GC 测定细辛药材中的农药残留量

王希尧，田春莲，鄢景森，贺凤伟，赵春杰#（.辽宁科技学院，本溪市70；.沈阳药科大学药学院，沈阳市 006）

中药材种植过程中使用的农药种类多达几百种，包括有机氯、有机磷、拟除虫菊酯氨基甲酸盐等多种类型[1，2]，农药残留是因农药使用而残留在人类或动、植物体中的混合物[3]。农药进入药材及土壤中，经过食物链可以危害人的健康。有机氯类农药价廉、杀虫效率高，曾广泛被应用，造成环境污染；且其具有毒性，可造成慢性中毒或致畸、致癌、致突变等，还易在动植物体内蓄积，因而世界各国已相继禁止使用该类农药[4]。因此，笔者采用超声提取和弗罗里硅土柱净化，对细辛药材进行前处理，采用毛细管气相色谱-电子捕获检测器（GC-ECD）法对不同产地的细辛药材中的10种农药残留进行同时测定，结果个别样本有一定量的农药残留被检出。本方法简单，能广泛应用于农药残留的测定，规范药材的质量。

1 仪器与试药

Agilent 6890型气相色谱仪、Agilent 63Ni电子捕获检测器（美国Agilent公司）；OV-1701弹性石英毛细管柱（大连中汇达公司）。

农药标准品：敌敌畏（Dichlorvos）、六六六（benzenehexachloride，BHC）[包括甲体六六六（α-BHC）、丙体六六六（γ-BHC）和丁体六六六（δ-BHC）3种异构体，纯度＞99%]、五氯硝基苯（Quintozene）、毒死蜱（Chlorpyrifos）、对硫磷（parathion）、马拉硫磷（malathion）、2，4-二硝基氯苯（CDNB）均购自国家农药标准品中心；滴滴涕（DDT）包括op′-滴滴滴（op′-DDD）和 pp′-滴滴滴（pp′-DDD）2种同系物，纯度＞98%，均购自美国Sigma公司；正己烷为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯；所有药材样品（来源见表1）经沈阳药科大学中药学院贾景明副教授鉴定均为北细辛Asarum heterotropoidesFr.Schmidt var.mandshuricum（Maxim.）Kitag.。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：OV-1701弹性石英毛细管柱（30 m×0.32 mm×0.5 μm）；柱升温程序：初始温度 180℃，以 7℃·min-1升至260℃保持 2 min，以15℃·min-1升至 270℃保持10 min；进样口温度：260℃；检测器温度：300℃；载气：高纯氮，99.999%；流量：60 mL·min-1；进样方式：不分流进样；进样量：1 μL。

2.2 标准曲线的制备

精密称取敌敌畏、甲体六六六、五氯硝基苯、丙体六六六、毒死蜱、马拉硫磷、丁体六六六、对硫磷、op′-滴滴滴、pp′-滴滴滴各2.5 mg，分别置于25 mL量瓶中，加正己烷溶解，定容，于4℃贮藏，备用。

分别精密吸取敌敌畏、甲体六六六、五氯硝基苯、丙体六六六、毒死蜱、马拉硫磷、丁体六六六、对硫磷、op′-滴滴滴、pp′-滴滴滴贮备液适量，置于50 mL量瓶中，加正己烷稀释至刻度，制成每1 mL含敌敌畏 4.946 μg、甲体六六六2.32 μg、五氯硝基苯1.11 μg、丙体六六六45.2 μg、毒死蜱 120.0 μg、马拉硫磷 8.38 μg、丁体六六六2.61 μg、对硫磷 4.092 μg、op′-滴滴滴 1.13 μg、pp′-滴滴滴 1.15 μg的混合对照品贮备液。分别精密吸取上述混合对照品贮备液0.005、0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1 mL于10 mL量瓶中，用正己烷稀释至刻度，制备成7个浓度的混合对照品溶液，加入等体积的2，4-二硝基氯苯溶液使各溶液浓度均为4.4 μg·mL-1，常温下氮气流吹干至刻度。

分别精密吸取上述7份标准溶液各1 μL，按“2.1”项下色谱条件进样，每份进样5次，以样品峰面积与2，4-二硝基氯苯峰面积的比值（Y）为纵坐标，样品浓度（X）为横坐标，进行线性回归，回归方程见表2；气相色谱见图1。

表1 细辛药材样品来源Tab 1 Origin of Asari Radix et Rhizoma medicinal materials

表2 回归方程（n＝5）Tab 2 Regression equation（n＝5）

结果表明，敌敌畏在1.978×102～3.957×104ng·mL-1浓度范围内，甲体六六六在4.64～9.28×102ng·mL-1浓度浓度范围内，五氯硝基苯在1.554×102～3.108 ×104ng·mL-1浓度范围内，丙体六六六在4.52～9.04×102ng·mL-1浓度范围内，毒死蜱在2.74～5.472×102ng·mL-1浓度范围内，马拉硫磷在4.19×10～8.380×103ng·mL-1浓度范围内，丁体六六六在 5.22～1.044×103ng·mL-1浓度范围内，对硫磷在8.184×10～1.637×104ng·mL-1浓度范围内，op′-滴滴滴在 4.972×10～9.944 ×103ng·mL-1浓度范围内，pp′-滴滴滴在5.06×10～1.012×104ng·mL-1浓度范围内与各自峰面积与2，4-二硝基氯苯峰面积比值呈良好线性关系。各农药回归方程的相关系数为0.990 3～0.999 1，仪器精密度为1.2%～3.4%，方法精密度为6.5%～7.4%，加样回收率为84.0%～103.2%，RSD为2.5%～8.8%。

