非小细胞肺癌患者化疗前后淋巴细胞亚群监测的临床意义

徐 艳,黄 茂,丁惠珍

(1.南京医科大学第一附属医院,江苏南京,210029;2.江苏省扬州市第一人民医院,江苏扬州,225001)

在近十年的流行病学调查中,肺癌的病死率在城市已居肿瘤死亡首位,其中非小细胞肺癌占全部肺癌的80%～85%。由于确诊时多数已属晚期,化疗仍为肺癌的主要治疗方法。肺癌的病因复杂,且肺癌作为一种实体瘤,机体可产生针对肿瘤抗原的免疫应答,包括细胞免疫和体液免疫。随着白细胞分化抗原单克隆抗体免疫荧光染色和流式细胞术分析广泛应用,淋巴细胞亚群检测技术在临床普遍开展,成为评价人体免疫功能的重要方法[1]。肿瘤免疫学的发展,促进了肿瘤免疫诊断和免疫治疗的应用。对于不同类型肿瘤,机体产生的免疫应答不同。对非小细胞肺癌患者化疗前后淋巴细胞亚群的动态监测,了解肺癌患者化疗前后免疫功能的变化,从免疫角度以期寻找提高患者免疫功能的方法,干预免疫应答减少肿瘤免疫逃逸,达到延长患者的生存期的目的。

1 资料和方法

1.1 资料和方法

2007年9月～2011年2月在本院呼吸科就诊,经支气管镜、肺活检、胸水中找脱落细胞或淋巴结活检病理确诊为非小细胞肺癌患者63例,且无免疫相关性疾病和其他肿瘤病史,无激素类药物及免疫抑制剂使用史。其中男性43例,女性20例,年龄38～76岁,根据美国联合癌症分类委员会(AJCC)和国际抗癌联盟(UICC)2002年制订的TNM分期,为Ⅱb～Ⅳ期,其中手术患者21例,且为术后需要进行化疗的患者;非手术患者42例,PS评分均<2分,可进行化疗。化疗方案分为“多西他赛+顺铂”或“吉西他滨+顺铂”。

1.2 实验方法

标本处理:在化疗前、化疗后第7天、第21天,分别抽取3 mL的外周静脉血,置入抗凝试管中。

实验方法:取100 μ L抗凝全血加入 12×75 mm的试管中,同时加入20?L荧光单抗(anti-CD3-PC5,anti-CD4-FITC,anti-CD8-PE,anti-CD19-FITC,anti-CD16CD56-PE),混匀室温避光孵育20 min,加入500 μ L红细胞裂解液,避光15 min,1 500 r/min离心5 min,弃上清,加PBS混匀,用FS和SS设门,上机进行淋巴细胞亚群流式细胞仪(仪器型号为 BECKMAN COULTER EPICS XL)测定,荧光试剂亦为BECKMAN公司出品。在直方图中框出淋巴细胞群,每个样本计数10,000个淋巴细胞,标记出细胞百分率。所有检测在4 h内完成。

2 结 果

表1 非手术患者淋巴细胞亚群(%)化疗前后的动态变化

在手术后化疗患者中化疗前后淋巴细胞亚群比值变化无显著差异,且淋巴细胞亚群比值在正常范围内,见表2。

表2 手术后患者淋巴细胞亚群化疗前后的动态变化(%)

3 讨 论

一般认为,恶性肿瘤患者普遍存在免疫功能低下,免疫细胞不能有效识别、杀灭肿瘤细胞。从本世纪以来,人们对于肿瘤免疫监视、免疫应答和免疫逃逸的细胞与分子机制有了更全面的认识,并由此提出通过阻断肿瘤诱导的免疫抑制的方法治疗肿瘤,促进了肿瘤免疫治疗的应用。在肿瘤进行性生长时,肿瘤患者的免疫功能受抑制,同时机体也产生针对肿瘤抗原的适应性免疫应答,其中细胞免疫被认为是抗肿瘤免疫的主力。在细胞水平上的免疫调节以T淋巴细胞为主,根据是否表达或分子,T细胞可分为T细胞和T细胞。CT L起最主要的作用。但是作者通过研究发现,在这些肺癌患者中,没有进行手术治疗的患者化疗前标记的淋巴细胞相对升高,并没有表明细胞免疫功能的强大,相反,这些患者多为中晚期肺癌,淋巴细胞比例的升高没有有效杀伤肿瘤细胞,可能在某些情况下,反而会干扰特异性细胞免疫应答对肿瘤细胞的杀伤作用,目前对于该现象的作用机制尚不明确[2]。有资料表明肿瘤逃逸与T细胞分泌细胞因子能力下降,影响免疫功能[3]。

对于非小细胞肺癌患者,处于免疫抑制状态,根据作者所得到的结果,淋巴细胞亚群中比例下降,尤其以、CD4/CD8下降明显,T淋巴细胞免疫功能低下,以表达的T淋巴细胞受抑制为表现[4]。NK细胞免疫作为固有免疫应答细胞亦参与了机体的抗肿瘤作用,因此NK细胞亦有所下降。但在非小细胞肺癌患者中,B细胞比例无变化,显示体液免疫在肿瘤免疫中不处于主要地位[5]。

不能手术的非小细胞肺癌患者,在肿瘤分期上多为中晚期[6-8],还有部分患者为肿瘤生长部位不能进行手术切除或有手术禁忌证。经过化疗可以提高免疫功能,在化疗第7天免疫功能没有变化,CD4+T细胞甚至有所降低。但是在化疗21 d后可得到明显提高,说明T细胞在NSCLC患者肿瘤免疫中起到重要作用[9]。可见化疗对免疫功能的提高短期不明显,可能与化疗对正常白细胞的杀伤有关。但是长期效果表明化疗可使肺癌患者获益,并能提高肺癌患者生存率。最近的资料显示,经过化疗的晚期NSCLC患者中位生存期为8～10个月,高于姑息性支持治疗患者。因此,作者可以将免疫功能作为一项判断非小细胞肺癌患者预后指标,为作者观察患者的生存期提供可参考的价值。

手术切除肺癌病灶的非小细胞肺癌患者,在化疗前(即术后21 d左右),免疫功能与正常人无明显差异,明显高于未手术的肿瘤患者。这说明肿瘤病灶切除后,大量的肿瘤细胞被清除后,肿瘤细胞所分泌的免疫抑制因子减少,因此减少或消除了肿瘤对机体的免疫抑制作用[10],体内免疫状态得到改善。这符合手术切除患者生存率更高,非小细胞肺癌首选手术治疗。但是因为肺癌患者术后复发、转移率高达50%[11],术后尽早进行化疗进一步清除残存的肿瘤细胞。应进行化疗可以维持体内的免疫稳定状态,可以使进行手术治疗的肿瘤患者获益更多。对于术后什么时候开始进行化疗一般建议术后21～30 d为宜,可以参考淋巴细胞亚群的恢复情况。对于能够手术的非小细胞肺癌患者一般分期较早,因此肿瘤对免疫功能的抑制作用较低。

[1] 张延军,李 宇,王玉红,等.小细胞肺癌患者化疗前后T淋巴细胞亚群的动态观察[J].现代中西医结合杂志,2009,18(27):3311.

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[11] 李龙芸,魏丽娟.呼吸内科学高级教程[M].北京:人民军医出版社,2009:390.