两面针总碱对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

徐 露

重庆医科大学（重庆 400016）

两面针总碱对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

徐 露

重庆医科大学（重庆 400016）

目的 研究两面针总碱对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法 采用线栓法造成大鼠右侧大脑中动脉永久性阻塞模型。通过大鼠神经行为学评分、脑梗死指数、脑质量指数及脑组织病理学改变及生化检测等指标，观察3种剂量的两面针总碱对急性脑缺血的作用，尼莫地平为阳性对照。结果 与模型组相比，两面针总碱高、中剂量组脑缺血大鼠神经症状明显减轻，血清中超氧化物歧化酶含量上升，丙二醛含量降低，脑梗死指数和脑指数降低；HE染色显示各组神经元和组织间隙水肿程度明显减轻；而两面针总碱低剂量组所有指标与模型组差异不明显。结论高、中剂量的两面针总碱有明显的抗急性脑缺血作用。

两面针总碱 MCAO 局灶性脑缺血 TTC 梗死指数

缺血性脑血管病是当今死亡率和致残率较高的疾病之一。尼莫地平是一种脑保护剂，能有效地阻止Ca2+进入细胞内、抑制平滑肌收缩，达到解除血管痉挛，增加脑血流量的目的。两面针系芸香科花椒属植物，具有驱风化湿、消肿止痛之功效，主要用于治疗风湿关节痛、跌打扭伤肿痛 、神经痛、牙痛等。两面针生物碱为其主要有效成分。本文观察两面针总碱对急性脑缺血的治疗作用，为开发廉价有效的脑梗死治疗药物提供参考。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 两面针总碱超氧化物歧化酶购自安徽致和堂药业有限公司（批号：20090108，纯度＞85%）；尼莫地平购自武汉远城医药科技发展有限公司（纯度98%，批号：20090212）；氯化三苯基四氮唑（TTC）（Sigma 公司分装进口，批号：090820001）；超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20090318）；丙二醛（MDA）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20090318）

1.2 分组及给药 SD大鼠 （由重庆医科大学实验动物中心提供），体质量200～250g，雌雄兼用。随机分为假手术组、模型组、尼莫地平阳性对照组、两面针总碱组高、中、低剂量组，每组15只。各组均于术后3、6、12h灌胃给药。尼莫地平组按4mg/kg的剂量灌胃给药，两面针总碱高、中、低剂量组按照400、200、100mg/kg灌胃给药。假手术组及模型组灌胃等量溶剂。

1.3 模型制备 采用线栓法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。用4.5%水合氯醛1mL/100g腹腔注射麻醉。颈部正中切口，分离右颈总动脉及颈内、颈外动脉。在距颈动脉分叉5mm处，双线结扎颈外动脉，颈内动脉穿线备用，结扎右颈总动脉的近心端。在靠近动脉分叉的颈总动脉壁上剪一小口，插入一直径为0.2mm的尼龙鱼线（头端用石蜡薄薄地包裹），经颈内动脉进入大脑中动脉起始部，以阻断大脑中动脉的血流。插入线长约16mm时，有明显阻力感。结扎颈内动脉及尼龙线，防止插线脱落。假手术组除不插入尼龙线外其他手术步骤相同。

1.4 神经功能缺损程度评分 脑缺血24h后进行神经缺陷评分，采用5分制评分法。评分标准：0分为无神经缺陷，活动正常；1分为左前爪不能充分伸展；2分为大鼠向左侧转圈；3分为大鼠向左侧倾倒；4分为不能自主运动，精神萎靡。

1.5 脑梗死指数及脑指数测定 大鼠行为学评分后称取体质量，断头处死，取脑（切除小脑和嗅球），每组选取10个脑称质量。大脑置于-20℃低温冰箱中冻存30min，然后平均冠状切成5片，每片约厚1～2mm，置入2%氯化三苯基四氮唑磷酸缓冲液（pH7.4）中，37℃恒温水浴中孵育20min，取出后用甲醛固定。正常脑组织染成红色，白色部分为缺血区，将其用小刀剔出，称质量。 脑梗死指数=梗死灶湿质量（g）／脑湿质量（g）×100%；脑指数=脑湿质量（g）／体质量（g）×100%。

