ELISA法检测献血者HBsAg应用分析

闫晓鹏 王林 张国平

ELISA法检测献血者HBsAg应用分析

闫晓鹏 王林 张国平

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)在献血者HBsAg检测中的应用、影响因素及解决方法。方法利用ELISA法，对无偿献血者血液标本进行HBsAg初检、复检两次检测;实验结果0.7≤s/co＜1的标本，使用原试剂进行双孔复试。结果13796份血液标本，HBsAg阳性共24份;0.7≤s/co＜1的标本57份，经双孔复试，阳性标本2份。结论应重视OD值接近临界值标本的复核工作;加强对血液标本、仪器设备及检测试剂的质量管理，规范实验操作，提高重复性;建议生产二步法试剂，避免产生高值钩状效应，提高血液安全水平。

ELISA;HBsAg

酶联免疫吸附试验(ELISA)是三大免疫标记技术之一，具有灵敏度高、特异性好、操作简便、技术可靠、试剂稳定等优点，是目前采供血机构对献血者进行乙型肝炎表面抗原(HB-sAg)检测的主要方法［1］。笔者对ELISA法在献血者HBsAg检测中的应用、影响因素及解决方法进行了分析总结，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2010年1月至2010年6月本站无偿献血者血液标本13796份。献血者献血前，均常规使用HBsAg金标试纸条进行初筛，结果阴性者方可献血。每位献血者均留取2份血液标本，其中1份为献血者献血时采血时留取的试管标本，作为初检标本;另1份为留取血袋上的导管血标本，作为复检标本。

1.2 试剂 初检HBsAg试剂盒由北京现代高达生物药业有限公司提供;复检HBsAg试剂盒由北京万泰生物技术有限公司提供。以上试剂均经中国药品生物制品检定所批检合格，在有效期内使用。

1.3 质控血清 HBsAg含量为2NCU/ml，北京康彻斯坦公司提供，在有效期内使用。

1.4 主要仪器 STAR全自动样本处理系统(瑞士HAMILTON公司);Xantus全自动样本处理系统(瑞士Sias公司);FAME全自动酶免分析系统(瑞士HAMILTON公司);SUNRISE酶标仪(瑞士TECAN公司);Columbus洗板机(瑞士TECAN公司);MK2洗板机(芬兰Thermo公司)。

1.5 方法 所有无偿献血者血液标本，均使用ELISA法进行初检、复检两次检测。按照试剂使用说明书要求，在STAR全自动样本处理系统及Xantus全自动样本处理系统控制微机上编写加样程序。加样过程中，全自动加样系统在吸取、分配不同的血液标本或液体试剂后，按设定程序自动清洗加样探针。加样程序完成后，分别将微板移至FAME全自动酶免分析系统，进行温育、洗板、显色、结果判读。实验结果呈阳性的标本，使用金标试纸条重新检测一次;0.7≤s/co＜1的标本，使用原试剂进行双孔复试。

2 结果

13796份血液标本，HBsAg阳性共24份。其中，s/co≥6的阳性标本11份，金标试纸条重新检测均呈阳性;s/co＜6的阳性标本13份，金标试纸条重新检测有3份为阳性，10份为阴性。实验过程中，共发现0.7≤s/co＜1的标本57份，经双孔复试，阳性标本2份。

3 讨论

ELISA法HBsAg试剂的灵敏度明显优于金标法［2］，在上述实验中也得到了证实。因此，尽管献血者经过了金标法初筛，在实验室对血液标本进行初复检检测时，还应认真对待，不可麻痹大意。还须重视OD值接近临界值(cutoff)标本的

［1］ 王培华.输血技术学.人民卫生出版社，2002:106-108.

［2］ 唐廷茂，冯治伟.血浆金标法快速筛查HBsAg在流动采血中的应用.临床输血与检验，2004，6(4):282.

［3］ 中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程，第3版.南京:东南大学出版社，2006，311.

［4］ 贾杰.乙型肝炎表面抗原检测的钩状效应.现代预防医学杂志，2005，32(5):496-498.

［5］ 李秋生，肖韶英，杨华文.乙型肝炎表面抗原检测中假阴性问题探讨.临床输血与检验，2002，4(2):34-35.

454000河南省焦作市中心血站复核工作，在上述57份0.7≤s/co＜1的标本中，经双孔复试有2份阳性，这些标本一旦漏检，将会给临床输血带来极大危害。

在上述接近临界值的标本中，经双孔复试大部分为阴性，说明第一次实验时有部分因素影响了实验结果。笔者对影响因素进行了分析，并采取了相应对策，主要有以下几个方面:①对血液标本的采集与处理过程进行质量管理:应避免溶血，血红蛋白(Hb)具有过氧化物酶活性［3］，标本中的Hb可催化底物而显色;抗凝血液标本应抗凝良好，不抗凝标本应待血液完全凝固后，方可加样，否则微孔内非特异性吸附纤维蛋白而出现假阳性结果;②加强仪器设备管理:建立和实施仪器设备的维护、校准和持续监控管理制度;大型和关键仪器设备专人管理、专人使用制度;实验室所有仪器设备均使用不间断电源供电(UPS);洗板机注液针、吸液针保持通畅;③试剂应室温平衡后使用:实验前将试剂置室温平衡30～60 min，实验时微板可较快达到预设温度，防止弱阳性标本漏检;④孵育:微板进入孵浴箱后，温度从室温升至37℃需一定时间，应依据本实验室不同环境温度下微板从室温至孵育箱后达到预设温度所需要时间的长短，确定在孵育箱中的孵育时间，以免导致弱阳性标本漏检;⑤洗板:应按试剂说明书配制洗涤应用液，并按要求次数洗板，次数过少或过多会导致假阳性或假阴性结果;手工洗板时应注意液体被溅出，或孔与孔之间液体溢出，连成整体液面后易产生花板;⑥显色:显色剂尽量在临用前配制，注意观察TMB显色剂外观，变色及过期的显色剂不能使用;显色剂应避免接触金属离子及次氯酸等化学物质。通过采取以上措施，实验结果的重复性进一步提高，取得了较为满意的效果。

目前市场上的ELISA法HBsAg试剂盒多为双抗体夹心一步法，该方法具有操作简便、反应时间短等优点。但当标本中HBsAg浓度过高时，会因钩状效应出现弱阳性甚至假阴性结果而造成漏检，有报道漏检率达0.49%［4］。二步法可解决高值钩状效应问题［5］，因此建议生产厂家为临床输血安全考虑，生产二步法试剂以满足对献血者进行严格检测的需求，进一步提高血液安全水平。