富硒卷烟安全性分析与评价

李锡宏，黎妍妍，朱茂祥，林国平，杨陟华，向德恩

（1.中国烟草白肋烟试验站，湖北省烟草科研所，武汉 430030；2.中国军事医学科学院，北京100850；3.湖北省恩施州烟草公司，恩施 445000）

硒是人体必需的微量元素之一，硒对克山病、大骨节病、肿瘤、呼吸道疾病、生育能力低等都有一定的预防和治疗作用[1]。从生理角度讲，硒具有抑制脂质过氧化、清除活化氧自由基的生物功能，从而可以保护细胞膜免受损伤[2]。在植物体内，硒能增强植物生物抗氧化作用及其对环境胁迫的抗性，促进植物生长，并具有拮抗重金属的作用[3-4]。在烟草上，已进行了农业和工业两方面的研究。已有研究证实，适量施用微量元素硒可以促进烟叶生长发育，提高烟叶产质量[5-7]。卷烟中的微量元素硒的含量与烟气焦油、自由基的浓度呈负相关关系，提高烟叶含硒量能增高吸烟者的血硒水平，起到一定的保健作用[8-11]。目前，关于富硒烟叶安全性方面的研究鲜有报道。本研究以不同梯度富硒卷烟为试验材料，进行了富硒卷烟安全性分析与评价，以期为明确硒在降焦减害中的功效提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 试验设计

试验所用烟叶为非富硒产地的烤烟（对照），来源于四川会理。试验设计为在烟丝中分别加入无机硒（亚硒酸钠）和有机硒（亚硒酸钠原液，浓度为10 mg/mL）。

（1）非富硒烟叶添加无机硒（亚硒酸钠）：将称取的亚硒酸钠加入81.4 ℃热水中，经过5 min完全溶解后配制成水溶液（尽量稀释），然后将溶液均匀喷洒在烟丝上。

处理1（低剂量）：每支卷烟添加2 µg硒的卷烟（2 µg/支）；处理 2（中剂量）：每支卷烟添加 10µg硒的卷烟（10 µg/支）；处理3（高剂量）：每支卷烟添加 25 µg 硒的卷烟（25 µg/支）。

（2）非富硒烟叶添加有机硒：将量取的亚硒酸钠原液溶入水中配制成水溶液（尽量稀释），然后将溶液均匀喷洒在烟丝上。

处理4（低剂量）：每支卷烟添加2 µg硒的卷烟（2 µg/支）；处理 5（中剂量）：每支卷烟添加 10µg硒的卷烟（10 µg/支）；处理6（高剂量）：每支卷烟添加 25 µg 硒的卷烟（25 µg/支）。

1.2 烟叶样品卷制

烟叶样品卷制由湖北中烟技术中心完成，制成达到国际吸烟标准（ISO4387）规格要求的卷烟，每处理20条。

1.3 卷烟产品安全性评价

卷烟产品安全性评价由中国军事医学科学院分析完成。以小鼠为试验对象，评价内容包括：（1）细胞微核试验；（2）细胞存活试验；（3）细菌致突变性（AMES）试验；（4）动物暴露卷烟烟气的慢性毒性分析（90 d喂养试验）：组织病理（血细胞参数等）、血硒水平、机体免疫功能（细胞免疫、体液免疫和非特异免疫）、机体抗氧化功能（全血SOD、MDA、GP）。

2 结 果

2.1 卷烟烟气中硒含量和硒转移率测定结果

卷烟烟气中硒含量和硒转移率测定结果见表1。结果表明，无论是在烟丝中添加无机硒还是有机硒，随添加量的增高，卷烟烟气中硒绝对转移量增加，并有较好的剂量效应关系（无机硒y=0.0188x+0.192；有机硒：y=-0.0006x2+0.251x+0.192）；但对转移率的影响不大。总体而言，无机硒的转移率高于有机硒。

表1 卷烟烟气中硒含量和硒转移率Table 1 Content and transform rate of smoking

2.2 细胞微核试验

对富硒卷烟进行了细胞微核试验（图1）。由图1可看出，与对照相比，无机硒低、中剂量组能明显降低卷烟烟气所致细胞微核发生率，但高剂量无机硒反而增加了卷烟烟气所致细胞微核发生率；有机硒则能明显降低卷烟烟气所致细胞微核发生率，且高剂量组效果更明显。

图1 细胞微核试验结果Fig.1 Micronucleus test results

2.3 细胞存活试验

对富硒卷烟进行了细胞存活试验，结果见图2。结果表明，相比对照，添加低剂量无机硒卷烟的细胞平均致死剂量明显提高，即低剂量无机硒能明显降低卷烟烟气的细胞毒性，但中、高剂量无机硒反而增加了卷烟烟气细胞毒性；添加有机硒的安全性明显优于无机硒，且以高剂量有机硒表现明显。

图2 细胞平均致死剂量Fig.2 Average Lethal Dose of Cells

2.4 细菌致突变性（AMES）试验

富硒卷烟的细菌致突变性试验结果见表2和图3。TA100菌主要检测引起碱基对置换的诱变剂，由表2可以看出，卷烟烟气对TA100菌均无明显的致突变性，无剂量效应关系。

TA98菌主要检测引起各种移码型突变的诱变剂，卷烟烟气对TA98菌有致突变作用，并存在较好的剂量效应关系，比较各种卷烟的致突变能力（斜率值，图3），由高到低顺序为：对照烟＞高剂量无机硒＞低剂量有机硒＞中剂量无机硒＞中剂量有机硒＞低剂量无机硒＞高剂量有机硒。

表2 鼠伤寒沙门氏菌诱变性试验结果Table 2 Results of Salmonella typhimurium mutagenicity test

3 结 论

本研究通过对外源添加硒烟叶进行小鼠细胞微核试验、细胞存活试验、细菌致突变性（AMES）试验分析和安全性评价，发现富硒卷烟安全性较高。试验结果表明，添加有机硒的卷烟安全性优于添加无机硒的卷烟，当添加无机硒超过一定量时反而降低了卷烟安全性。

图3 鼠伤寒沙门氏菌诱变性试验结果Fig.3 Results of Salmonella typhimurium mutagenicity test

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