高效液相色谱法测定吉祥草根茎中芦丁的含量

王 倩 邹 坤

（天然产物研究与利用湖北省重点实验室三峡大学化学与生命科学学院,湖北 宜昌 443002）

吉祥草,又名玉带草、观音草、松寿兰、小青胆等,为百合科吉祥草属植物吉祥草（Reineckia Carnea（Andr.）Kunth.）的全草,以其全草入药,具有润肺止咳、接骨、平喘、祛风除湿等功效,现代药理研究表明吉祥草具有抗真菌[1]、溶血、止血、化痰、抗炎[2]、灭杀钉螺[3-5]及抑制磷酸二酯酶[6]等活性.吉祥草在民间用于抗类风湿性关节炎具有良好的疗效,且副作用少,吉祥草已收录为《湖北省中药材质量标准》品种.研究表明,吉祥草主要含甾体皂苷类和黄酮类[7-8].芦丁为黄酮醇苷类化合物,具有广泛的生理药理活性,尤其是其抗炎、抗氧化活性已经为大量学者证实.近年来国内有采用高效液相色谱法测定吉祥草中凯提皂苷元的含量[9],但尚未见文献报道测定吉祥草中黄酮类化合物的含量.文献已有报道[10]从吉祥草中分离得到芦丁,为了评价和控制吉祥草的品质,本实验建立了用高效液相色谱测定吉祥草根茎中芦丁含量的方法.该方法简便快速,分离度好,准确度高,可为吉祥草质量控制提供参考.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Varian 210分析型高效液相色谱系统（210型二元梯度泵、210型紫外检测器,美国Varian公司）；ME215S型十万分之一电子天平（德国Sartorius公司）；SZ-93自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）；乙腈为色谱纯（fisher公司）,水为二次蒸馏水（自制）.

吉祥草:采自中国湖北长阳；对照品:芦丁,购自Sigma公司,纯度≥98%,其它试剂均为分析纯.

1.2 色谱条件

色谱柱Diamonsil C18（250mm×4.6mm.id.,5 μ m）；流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液（28∶72,v/v）；流速:1.0mL/min；进样量:20μ L；检测波长:350nm；柱温:25℃.在该色谱条件下待测组分可达到基线分离如图1～2所示.

1.3 溶液的制备

对照品溶液:精密称取芦丁对照品13.0 mg置于25mL容量瓶中,配制成浓度为0.52mg/mL的芦丁储备液.

供试品溶液:晒干的吉祥草根茎,粉碎,取粉末1.0g,加95%乙醇10mL,密塞,70℃加热回流提取5 h,冷却至室温,取适量用微孔滤膜（0.45 μ m）滤过即得.

2 方法与结果

2.1 线性关系考察

取上述贮备液适量,用甲醇稀释,分别得浓度为0.13、0.26、0.40 、0.52、0.65 mg/mL 的芦丁系列标准溶液,按“1.2”项下色谱条件进样,记录峰面积与保留时间,以芦丁对照品浓度 x（mg/mL）为横坐标,峰面积y为纵坐标,绘制标准曲线,结果表明,芦丁对照品进样量在0.13～0.65 mg/mL范围内线性关系良好,其回归方程为:y=64237900x+641601（r=0.9999）.

图3 芦丁标准曲线

2.2 稳定性试验

取供试品溶液进样,在 2、4、8、12、24 h后分别进样20μ L,结果芦丁峰面积 RSD为1.25%（n=5）,表明供试品溶液室温下放置24h基本稳定.

2.3 精密度试验

分别准确吸取同一芦丁对照品溶液20 μ L,进样5次,峰面积积分值RSD（n=5）为0.97%.

2.4 重复性试验

取吉祥草粉末5份,分别按“1.3”项下供试品溶液测定方法测定,测得芦丁的平均含量为0.26%,RSD为2.67%.

2.5 加样回收试验

精密称定已知含量的供试品5份,分别加入与样品含量相当的对照品,按“1.3”项下供试品溶液测定方法,分别进样测定,结果见表1.

表1 芦丁回收率测定结果（n=5）

2.6 样品含量测定

取3份吉祥草粉末,每份约 1 g,精密称定,按“1.3”项方法制备供试品溶液,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,计算样品中芦丁的含量,计算公式为:y=64237900x+641601（r=0.9999）,结果见表2.

表2 样品测定结果（n=3）

3 分析与讨论

（1）实验结果表明,吉祥草根茎中芦丁的含量达到0.26%.采用色谱条件:乙睛-0.1%磷酸溶液（28∶72）；流速为:1.0mL/min；柱温25℃；检测波长为350 nm,芦丁与其他组分分离度好.

（2）该研究表明,HPLC测定吉祥草根茎中芦丁含量可行、稳定、简便、灵敏、准确,为双子叶植物药百合科植物吉祥草的开发利用及质量控制提供一定的参考.

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