反相高效液相色谱法测定利鼻片中木兰脂素含量

伍 娟

(湖南省邵阳市药品检验所，湖南 邵阳 422000)

利鼻片是由苍耳子、辛夷和蒲公英等7味中药加工制成的中药制剂，收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂(第四册)》中，具有清热解毒、祛风开窍的功效，用于鼻渊、鼻塞流涕等症[1]。原质量标准中没有定量指标，不能有效地控制产品质量。方中臣药辛夷主含木兰脂素[2]。为此，故本试验以木兰脂素为指标成分，建立了测定利鼻片中木兰脂素含量的反相高效液相色谱法，为该产品的质量控制提供客观的质量评价方法，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－20A型高效液相色谱仪;AG－135型电子天平、AB204－N型电子天平(梅特勒－托利多(上海)有限公司)。木兰脂素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110722－200610，供含量测定用);乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯;利鼻片(长春银诺克药业有限公司，批号为20090110)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[3]

色谱柱:UltimateTMXB－C18色谱柱(205 mm ×5.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－四氢呋喃－水(35∶1∶64);检测波长:278 nm;柱温:35 ℃;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取木兰脂素对照品5.14 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(0.0514 mg/L)。取本品20片，去衣，研细，取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯20 mL，称定质量，浸泡30 min，超声处理(功率250 W，频率30 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，加于中性氧化铝(100～200目，2g，内径10 mm，湿法装柱，用乙酸乙酯5 mL预洗)上，用甲醇15 mL洗脱，收集洗脱液，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。按制备工艺方法制备不含辛夷的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成不含辛夷的阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，按拟订的色谱条件进样测定。结果色谱行为良好，木兰脂素峰与其他组分色谱可达基线分离，且与相邻色谱峰分离度大于1.5;理论板数按供试品木兰脂素峰计，在2000以上;而阴性对照品溶液色谱中在对照品溶液相应的位置无色谱峰，说明阴性对照品溶液无干扰，见图1。

图1 高效液相色谱图

标准曲线制备:分别精密吸取质量浓度为0.0514 g/L的木兰脂素对照品溶液 2，4，8，12，16，20 μL，注入液相色谱仪，按拟订色谱条件测定峰面积积分值，以对照品质量浓度为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 A=24961 C+1232，r=0.9998(n=6)。结果表明，木兰脂素进样量在 0.1028 ～1.028μg范围内与峰面积积分值具有良好线性关系。

精密度试验:取同一质量浓度的木兰脂素对照品溶液，在上述色谱条件下测定，连续进样5次，测定峰面积积分值。结果的RSD=0.20%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:分别精密吸取同一供试品溶液10 μL，于配制后0，4，8，12，24 h 时进样。结果峰面积积分值的 RSD 为 1.36%(n=5)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重现性试验:取利鼻片样品，配制供试品溶液5份，在上述色谱条件下进行测定。结果含量为2.35 mg/g，RSD为0.85%(n=5)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:取已知含量的供试品(批号为20090110，含量为2.35 mg/g)6份，精密称定，按低、中、高剂量分别加入木兰脂素对照品溶液(0.7952 g/L)适量，按供试品溶液的制备方法处理，依法测定。结果见表1。

表1 木兰脂素加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

按拟订的条件和方法，测定3批样品中木兰脂素的含量。结果批号分别为20090110，20090407，20090418的样品中木兰脂素平均含量为 0.684，0.698，0.738 mg/片。

3 讨论

分别考察了乙腈－水(38∶62)、乙腈－四氢呋喃－水(35∶1∶64)、乙腈－甲醇－四氢呋喃－水(30∶15∶1∶64)4种流动相。经试验，只有以乙腈－四氢呋喃－水(35∶1∶64)为流动相时，木兰脂素色谱峰与相邻色谱峰才能达到有效分离，色谱行为良好。

先分别用乙酸乙酯、乙醚和氯仿进行振摇提取，结果以乙酸乙酯作溶剂为最佳;同时进行了超声时间的考察，结果表明超声处理30 min后，木兰脂素基本被提取完全。上中性氧化铝柱是去除杂质，否则在木兰脂素峰附近处有一较大杂质峰，难以分离。

试验结果表明，本方法专属性强、重现性好，精密度、回收率都较满意，因此适用于辛夷药材及其复方制剂中木兰脂素含量的测定[4－6]。

[1]WS3－B－0741－91，卫生部药品标准·中药成方制剂(第四册)[S].

[2]苗明三，李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社，2000:557.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:126.

[4]周 琦.辛俐华.HPLC法测定鼻渊丸中木兰脂素的含量[J].中国药师，2006，9(3):213.

[5]徐丽华，崔保国，于宗渊，等.RP－HPLC法测定辛夷中木兰脂素与辛夷脂素的含量[J].药物分析杂志，2003，23(6):426.