1.6 血清中SOD、MDA含量检测 大鼠断头后取血，4℃放置2h，取上层血清，用SOD、MDA试剂盒检测血清中SOD和MDA含量。SOD活性采用邻苯三酚自氧化法测定，MDA含量采用TBA法测定。

1.7 病理组织检查 每组剩余的5个脑组织置10%甲醛中固定，经脱水、浸蜡、包埋、切片后，HE染色，光镜下观察组织病理学变化。

2 结 果

2.1 大鼠神经功能缺陷程度评分及SOD、MDA含量检测结果见表1。尼莫地平和两面针总碱高、中剂量组均能降低大鼠神经功能缺陷程度评分 （P＜0.05或0.01），且三者作用相似 （P＞0.05），两面针总碱低剂量与模型组比较无差异，与尼莫地平相比有显著差异（P＜0.01）。与模型组比较，尼莫地平和两面针总碱高、中剂量组能提高大鼠血清中的SOD含量，降低MDA含量（P＜0.05或 0.01），且 3组间无明显差异（P＞0.05）。 而两面针总碱低剂量组与模型组相比无明显差异（P＞0.05），与尼莫地平组差异显著（P＜0.05或 0.01）。

表1 各组大鼠神经功能缺损程度评分及SOD和MDA含量比较 （±s）

表1 各组大鼠神经功能缺损程度评分及SOD和MDA含量比较 （±s）

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与尼莫地平组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

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2.2 各组脑梗死指数及脑指数比较 见表2。与模型组相比，尼莫地平和两面针总碱高、中剂量组能明显降低大鼠脑梗死指数（P＜0.05或 0.01）和脑指数（P＜0.05），而两面针总碱低剂量组与模型组无明显差异（P＞0.05）。

表2 各组大鼠脑梗死指数及脑指数比较 （%，±s）

表2 各组大鼠脑梗死指数及脑指数比较 （%，±s）

组 别 n 脑梗死指数假手术组 10 0脑指数0.53±0.02*模型组 10 26.75±5.32**0.67±0.11尼莫地平组 10 14.44±3.27** 0.58±0.06*两面针总碱高剂量组 10 14.36±3.54** 0.55±0.05*两面针总碱中剂量组 10 15.22±4.83** 0.57±0.06*两面针总碱低剂量组 10 27.12±5.71△△0.65±0.09△

2.3 病理组织学检查 模型组梗死侧脑组织水肿现象明显，神经元肿胀，周围间隙扩大，胞核浓缩，对侧脑组织未见病理改变。尼莫地平和两面针总碱高、中剂量组患侧苍白区缩小，光镜下显示梗死侧脑细胞水肿程度均明显减轻，梗死范围明显减小，且神经元细胞形态较规则。提示高、中剂量的两面针总碱能减轻脑水肿，维持神经元细胞形态的正常，有利于脑损伤的修复。

图1 各组大鼠脑组织病理切片（×40）

3 讨 论

建立缺血性脑损伤模型，经常采用的动物模型有全脑和局灶性脑缺血模型。临床上常见的是局部或区域性脑缺血，梗死多发生在大脑中动脉。本实验采用的MCAO模型与临床常见的脑卒中情况相似。

脑缺血导致神经元损伤的原因有很多观点，比较公认的有自由基学说、钙超载、兴奋性氨基酸毒性等。正常情况下，脑内细胞可由SOD，过氧化氢酶等来清除自由基［1］。缺血缺氧情况下，由于花生四烯酸等活化产生过多的自由基，由于自由基的链锁反应，进一步加重膜性结构的破坏和线粒体功能障碍，引起缺血损伤。所以，本实验中能观察到模型组脑神经元质膜破裂，水肿加重［2-5］。

本实验发现：高、中剂量的两面针总碱能够明显降低MCAO脑缺血模型大鼠的神经功能缺损程度评分、提高血清SOD含量、降低MDA含量、降低脑梗死指数和脑指数、改善脑病理形态，作用效果和尼莫地平相似。其作用机理可能是通过清除自由基而起到抑制细胞膜过氧化作用，从而对脑的细胞稳定起到积极的作用。本实验还发现，低剂量的两面针总碱对脑梗死的治疗无明显作用，说明其存在一定的量效关系。

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1004-745X（2011）08-1261-02

2011-01-05）