正交试验优选肠腹宁颗粒中白头翁皂苷B4的提取工艺Δ

赖岳晓，刘佩沂，田素英（.广东中山市黄圃人民医院，中山市 528429；2.广东药学院，广州市 50006）

正交试验优选肠腹宁颗粒中白头翁皂苷B4的提取工艺Δ

赖岳晓1＊，刘佩沂1，田素英2#（1.广东中山市黄圃人民医院，中山市 528429；2.广东药学院，广州市 510006）

目的：优选肠腹宁颗粒最佳提取工艺。方法：以浸泡时间、加水量、煎煮时间、煎煮次数为考察因素，以白头翁皂苷B4的含量为评价指标，用正交试验优选提取工艺。结果：提取工艺为浸泡45 min，加水15倍量，分2次煎煮，每次煎煮40 min。结论：优选得到的工艺稳定、可行，重现性好。

肠腹宁颗粒；白头翁皂苷；提取工艺

肠腹宁颗粒是广东省中山市黄圃人民医院研制的临床常用制剂，由白头翁、木槿花等组成，主要用于急慢性肠炎、小儿腹泻的治疗，特别对慢性结肠炎有独特疗效。为了更好地发挥该制剂的疗效，笔者采用正交设计，以白头翁皂苷B4的含量作为工艺考察的指标，研究浸泡时间、加水量、煎煮时间、煎煮次数对其有效成分含量的影响，以优选提取工艺。

1 仪器与试药

TU-1810紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；HH-S型数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）；751型可见分光光度计（上海欣茂仪器有限公司）；AL104-IC型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。

白头翁[1]（产地：湖南，中山市桂源药业有限公司，批号：060215）；木槿花[2]（产地：山西，广州致信中药饮片有限公司，批号：090901）；白头翁皂苷B4对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111766-200601）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 白头翁皂苷B4含量测定

2.1.1 供试品溶液的制备 取肠腹宁颗粒适量，加水浸泡一定时间，加热煎煮数次，沸后保持微沸一定时间，过滤，合并煎出液，水浴浓缩至一定量，烘干，取出放冷，得干膏。取干膏0.1 g于10 mL离心管中，加入甲醇定容并溶解，以4000 r· min-1的转速离心15 min，取上清液作为供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取白头翁皂苷B4对照品5.5 mg，加甲醇溶解定容于10 mL容量瓶，得浓度为0.55 mg· mL-1对照品溶液，备用。

2.1.3 阴性对照溶液的制备 取缺白头翁的其他药材，按制备工艺制备阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.1.4 标准曲线的制备 精密称取白头翁皂苷B4对照品5.5 mg，加甲醇溶解定容于10 mL容量瓶，得浓度为0.55 mg·mL-1对照品溶液，备用。精密吸取白头翁皂苷B4对照品溶液0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35 mL，分别置5 mL容量瓶中，加入5%香草醛-冰乙酸溶液0.2 mL，浓硫酸0.8 mL，密塞，摇匀，于60℃水浴中加热15 min，取出，冷水浴冷却，加入冰乙酸摇匀，定容。以空白溶剂作空白，照紫外-可见分光光度法于475 nm波长处测定吸光度。以吸光度（Y）为纵坐标，白头翁皂苷B4检测浓度（X）为横坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝21.953X－0.0907（r＝0.9993）。结果表明，白头翁皂苷B4的检测浓度在0.011～0.0385 mg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系。

2.1.5 精密度试验 精密吸取白头翁皂苷B4对照品溶液0.1 mL，置于5 mL容量瓶中，按“2.1.4”项下方法操作，平行测定6次。结果，吸光度平均值为0.1295，RSD＝0.64%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.1.6 稳定性试验 精密吸取白头翁皂苷B4供试品溶液0.1 mL，置于5 mL容量瓶中，按“2.1.4”项下方法操作，分别放置0、30、60、90、120、150、180 min，测定各时间点的吸光度。结果，吸光度平均值为0.4230，RSD＝5.09%（n＝7），表明供试品溶液在180 min内稳定。

2.1.7 重复性试验 称取同一批样品6份，制成白头翁皂苷B4供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液0.1 mL，置于5 mL的容量瓶中，按“2.1.1”项下方法操作，测定吸光度。结果，吸光度平均值为0.3457，RSD＝3.85%（n＝6），表明方法重复性良好。2.1.8 加样回收率试验 称取已知白头翁皂苷B4含量的供试品5份，分别精密加入白头翁皂苷B4对照品适量，按“2.1.4”项下方法操作，测定吸光度，计算加样回收率。结果，平均回收率为98.8%，RSD＝1.27%（n＝6）。

2.2 提取方法的比较

根据参考文献[3，4]，称取白头翁、木槿花各20 g，分别加10倍水和10倍的80%乙醇，各超声、水煎煮20 min。按“2.1”项下方法测定白头翁皂苷B4的含量。结果，采用水煎法、水超声法、乙醇超声法得到的白头翁皂苷B4含量分别为0.1331、0.1294、0.1156 mg·g-1，表明水煎法提取白头翁皂苷B4含量略高于水超声法和乙醇超声法。因此，选择水煎法为提取方法。

