GC法测定紫金透骨喷雾剂中龙脑的含量及稳定性Δ

郑林，王爱民，黄勇，迟明艳，兰燕宇，王永林(贵阳医学院药学院，贵阳市550004)

紫金透骨喷雾剂是根据贵州省苗族验方开发的中药新药，是由紫金莲、透骨香和冰片等6味中药采用现代制剂提取技术富集有效成分精制而成的外用喷雾剂，具有活血散瘀、消肿止痛、舒筋通络之功效，用于急性闭合性软组织损伤的治疗。中医认为本品所含的冰片辛香走窜，其清香为百药之先，为大通之品，故可用于治疗多种疼痛病证[1]。现代医学研究表明[2，3]，冰片具有止痛、抗炎、抗菌的功效，冰片中龙脑是一种有效的透皮促进剂，对多种皮肤外用药都有促透作用。龙脑为冰片中主要有效成分，因此笔者选择龙脑为考察指标，采用气相色谱(GC)法对紫金透骨喷雾剂进行质量评价及稳定性研究[4，5]，证明该法可用于该制剂的质量控制，且制剂中龙脑稳定性良好。

1 仪器与试药

GC-14B型GC仪、氢火焰离子化检测器(日本岛津公司)；WML色谱工作站(广西威玛龙色谱科技公司)；高纯氮气、氢气(贵阳新维气体有限公司，纯度均为99.99%)；龙脑对照品(中国药品生物制品检定所，批号:881-200001)；正辛醇、乙醇为分析纯；紫金透骨喷雾剂(贵阳医学院贵州省中药民族药研究开发中心提供，批号:20080313、20080318、20080320)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:AT-WAX石英毛细管(0.53 mm×30 m×1.0µm)；载气:氮气；柱前压:25 kPa；柱温:170℃；进样口温度:200℃；检测器:氢火焰离子化检测器(FID)；检测器温度:250℃；氢气流量:40 mL·min-1；空气流量:400 mL·min-1；分流比:10∶1；进样量:0.5 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 内标溶液精密吸取正辛醇2 mL，置100 mL量瓶中，加乙醇至刻度，即得。

2.2.2 对照品溶液精密称取龙脑对照品33.92 mg，置于25 mL量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，即得。

2.2.3 供试品溶液精密吸取紫金透骨喷雾剂1 mL，置25 mL量瓶中，精密加内标溶液1 mL，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 阴性对照溶液按紫金透骨喷雾剂制备工艺制得缺冰片的阴性样品。精密吸取阴性样品1 mL，置25 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各0.5 μL注入GC仪，在上述色谱条件下测定，得色谱图(见图1)。结果显示，对照品与供试品中龙脑的保留时间基本一致，龙脑峰与内标峰及其他组分峰分离良好；阴性对照溶液在龙脑色谱峰位置处无相应的峰出现，表明阴性对照无干扰。

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mL，置5 mL量瓶中，分别精密加内标溶液0.2 mL，加乙醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取上述系列对照品溶液0.5µL注入GC仪中，测定峰面积。以龙脑与内标峰面积的比值(Y)为纵坐标，对照品浓度(X)为横坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝2.981X－6.584×10-3(r＝0.9999，n＝5)。结果表明，龙脑的检测浓度在0.1209～0.7253 mg·mL-1范围内与其同内标的峰面积比值呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

2.5.1 重复性试验精密吸取样品(批号:20080313)9份，分别按0.5、1.0、1.5 mL取样，每个样3份，照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，分别测定龙脑的含量。结果，RSD＝2.21%(n＝9)，表明方法的重复性良好。

2.5.2 中间精密度试验以不同的实验人员在不同时间照“2.2.3”项下方法分别制备3份供试品溶液，按上述方法测定。第1次测定结果的RSD＝2.26%(n＝3)；第2次测定结果的RSD＝2.22%(n＝3)，表明方法的中间精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，照上述色谱条件分别于0、1、2、4、8 h进样，测定龙脑与内标的峰面积比值。结果，RSD＝1.54%(n＝5)，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.7 耐用性试验

