保存彩色鱼类的颜色，会使其原有的天然色彩消失，最后成为千篇一律的淡褐色，从而降低了标本在教学中的直观性［２］。为了保存鱼类标本的天然颜色，需要对保存液加以处理。本研究以不同颜色的草金鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ）为试验对象，在浸制液中加入不同体积分数的苯酚溶液，探讨不同组配的浸制液对不同颜色草金鱼的保存及保色效果，以期在色彩艳丽的观赏鱼标本的保存和保色方法上探索出一条路径。

１材料与方法

１．１ 材料

１．１．１草金鱼草金鱼（红色、黄色、黑色），颜色鲜艳，鳞片、鱼鳍等外部形态良好，体长（７．５６±０．７６）ｃｍ，购于沈阳小津桥花鸟鱼虫市场。

１．１．２试剂甲醛（沈阳第一化学试剂厂），９５％酒精（沈阳第一化学试剂厂），苯酚（沈阳第一化学试剂厂），去离子水等。药品配置：分别配制５％、８％、１０％的福尔马林溶液，７０％酒精溶液，以及０．８％、２％、５％的苯酚溶液备用。

１．１．３仪器ＮＩＫＯＮ Ｅ２００显微镜（日本尼康公司）。

１．２方法

１．２．１草金鱼的处理采用窒息法将草金鱼处死，洗净粘附在鱼体上的污物和黏液，操作时动作要轻，避免弄掉鳞片及损伤鳍条，拍照并保存原鱼类色彩图片。

配制不同体积分数的浸制液腹腔注射，从腹鳍基部进针，注射量以使腹腔稍硬，胸鳍微张为度。注射后置于解剖盘中，用湿润纱布覆盖，待鱼定型后，再将鱼转入标本缸中［３］。

１．２．２试验分组将３种色彩的草金鱼随机分组，每组３种颜色草金鱼各８条。试验分为对照组与试验组。对照组试剂：５％福尔马林、８％福尔马林、１０％福尔马林、７０％酒精；试验组试剂：８％福尔马林＋０．８％苯酚、８％福爾马林＋２％苯酚、８％福尔马林＋５％苯酚。

１．２．３观测方法试验前肉眼观察试验用鱼的基本体色，记录并拍照；同时取不同处理组不同颜色草金鱼鳞片显微镜下观察。从浸制时刻开始，每月定期观察鱼的保存情况并拍照。观察时间为两年。

２结果与分析

２．１福尔马林及酒精的浸制效果

２．１．１外部观察采用５％、８％、１０％福尔马林及70%酒精分别浸制红色、黄色、黑色３种颜色的草金鱼。仅浸制２ ｄ，在３种体积分数的福尔马林浸制液中，红色草金鱼颜色全部退去，７０％酒精浸制液中红色约7 ｄ退去。黄色草金鱼在４种浸制液中均可见到黄色素溶解于其中。只有黑色草金鱼在以上浸制液中颜色稳定性良好。

在５％、８％、１０％福尔马林浸制组中，８％体积分数的福尔马林相对其他两组，草金鱼颜色虽然有不同程度改变，但鱼体光泽度、鳞片均保存完好，且硬度最佳。70%酒精浸制组的草金鱼鳞片有明显的外翻现象，可能是脱水太强所致。

２．１．２显微镜观察对３种颜色的新鲜草金鱼鳞片用普通显微镜观察，可以看到红色素细胞、黑色素细胞、黄色素细胞和富含折光性的虹彩细胞。其中，黑色素细胞呈星状，并有很多突起，细胞本身含有棕色、黑色和灰黑色的色素颗粒。红色素细胞构造类似黑色素细胞，内含红色素。黄色素细胞颗粒小，呈黄色或深橙色脂滴状。虹彩细胞有强折光性，呈多边形或卵圆形，无突起，内含鸟粪素颗粒。

试验阶段，取４个对照组不同颜色的鱼类鳞片显微镜观察，可以看到４种色素细胞均有不同程度变化。黑色素细胞相对比较稳定，形态变化不大，仅颜色暗淡；红色素细胞遇７０％酒精及福尔马林会慢慢退色，福尔马林为１～２ ｄ，酒精约7 ｄ；黄色草金鱼浸于７０％酒精及福尔马林中，结果黄色素溶解于其中；虹彩细胞在任何浓度的福尔马林中均镜检不到，但在70%酒精浸制液中却清晰可见。