2.3 单因素试验

2.3.1 浸泡时间的选择 称取白头翁、木槿花各20 g，共5份，分别浸泡15、30、45、60、90 min，各加12倍水，煎煮30 min，煎煮2次，过滤，合并煎出液，浓缩，干燥，制成干膏。按“2.1”项下方法测定吸光度。结果，白头翁皂苷B4的含量分别为0.312、0.397、0.386、0.375、0.324 mg·g-1，表明浸泡时间分别为30、45、60 min的吸光度比较大，从而选定这3个水平进行正交试验。

2.3.2 加水量的选择 称取白头翁、木槿花20各g，共5份，各浸泡30 min，分别加10、12、15、18、20倍水，煎煮30 min，煎煮2次，过滤，合并煎出液，浓缩，干燥，制成干膏。按“2.1”项下方法测定吸光度。结果，白头翁皂苷B4的含量分别为0.384、0.402、0.390、0.352、0.334 mg·g-1，表明加水量分别为10、12、15倍时的吸光度较大，故选定这3个水平进行正交试验。

2.3.3 煎煮时间的选择 称取白头翁、木槿花20各g，共5份，各浸泡30 min，各加水12倍，分别煎煮15、20、30、40、45 min，煎煮2次，过滤，合并煎出液，浓缩，干燥，制成干膏。按“2.1”项下方法测定吸光度。结果，白头翁皂苷B4的含量分别为0.292、0.369、0.384、0.382、0.328mg·g-1，表明20、30、40 min时的吸光度较大，从而选定这3个水平进行正交试验。

2.4 正交试验

根据预试验和单因素试验结果，选择药材浸泡时间（A）、煎煮时间（B）、加水量（C）、煎煮次数（D）作为考察因素，每个因素各取3个水平。以白头翁皂苷B4含量为评价指标，选用L（934）正交表安排试验。因素水平见表1；正交试验结果见表2；方差分析结果见表3。

表1 因素水平Tab 1 Factors and levels

由表2、表3可知，各因素影响程度分别为C＞A＞D＞B，因素C对提取工艺有显著性影响，最优提取工艺为A2B1C3D2，即浸泡45 min，加水15倍量，煎煮40 min，共煎煮2次。

2.5 工艺验证

按最优提取工艺制备3批样品，测定白头翁皂苷B4含量，进行工艺验证。结果，白头翁皂苷B4平均含量为0.2390 mg· g-1，平均收率为99.50%，表明该工艺稳定、可行，重现性好。

3 讨论

肠腹宁颗粒是由白头翁和木槿花等组成的中药复方制剂。白头翁是君药，故本试验以白头翁皂苷B4为指标，通过单因素水平筛选主要影响因素，再由正交试验优选最佳提取工艺试验表明，煎煮次数对本次试验结果影响不大，根据一般药物煎煮规律，故本试验采用煎煮2次。

中药通常采用浸泡、回流、超声辅助回流等方法进行提取。该成药中白头翁为主要成分之一，主含为皂苷类化合物，一般采用极性较大的溶剂（如乙醇、水等）进行提取。笔者通过预试验比较了乙醇、水的提取效率，发现水提取效率高于乙醇；又比较了煎煮法、超声辅助回流法的提取效率，从节约成本、时间和可行性角度考虑，最终选择水为提取溶剂，煎煮法作为提取方法。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：68.

[2] 江苏新医学院.中药大辞典（上册）[M].上海：上海科学技术出版社，1977：704-706.

[3] 马俊鹏，韩海霞，郭喜红，等.正交试验优选啤酒花总黄酮提取工艺[J].中国药房，2010，21（11）：994.

[4] 李巧如，王娥珍，张 鹏，等.正交试验优选泌尿宁颗粒提取工艺[J].中国药房，2008，19（6）：426.

Optimization of the Extraction Technology of Pulchinenoside in Changfuning Granules

LAI Yue-xiao，LIU Pei-yi（Zhongshan Huangpu People’s Hospital of Guangdong Province，Zhongshan 528429，China）
TIAN Su-ying（Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China）

OBJECTIVE：To optimize the extraction technology of Changfuning granules.METHODS：The extraction technology was optimized with soaking time，amount of water，decocting time and decocting times as factors and using the content of pulchinenoside B4as index.RESULTS：The optimal extraction technology was as follows：soaking for 45 min，adding 15-folds water，decocting twice，decocting for 40 each time.CONCLUSION：The optimum extraction is stable，feasible and reproducible.

Changfuning granules；Pulchinenoside；Extraction process

R283；R284.2

A

1001-0408（2011）15-1374-02

Δ中山市卫生局医学科研立项课题（2009079）

＊主管中药师。研究方向：中药学。E-mail：lliupeiyi@gmail.com

#通讯作者：副教授。研究方向：中药教学与研究。E-mail：zsxqtsy@126.com

2010-09-10

2011-01-10）

表2 正交试验结果Tab 2 Results of orthogonal test

表3 方差分析结果Tab 3 Results of variance analysis