取样品适量，按“2.2.3”项下方法平行制备3份供试品溶液，用同一支色谱柱，以不同色谱柱温度(165、170、175℃)进样测定。结果，RSD(n＝3)分别为1.94%(165℃)、2.26%(170℃)、1.98%(175℃)；另取3份供试品溶液，除柱前压变化外(20、25、30 kPa)，其余色谱条件不变进样测定。结果，RSD(n＝3)分别为2.63%(20 kPa)、2.29%(25 kPa)、1.67%(30 kPa)，表明方法的耐用性良好。

2.8 加样回收率试验

精密吸取已测定龙脑含量(11.39 mg·mL-1)的样品，分别按所取样品量中龙脑质量分数的50%、100%和150%精密加入龙脑对照品，照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样，按上述色谱条件测定含量，计算加样回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定

取3批样品，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，每份重复进样3次，并计算平均含量。结果，3批样品(批号:20080313、20080318、20080320)中龙脑的平均含量(n＝3)分别为11.24、10.94、10.93 mg·mL-1，平均值为11.04 mg·mL-1。

2.10 制剂中龙脑稳定性考察

表1 加样回收率试验结果(n＝9)Tab 1Results of recovery tests(n＝9)

为考察制剂中龙脑的稳定性，取模拟上市包装中试样品3批(20080313、20080318、20080320)进行加速试验和长期试验考察。

2.10.1 加速试验取模拟上市包装中试样品适量，置(40±2)℃、RH(20±5)%条件下贮藏，于0、1、2、3、6个月取样，照上述含量测定方法检测。结果，3批样品中龙脑的含量分别为11.24、10.95、10.67、10.97、10.85 mg·mL-(1批号:20080313)，10.94、10.66、10.40、10.83、10.22 mg·mL-(1批号:20080318)，10.93、10.35、10.16、10.35、10.11 mg·mL-(1批号:20080320)，表明经加速试验6个月考察，制剂中龙脑含量无明显变化，符合质量标准要求。

2.10.2 长期试验取模拟上市包装中试样品适量，置室温条件下贮藏，于0、3、6、12、18个月取样，照上述含量测定方法检测。结果，3批样品中龙脑的含量分别为11.24、10.67、10.24、10.28、9.66 mg·mL-(1批号:20080313)，10.94、10.97、10.36、10.56、9.90 mg·mL-(1批号:20080318)，10.93、11.05、10.64、10.15、9.93 mg·mL-(1批号:20080320)，表明经室温留样长期试验18个月考察，制剂中龙脑含量无明显变化，符合质量标准要求。

3 讨论

2005年版《中国药典》(一部)冰片中龙脑测定采用水杨酸甲酯作内标物，但由于紫金透骨喷雾剂处方中含有透骨香药材，而透骨香中含有水杨酸甲酯，会对试验结果产生干扰。经试验，选用正辛醇为内标物，样品不干扰内标物。

本试验含量测定方法的验证主要参照2005年版《中国药典》(一部)附录“中药质量标准分析方法验证技术指导原则”进行，较原来《中药新药质量标准研究的技术要求》中含量测定方法的验证更为合理和严谨。

在紫金透骨喷雾剂稳定性考察中，除龙脑的含量测定外，还分别考察了性状、鉴别、乙醇量、喷射试验和微生物限度，均符合质量标准要求，说明本品在18个月内质量稳定，直接接触药品的容器对药品质量无影响。

[1]雷载权，张廷模主编.中华临床中药学[M].第1版.北京:人民卫生出版社，1998:1558.

[2]王本祥主编.现代中药药理学[M].第1版.天津:天津科学技术出版社，1997:1141.

[3]朱健平，王宗锐，吴宋夏.龙脑促进药物经皮渗透作用的研究[J].中国药学杂志，1999，34(2):104.

[4]张开莲，叶云，王俊，等.毛细管气相色谱法测定雪抑乐中龙脑的含量[J].中国药房，2007，18(30):2355.

[5]毛叶萌，张奇志，沈烨虹，等.阿普唑仑口腔崩解片的稳定性研究[J].中国药房，2008，19(28):2213.