对３个试验组鱼类鳞片进行镜检，添加２％苯酚试验组在任何观测时间其黑色素细胞颜色均深于其他色素细胞；红色素细胞颜色比较稳定，消退不明显；黄色素细胞和虹彩细胞在浸制１个月内镜检可以看到脂粒，但之后便逐渐消失。添加０．８％苯酚试验组黑色素细胞形态和色彩较稳定，黄色素细胞、红色素细胞观察不到，虹彩细胞也观察不到鸟粪素颗粒。添加５％苯酚试验组镜检基本看不到任何色素细胞，视野下几乎全为白色。

２．２苯酚与福尔马林组配的浸制效果

在８％的福尔马林中加入不同体积分数（０．８％、２％、５％）的苯酚，两年后３种颜色草金鱼颜色变化情况如表１所示。红色、黄色、黑色３种颜色比较，黑色草金鱼无退色现象，仅５％苯酚添加组鱼体表出现轻微氧化。红色和黄色草金鱼均在８％福尔马林+２％苯酚处理组保色效果最好，基本无退色现象，红色草金鱼色彩与浸制前比较没有变化，依然鲜艳。

２．３草金鱼体色在不同观测时间的变化情况

按观察点定期观察，以８％福尔马林与２％苯酚混合组对红色、黄色、黑色３种色彩的草金鱼保存与保色效果最好。经两年观察，证明效果可靠。观测结果如下：红色草金鱼色彩保持良好，颜色鲜艳；黑色草金鱼色彩保持良好，颜色光亮呈深黑色，体色无明显改变；黄色草金鱼色彩保持情况没有红色、黑色鱼好，有轻微退色，但也明显好于其他试验组。

３讨论

鱼类标本的保存方法与色彩的保存与多种因素有关［４，５］。如标本本身的呈色因素及其理化性质，与标本作用的固定剂及固定剂的理化性质、固定与保存的时间、固定样本的新鲜程度等。

３．１红色素细胞

红色素细胞有一个细胞核，内含红色素，系脂色素族，极易溶于酒精和乙醚［５］。王鉴衷［６］在保存液中加入ＮａＮＯ２和Ｋ２ＳＯ３等还原剂，结果发现它们能大量溶解色素，把上述两种溶剂加入２％苯酚再把红色鱼浸于其中，结果得到很浓的红色溶液，而且保存了数年不变色，可见红色素在还原性环境中十分稳定。用这种溶液加３％ Ｈ２Ｏ２试验，结果很快被漂白，可见它能被氧化变质。本试验中，红色素细胞遇７０％酒精及福尔马林会慢慢退色，福尔马林为１～２ ｄ，酒精约7 ｄ。８％福尔马林中添加２％苯酚，色彩保存良好。但过浓的苯酚（５％）对组织细胞有腐蚀作用，镜检为红色素细胞溶解，外观表现为体表变白，而且浸制液呈浑浊的红色，即红色素微溶于水所致。苯酚体积分数越大，還原性越大，而还原性物质能使红色素和黄色素溶解于水。

３．２黄色素细胞

黄色素细胞具二核，色素颗粒小，在光线投射下呈橙黄色或深橙色，由叶黄素组成，属脂色素族［５］。本试验中，黄色草金鱼浸于７０％酒精和福尔马林中，结果黄色素溶解于其中，可见黄色素对浸制溶剂的溶解程度很强。将黄色草金鱼浸制于８％福尔马林与２％苯酚溶液中，黄色依然退去。可见，黄色素的脂溶程度非常高。王鉴衷［６］把大量小黄鱼用甲醛固定于一个黑色有盖的塑料桶中慢慢取用，十多天后意外发现上面已变色，而底部的完好如初。由此可见，黄色素不但怕光而且怕氧，桶底环境光、氧两缺，所以能够保存。因此，对于黄色鱼类的保存，最好避光隔氧，才能良好地保存其体色。

