2型糖尿病并不稳定型心绞痛患者hs-CRP、Lp(a)和ADPN悬浮芯片集成检测及意义

映峰*

(1南方医科大学珠江医院，广州 510282;2清远市人民医院)

冠心病(CHD)和2型糖尿病(T2DM)关系密切，T2DM患者出现冠脉粥样硬化的时间早、程度重、预后差［1］。因 T2DM 的自主神经病变可使不稳定型心绞痛(UAP)的早期临床表现不典型，故及时诊断T2DM并UAP有助于尽快干预冠脉粥样硬化进展，减少患者心血管疾病的致残率和病死率。在T2DM和冠脉粥样硬化脂质斑块形成过程中，既有脂质斑块代谢紊乱，也有炎症因子参与，表明炎症反应可能是连接T2DM和冠脉粥样硬化发展的一个纽带［2］;因单项检测炎症因子诊断CHD的价值有限，故多项指标的悬浮芯片集成检测有望提高其早期诊断。为探讨高敏 C-反应蛋白(hs-CRP)、脂蛋白 a［Lp(a)］、脂联素(ADPN)悬浮芯片集成检测诊断T2DM并UAP的临床价值，我们进行了相关研究。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2007年4月～2008年4月在珠江医院住院的UAP患者102例，男70例、女32例，年龄(61.6±10.8)岁。患者近1个月出现心绞痛表现，或原有稳定型心绞痛表现而近期发生变化;冠脉造影显示左主干、左前降支、左回旋支和右冠脉中至少有一支病变血管狭窄直径≥75%。排除急性心肌梗死、吸烟、高脂血症、高血压病史、肝肾功能不全、急性感染、恶性肿瘤、肺栓塞、下肢动静脉栓塞、全身免疫性疾病及凝血功能障碍者。根据患者有无T2DM病史分为两组，观察组52例有T2DM病史，对照组50例无T2DM病史;两组性别、年龄有可比性，其冠脉病变血管检测参数见表1。

表1 两组冠脉病变血管检测参数比较(±s)

表1 两组冠脉病变血管检测参数比较(±s)

检测参数 观察组(n=52)对照组(n=50)P冠脉病变狭窄程度(%)90.5 ±8.20 86.3 ±10.10 ＜0.05冠脉病变长度(mm) 26.8 ±6.20 10.6 ± 5.60 ＜0.05弥漫病变(例) 36 18 ＜0.05多支冠脉病变(例)30 10 ＜0.05

1.2 检测方法 抽取两组入院次晨静脉血5 ml，3 500 r/min离心10 min后分离血清，－80℃冰箱冻存。将分别包被hs-CRP、Lp(a)、ADPN抗体的偶联微珠按50 μl/孔加入96孔板中，真空抽干;加入100 μl/孔的 1 × Washing Buffer，真空抽干;分别加入用 1×Washing Buffer 1∶2 000稀释的样品100 μl/孔、标准品Ⅰ～Ⅵ，贴上封板膜。将反应板放在平板摇床上，先后1 100 r/min振荡1 min、600 r/min避光室温孵育15 min;真空抽滤，加入100 μl/孔的1 ×Washing Buffer，洗涤3 次;加入100 μl/孔的生物素标记抗体，将反应板放在平板摇床上，先后1 100 r/min振荡1 min、600 r/min避光室温孵育15 min;真空抽滤，加入 100 μl/孔的 1 × Washing Buffer，洗涤3次;加入用1×Assay buffer 1∶12.5稀释的链亲和素—藻红蛋白50 μl/孔，将反应板放在平板摇床上，先后1 100 r/min振荡1 min、400 r/min避光室温孵育15 min;真空抽滤，加入100 μl/孔的1×Washing Buffer，洗涤 3 次;加入 125 μl/孔的 1 × Assay buffer重悬微珠，将反应板放在平板摇床上，1 100 r/min振荡1 min。最后，将反应板置于Lumi-nex100多功能流式点阵分析仪上读数。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件，计量数据以±s表示，两组比较用t检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两组检测指标比较见表2。

表2 两组检测指标比较(mg/L，±s)

表2 两组检测指标比较(mg/L，±s)

注:与对照组比较，*P ＜0.01

组别 n hs-CRP Lp(a)ADPN观察组 52 11.6 ±5.3* 406 ±156* 5.5 ±3.2*对照组50 8.3 ±3.4 337 ±130 7.2 ±2.6

3 讨论

T2DM并CHD患者发生UAP时，其冠脉造影多见血管病变较严重且弥漫，患者预后较差;如能及时对T2DM并UAP患者做出诊断并早期进行干预，T2DM并CHD的心血管事件将得到有效抑制。传统诊断T2DM并CHD的方法特异性不高，而冠脉造影是有创检查。因此，寻找简便快捷诊断T2DM并CHD的方法极为必要。

研究表明，DM患者的CHD患病率高于非DM人群，各种慢性并发症(特别是心血管事件)已成为T2DM患者的主要死亡原因;因炎症反应在T2DM冠脉粥样硬化发生、发展过程中起重要作用，故大量研究发现hs-CRP、Lp(a)、ADPN是CHD的独立危险因素［3，4］，且其对心血管事件发生具有良好的预测价值。目前，hs-CRP及Lp(a)作为CHD的独立危险因素、ADPN作为CHD的强保护因子，在临床广泛应用;但因检测方法仅能观察单个炎症因子，其敏感性和特异性均受影响。此外，CHD致病因素复杂，迄今尚无一种炎症因子可单独预测CHD事件发生。

悬浮芯片集成检测技术是将流式细胞技术和酶联免疫吸附检测技术有机地整合在一起，实现多因子集成检测，具有应用范围广、快速高效等优点。既往研究证实［5］，采用悬浮芯片集成检测诊断CHD的敏感性及准确性均明显高于酶联免疫吸附检测，可提高CHD的早期预测。本研究显示，与对照组比较，观察组的冠脉病变狭窄程度严重，冠脉病变长，弥漫病变及多支冠脉病变多;血清hs-CRP、Lp(a)明显升高，ADPN明显降低，与文献报道的糖调节受损导致冠脉粥样硬化的危险因素作用增强、炎症反应参与冠脉粥样硬化形成及其并发症的过程一致［6］。提示悬浮芯片集成检测技术将hs-CRP、Lp(a)、ADPN的检测方法统一在一个平台上，能在较短时间内准确地获得多指标的信息。

总之，本研究表明悬浮芯片集成检测技术监测炎症因子变化，可及早诊断T2DM并UAP患者，进行有效干预，以减少其心血管事件发生。

［1］Burke AP，Kolodgie FD，Zieske A，et al.Morphologic findings of coronary atherosclerotic plaques in diabetics:a postmortem study［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2004，24(7):1266-1271.

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［5］李健洪，刘映峰，缪绯，等.超敏C反应蛋白、脂蛋白(a)和脂联素集成检测诊断冠心病的价值［J］.心脏杂志，2008，20(2):210-212.

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