GC-MS法测定虎杖膏中龙脑与异龙脑的含量Δ

易学东，娄方明，蔡义云（1.遵义医学院附属医院，遵义市563000；.遵义医学院，遵义市563000）

虎杖膏是我院自制的中药外用制剂，由虎杖、冰片、麻油等制成，具有清热解毒、消肿定痛之功效，用于治疗红肿而未溃烂的疮、痈、疔、疖及无名肿毒等症，在院内使用20余年，疗效明显，安全可靠[1，2]。方中冰片具有抗菌、抗炎、止痛的功效[3]，是虎杖膏的主要成分之一。为控制该制剂质量，笔者参考有关文献[4]，采用气相色谱-质谱（GC-MS）联用法测定虎杖膏中龙脑与异龙脑的含量（冰片含量以龙脑和异龙脑含量之和计），取得了满意效果。

1 仪器与试药

6890-5973N型GC-MS联用仪（美国Agilent公司）；BS224S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；SG3300H型超声波清洗机（上海冠特超声仪器有限公司）。

龙脑（批号：110881-200706）、异龙脑（批号：111512-200201）对照品均购自中国药品生物制品检定所；虎杖膏（批号：20100608、20100726、20100805）及阴性样品均由本院制剂室提供；甲醇和乙酸乙酯均为分析纯（成都市科龙化工试剂厂）。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液 精密称取龙脑对照品15.01 mg，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯使溶解并稀释至刻度，为龙脑对照品溶液；再精密称取异龙脑对照品6.08 mg，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯使溶解并稀释至刻度，为异龙脑对照品溶液；精密量取上述2种对照品溶液各2 mL，置同一10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，作为混合对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液 取虎杖膏约1 g，精密称定，置250 mL具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯30 mL，称定重量，超声（功率：180 W，工作频率：40 kHz）处理30 min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀后静置。吸取上清液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，精密吸取1 mL，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯定容，进样。

2.1.3 阴性对照溶液 取缺冰片的阴性样品约1 g，精密称定，照“2.1.2”项下方法制备阴性对照溶液，即得。

2.2试验条件与系统适用性试验

2.2.1 GC条件 色谱柱：Agilent HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；程序升温：初始温度为50 ℃，以3 ℃·min-1升至110℃，再以10℃·min-1升至230℃；汽化室温度：260℃；载气：高纯He，流速：1 mL·min-1；进样量：2 μL；分流比：20∶1。

2.2.2 MS条件 离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；电离方式：EI；电子能量：70 eV；溶剂延迟：5 min；质量扫描范围：30～500 amu。

2.2.3 系统适用性试验 分别精密吸取混合对照品溶液、阴性对照溶液与供试品溶液各2 μL，注入色谱仪，记录色谱图。结果，异龙脑、龙脑的分离度均为2.5，其理论板数按异龙脑和龙脑峰计算分别为153 820和116 663。异龙脑对照品和龙脑对照品分离完全，阴性对照无干扰，供试品图谱中在相同时间处出现与对照品同样的峰，且基线较平、杂质峰较少，并分离完全。GC-MS图见图1。

图1 气相色谱-质谱图A.混合对照品；B.阴性对照；C.供试品；1.异龙脑；2.龙脑Fig 1GC-MSA.mixed control；B.negative control；C.test sample；1.Isoborneol；2.borneol

2.3 线性关系考察

分别精密吸取混合对照品溶液0.2、0.5、1、1.5、2、2.5 mL，置10 mL容量瓶中，以乙酸乙酯定容，按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。以峰面积积分值（Y）对进样量（X，μg）进行线性回归，得异龙脑的回归方程为Y＝1.14E+09X+3.54E+06（r＝0.999 7，n＝6），线性范围为0.005～0.061 μg；龙脑的回归方程为Y＝1.18E+09X+1.01E+07（r＝0.999 7，n＝6），线性范围为0.012～0.150 μg。

2.4 精密度试验

精密吸取同一混合对照品溶液适量，在上述色谱条件下重复进样6次，测定峰面积积分值。结果，异龙脑的RSD＝0.81%（n＝6），龙脑的RSD＝1.18%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验

取同一批号样品适量，按“2.1.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果，异龙脑含量的RSD＝1.60%（n＝6），龙脑含量的RSD＝1.39%（n＝6），表明该方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

取制备好的同一供试品溶液适量，按上述色谱条件于0、2、4、6、8、10 h测定峰面积。结果，异龙脑的RSD＝0.83%（n＝6），龙脑的RSD＝1.21%（n＝6），表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.7 加样回收率试验

取同一批号已知含量的虎杖膏样品，精密称取约0.5 g，共6份，分别精密加入异龙脑和龙脑对照品溶液适量，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算加样回收率，结果见表1。

2.8 样品含量测定

取3批虎杖膏适量，分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，以峰面积计算样品中异龙脑和龙脑的含量，结果见表2。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1Results of recovery tests（n＝6）

表2 样品含量测定结果（mg·g-1，n＝3）Tab 2Results of content determination of samples（mg·g-1，n＝3）

3 讨论

虎杖膏中冰片的含量按处方的投料量计为23.0 mg·g-1，本次样品含量测定结果均在处方投料量的90%以上。考虑到原料冰片中含一定杂质、批量生产过程中有损耗等因素，建议检测虎杖膏中冰片的含量应不低于投料量的85%，即不低于19.55 mg·g-1。

冰片是易挥发性物质，在生产、运输、储存中方法不当均易造成其含量下降，从而影响药品的处方比例组成，进而影响药品的疗效，因此测定冰片的含量对控制药品质量有重要意义。

综上，本方法稳定、简便、灵敏、快速，可用于虎杖膏中龙脑与异龙脑的含量测定。

[1]黄 怡，王 为，匡菊香，等.虎杖膏的制备及临床疗效观察[J].贵阳医学院学报，2005，30（2）：178.

[2]罗世惜，潘红平，陈 羽，等.虎杖膏治疗化疗药物引起的静脉炎45例[J].陕西中医，2006，27（2）：211.

[3]吴寿荣，程 刚，冯 岩.冰片药理作用的研究进展[J].中草药，2001，32（12）：1 143.

[4]张开莲，叶 云，王 俊，等.毛细管气相色谱法测定雪抑乐中龙脑的含量[J].中国药房，2007，18（30）：2 355.