３．３黑色素细胞

黑色素是酪氨酸在黑色素细胞中经酪氨酸酶作用聚合而成，能使鱼类呈现黑色和褐色［３］。本试验中，无论是传统的福尔马林保存法还是向福尔马林内添加不同体积分数的苯酚溶液，黑色素细胞均保存良好，黑色草金鱼体色基本没有改变，鳞片镜检可见黑色素细胞的分布。但若苯酚体积分数增大，不但不会增强色素细胞的保色能力，反而会破坏黑色素细胞，使鱼体黑色消失不见。可见，黑色素细胞的化学性质比较稳定，传统方法的彩色鱼类浸制标本，最后都变成枯草色，主要原因就是其他呈色色素细胞都先后消失，只剩下黑色素细胞的缘故。

３．４虹彩细胞

虹彩细胞由于内含鸟粪素晶体，可呈现较强折光性。这种折射作用使鱼类的颜色看起来更艳丽［５］。本试验中，不同颜色的新鲜草金鱼均可镜检到鸟粪素颗粒，外观有较强的折光性。对于浸制标本，虹彩细胞在不同体积分数的福尔马林浸制液第一、二个月显微镜下可以观察到，但两年后却看不到，表明已经和浸制液福尔马林缓慢作用而溶解、消失。而酒精浸制下的草金鱼，虽鳞片有脱水现象，但却可以清楚观察到有鸟粪素颗粒存在的虹彩细胞。所以，对以虹彩细胞为主的体表折射性较强鱼类的保存，切忌用福尔马林浸制液，可用酒精保存。

３．５苯酚

苯酚对色素性质温和，有轻度还原性，能抵抗氧化；ｐＨ值接近中性。根据其性质，本试验在使用时有几点需要注意：①鱼类体表存在黏液，浸制前需洗去依附在体表的黏液，以达到最佳效果；②苯酚透入性较差，浸制前先用２％苯酚腹腔注射，方能达到良好浸制效果；③苯酚对某些红色素有微溶现象，所以苯酚体积分数不宜太大，试验证明以２％为宜，否则色素容易溶解。

３．６固定时间和材料鲜度

由于不同色素细胞的稳定性不同，如果鱼类鲜度不好、开始分解的材料或固定剂体积分数过高、固定时间过长，都有损色素结构，不利于持久保色。同理，保存剂体积分数也要尽可能的低，但又必须保证对鱼类组织器官的良好保存，试验证明以８％福尔马林为好。另外，固定剂过浓或固定时间过久，还会破坏细胞结构，使水容易和原生质分离而渗出，并使标本在保存过程中皱缩。但有一点必须注意，即有色试验动物获得后必须尽快冷藏或固定以保证鲜度，最好浸制液中添加２％苯酚浸泡并在腹腔注射（因为苯酚渗透性差，不容易渗入）。

４小结

本试验主要以红色、黄色、黑色３种颜色的草金鱼研究彩色鱼类浸制标本保存与保色的最佳方法。试验结果表明，８％福尔马林中加入２％苯酚的混合浸制液对黑色、红色、黄色草金鱼的保色效果最好。但是，鱼类色彩繁多，除以上３种外，还有蓝色、绿色等，对这些鱼类颜色的保存，还需进一步研究，以期获得最佳保色法。

参考文献：

［１］ 庞红梅．让生物标本成为学生的良师益友［Ｊ］．卫生职业教育，２００５，２３（９）：６３．

［２］ 王玉欣．保色标本和透明标本的制作［Ｊ］．生物学杂志，１９９７（１）：４２．

［３］ 陈凯．生物标本的管理与维修［Ｊ］．安徽农业科学，２００５，３３（２）：３７１－３７２．

［４］ 黄永政．鱼类体色研究进展［Ｊ］．水产学杂志，２００８（1）：８９－９４．

［５］ 孟庆闻，苏锦祥，李婉端．鱼类比较解剖［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８７．４９－５３．

［６］ 王鉴衷．关于彩色鱼类、两栖类、爬行类浸制标本保色法的探讨［Ｊ］．浙江海洋学院学报（人文科学版），１９９４（３）：５４－５６．