2.3 供试品溶液的制备

取药材约2 g，精密称定，置于50 mL锥形瓶中，加丙酮-水（7∶3）混合溶液40 mL，摇匀，超声处理15 min，抽滤，药渣再重复上述操作1次后，合并滤液。滤液转入250 mL分液漏斗中，加20 mL 5%NaCl溶液，振摇萃取，无机相再分别用60 mL正己烷萃取2次，合并正己烷相于250 mL磨口瓶中，于50～60℃水浴上旋转蒸发至约2 mL，作为提取液。通过20 mL正己烷预淋的层析柱（层析柱由下至上：少许玻璃棉+2 g无水硫酸钠+5 g弗罗里硅土+2 g氧化铝+2 g无水硫酸钠），再用50 mL丙酮-正己烷（1∶4）溶液进行洗脱，洗脱液收集于250 mL磨口烧瓶中，旋转蒸发至约2 mL，再转入10 mL容量瓶，用正己烷定容，即得。

2.4 出峰顺序

照“2.1”项下色谱条件进样测定。结果，出峰顺序为：敌敌畏、甲体六六六、五氯硝基苯、丙体六六六、毒死蜱、马拉硫磷、丁体六六六、对硫磷、op′-滴滴滴、pp′-滴滴滴。

2.5 色谱系统精密度试验

精密吸取同一浓度对照品溶液1 μL，重复进样5次，按“2.1”项下色谱条件测定。结果，敌敌畏、甲体六六六、五氯硝基苯、丙体六六六、毒死蜱、马拉硫磷、丁体六六六、对硫磷、op′-滴滴滴、pp′-滴滴滴的 RSD分别为 3.0%、2.4%、2.8%、1.2%、3.0%、2.6%、2.2%、2.4%、2.1%、3.4%。

2.6 方法精密度试验

精密称取1号样品2 g，共5份，放置12 h，按供试品制备方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定。结果，丙体六六六、对硫磷、op′-滴滴滴的RSD分别为6.7%、7.4%和6.5%。

2.7 回收率试验

精密称取1号样品2 g，共9份，分3个水平添加混合标准品溶液，每个水平重复3次，混匀。按上述条件提取、净化、测定并计算回收率，结果见表3。

2.8 供试品的测定

精密称取各药材2 g，按供试品提取和净化方法操作项下平行制备样品各3份，按“2.1”项下色谱条件测定。每份样品重复2次，每次进样1 μL，用内标法定量。样品中农药残留量检测结果见表4（表中“ND”为低于检测线）。

3 讨论

笔者采用超声提取和弗罗里硅土柱净化，对样品进行前处理，步骤简单，便于应用；采用GC-ECD法同时测定了24种中药材中的10种农药残留，方法简便，易于操作。

农药残留量测定中，《中国药典》规定了有机氯类农药残留量的测定方法，包括六六六、滴滴涕和五氯硝基苯。规定甘草和黄芪的限量为总 BHC≤0.2×10-6，总 DDT≤0.2×10-6，PCNB≤0.1×10-6[5]。美、英和欧洲药典除规定了有机氯类农药残留量外，还规定了有机磷类农药的限量：毒死蜱0.2 ppm，敌敌畏1.0 ppm，六六六0.3 ppm，马拉硫磷1.0 ppm，对硫磷0.5 ppm，五氯硝基苯1.0 ppm，滴滴涕1.0 ppm[6～8]，本文所测样品中的农药残留量均低于中、美、英及欧洲药典要求。

表3 回收率试验结果（n＝3）Tab 3Results of recovery tests（n＝3）

表4 样品中农药残留量（mg·kg-1）Tab 4 Pesticide residues in the samples（ mg·kg-1）

[1] 万益群，李申杰，鄢爱平.白术中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的测定[J].分析科学学报，2007，23（3）：299.

[2] 向增旭，赵维佳，郭巧生.金银花中18种有机磷农药残留量分析方法的研究[J].中国中药杂志，2006，31（16）：1 321.

[3] 马虹英.浅谈中药中有机氯农药残留问题[J].中国药房，2005，16（21）：1 667.

[4] 周洪波，房志坚，杨立伟，等.固相萃取-GC-MS联用法测定何首乌中有机氯农药残留量[J].中国药房，2010，21（19）：777.

[5] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录57.

[6] The United States Pharmacopeial Convention.U.S.Pharmacopeia（24）/National Formulary（19）[S].Philadelphia PA：States Pharmacopeial Convention，2000：19.

[7] British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia[S].London：States Pharmacopeial Commission，2000：Appendix，81.

[8] Council of Europe.European Pharmacopoeia[S].Strasbourg：States Pharmacopeial Convention，2011：242.