何苏琴 王三喜 罗进仓 金秀琳 马福全 王生荣
作者简介: 何苏琴(1965-),女,江西修水人,学士,副研究员,主要研究方向植物真菌病害及资源微生物利用。E-mail:gshesuqin@sina.com
王生荣为通讯作者。
摘要: 报道了甘肃省新发现的蛇形虫草属真菌细蛇形虫草,并对其有性型(Ophiocordyceps gracilis)和无性型羽束孢(Paraisariadubia)的形态特征进行了描述。采集自甘肃夏河的细蛇形虫草的寄主为一种蝠蛾幼虫(Hepialus sp.),采集地海拔3 500 m。僵虫体表包裹黄褐色菌索;子座单生,从僵虫头前端或头背部长出,可孕部卵圆形或近球形,暗黄褐色,柄部淡黄褐色,圆柱形;子囊壳褐色,埋生,袋囊状或瓶状,子座少见。
关键词: 细蛇形虫草;羽束梗孢;形态特征
中图分类号: S 567.35文献标识码: A文章编号: 1009-5500(2011)04-0015-04
2006~2008年在甘肃冬虫夏草主产区的甘南藏族自治州调查采样时发现当地虫草交易市场中的部分冬虫夏草交易品中混杂有僵虫体表包裹黄褐色菌索、子座可孕部卵圆形或近球形的不同种类的虫草,经查证,该种类虫草均采挖自甘肃甘南藏族自治州夏河县。对10枚该种类虫草的内菌核进行了组织分离,羽束梗孢(Paraisariadubia)的分出率达100%,结合子座形态,将其鉴定为细蛇形虫草(Ophiocordyceps gracilis),为甘肃省新纪录虫草。
1 材料和方法
1.1 培养基及配方
PDA培养基 马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂12 g,水1 000 mL。
SPPDA培养基 马铃薯200 g,产地土20 g,蛋白胨2 g,葡萄糖20 g,琼脂12 g,水1 000 mL
1.2 标样采集
虫草标样于2008年5月采集自甘肃甘南藏族自治州夏河县高寒草甸,海拔3 500 m。
1.3 相关无性型真菌的分离
以每株虫草为单位,采用常规组织分离方法对内菌核进行分离培养。去除标样表面土粒及杂物,将分离组织剪成长5 mm节段,75%乙醇表面消毒后,灭菌水冲洗4~5次,用灭菌滤纸吸干表面水分后,在放于SPPDA平板上,20 ℃培养,每日检查,长出真菌及时转出纯化。30 d后统计分出率。
分出率(%)=(分出该菌的标样数/标样总数)×100
1.4 形态学鉴定
根据虫草子座的形态,及分离出的无性型菌株的产孢细胞和孢子形态(SPPDA和PDA平板上,20 ℃培养30 d),依据相关资料进行虫草种类的鉴定。
2 结果与讨论
依据有性型子座及其无性型产孢细胞和分生孢子的形态特征(图1),并与相关资料[1-3]进行比对,将采自甘肃夏河的虫草鉴定为细蛇形虫草。无性型羽束梗孢的分出率达100%。
有性型(Ophiocordyceps gracilis)子座(近成熟)僵虫体表包裹黄褐色菌索,子座单生,从僵虫头前端或头背部长出,不同于冬虫夏草的子座从僵虫头骨缝中长出。可孕部呈卵圆形或近似球形,暗黄褐色,柄部淡黄褐色,圆柱形,柄长10 mm,柄宽2.6 mm,可孕部4.4 mm×4 mm。
子囊壳(近成熟) 近成熟子囊壳褐色,埋生,袋囊状或称瓶状,(386.1~455.4) μm×(99.0~128.7) μm,av.(412.5±22.5) μm×(114.9±11.3) μm。
无性型(Paraisariadubia)培养性状 在SPPDA和PDA平板上,20 ℃培养,菌落乳白至鹅黄色,生长缓慢,初茸状,后呈束羽状。
产孢细胞 无色,瓶状小梗单生于产孢菌丝(宽约2.5 μm)上,或形成单至多层的轮枝,每轮着生3~6个小梗,或数个小梗生于棒状至头状孢梗上,小梗近中部
圖1 细蛇形虫草(Ophiocordyceps gracilis)及其无性型羽束梗孢(Paraisaria dubia)的形态特征
Fig.1 Morphological characters of Ophiocordyceps gracilis and Paraisaria dubia
1,2. 示内菌核、根状菌索及近成熟的子座;3~4. 无性型羽束梗孢菌落形态(PDA,20 ℃,30 d);5. 示埋生的子囊壳;6. 子囊壳孔口顶面观;7~10. 羽束梗孢分生孢子梗和产孢细胞形态;11,12. 羽束梗孢分生孢子形态。
标尺:1~4=10 mm;5,6=150 μm;7~12=20 μm
膨大,顶部尖。瓶状小梗(6.2~14.9) μm×(1.3~2.5) μm,av.(9.5±2.3) μm×(1.7±0.3) μm。
分生孢子 分生孢子无色,拟梭形,细杆状,针状,直或稍弯,(3.7~10.0) μm×(0.5~1.0) μm,av.(6.4±1.7) μm×(0.7±0.1) μm。
寄主昆虫 一种蝠蛾幼虫(Hepialus sp.)。
3 讨论
虽然笔者未获得细蛇形虫草的成熟子座,但依据近成熟子座及其无性型的形态特征,且其寄主为鳞翅目的蝠蛾幼虫,可与形态近似种,寄生于鞘翅目昆虫的拟细蛇形虫草区分开[4-6]。
须要提及的是,Samson 等[1]中描述的Paraisariadubia的分生孢子大小为(3.2~4.8) μm×0.8 μm,但在文中插附的形态线条图和电镜扫描图上,其分生孢子长度的量度可达8.2 μm。
细蛇形虫草分布于欧洲、中国、日本、北美洲、南美洲、北非等多个国家和地区[7],2003年Shresthal等[8]在尼泊尔也采集到了该虫草。
细蛇形虫草已知分布于我国云南、江苏、新疆、安徽[9,10]。在我国新疆等地,作为冬虫夏草入药使用[11],其发酵菌丝体所含成分与新疆产天然细虫蛇形虫草和青海产冬虫夏草所含成分性质相同,是替代天然冬虫夏草缓解市场急需的理想产品[12]。在新疆,细蛇形虫草产于阿尔泰林区的雪线附近,海拔1 250~2 000 m,生于半阳半阴坡,僵虫体外有菌索,子座少见[13],我们采集到的标本的形态特征与新疆的相似,在采集到的30枚标样中,只有2枚生有子座。采挖自甘肃夏河的部分冬虫夏草交易品中,细蛇形虫草混杂的比例可达1.00%~2.13%。
甘肃地处黄土高原、内蒙古高原和青藏高原的交汇地带,海拔大多在1 000m以上,四周为群山峻岭环抱。北有六盘山、合黎山和龙首山,东为岷山、秦岭和子午岭,西接阿尔金山,和祁连山,南壤青泥岭。境内地势起伏、山岭连绵、江河奔流,地形地貌复杂[14]。多样的生态和气候条件下,一定蕴藏有丰富的虫草种类资源,尚有待人们去探索发现。
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Ophiocordyceps gracilis, a new record in Gansu Province
HE Su-qin1,2,WANG San-xi3,LUO Jin-cang2,JIN Xiu-lin2,MA Fu-quan3,WANG Sheng-rong1
(1. College of Pratacultural Science,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China; 2. Institute of Plant Protection,Gansu Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730070,China; 3. Institute of Agricultural Sciences of Gannan Prefecture,Hezuo 747000,China)
Abstract: In this paper,Ophiocordyceps gracilis is reported as a new record in Gansu Province,and the morpha both teleomorph on Hepialus larva and anamorph on culture are described.Samples were collected from Xiahe County with altitude of 3 500 m. Infected-larvae are covered by several yellow brown synnemata.Stroma are produced in solitary per host,usually from head or thorax region.Stroma consists of a stout cylindrical stipe, with a pale yellow brown,and ovoid to subglobose,dark yellow brown-colored head.Perithecia are completely immersed in head,brown-colored,saccate or flask shaped.Stroma are formed infrequently.
Key words: Ophiocordyceps gracilis;Paraisaria dubia;morphological characters