复方荞桃颗粒的质量标准研究

伍朝君 邓志刚 成建国

1四川省乐山市职业技术学院（四川乐山614000）

2四川省乐山市中医院（四川乐山614000）

3重庆市中医院（重庆400021）

复方荞桃颗粒由金荞麦、黄连、白及、吴茱萸、木蝴蝶、核桃仁、砂仁等10味中药提取精制而成；具有泻火疏肝，和胃止痛之功效，适应于湿热瘀阻，肝胃郁热引起急、慢性胃炎，胃、十二指肠溃疡，反流性食管炎等胃脘疼痛疾病。为控制产品质量，本实验对方中金荞麦、黄连进行薄层色谱（TLC）鉴别研究，采用高效液相色谱法（RP-HPLC）测定黄连中盐酸小檗碱的含量。

1 仪器与试药

美国Agilent1100液相色谱仪。复方荞桃颗粒（乐山市中医院制剂室提供）。盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品鉴定所，110713-200208）。金荞麦对照药材（中国药品生物制品鉴定所，1114-200001）。黄连对照药材 （中国药品生物制品鉴定所，1114-200012）。乙晴为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 金荞麦的TLC鉴别 取本品5g加甲醇20mL，放置1h，加热回流1h，放冷，滤过，滤液浓缩至3mL，作为样品溶液。另取金荞麦对照药材2g，阴性样品5g，分别同法制成对照药材及阴性样品溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（1∶2∶0.2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷 25%磷钼酸乙醇溶液，在110℃加热至色谱相应的位置上，显相同颜色的斑 点。阴性样品无干扰，见图1。

2.1.2 黄连TLC鉴别 取本品3g，加甲醇30mL，加热回流30min，滤过，滤液浓缩至3mL，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照TLC法［1］试验，吸取上述3种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开虹内，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。阴性样品无干扰阴性对照无此斑点，见图2。

图1 金荞麦TLC图

图2 黄连TLC图谱

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18（250mm×4.6mm，4μm）；流动相：乙晴-0.033mol/L，磷酸二氢钾溶液（29∶71），以磷酸调节 pH 为 2.0；流量：1mL/min；检测波长：370nm。

2.2.2 系统适应性实验 取对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液，按2.2.3项下方法进行处理后进样，供试品溶液色谱图中有与对照品色谱图中盐酸小檗碱峰相对应的色谱峰，且该色谱峰与其他色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数为8700，阴性溶液无干扰，见图3。

图3 高效液相色谱图

2.2.3 溶液制备 对照品溶液：精密称取盐酸小檗碱对照品10mg，置50mL棕色量瓶中，加1%（v∶v）盐酸甲醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密吸取上述对照溶液1mL，置10mL棕色量瓶中，加1%盐酸甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL盐酸小檗碱20μg）。供试品溶液：取样品约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1%盐酸甲醇50mL，精密称定质量，60℃水浴15min，放冷，再精密称定重量，用1%盐酸甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 线性范围考察 精密称取盐酸小檗碱对照品15.0mg，置15mL量瓶中，加1%盐酸甲醇使溶解并稀释至刻度，精密量取0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mL，分别置 10mL 量瓶中，加 1%盐酸甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μL注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分为纵坐标（Y），盐酸小檗碱溶液质量浓度为横坐标（X），求得回归方程为：Y=5×10-5X-0.5225，r=0.9999。盐酸小檗碱溶液质量浓度在5.0～80.0μg/mL范围内进样，其峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验 取线性关系测定项下的10μg/mL对照品溶液，精密量取10μL进样，重复测定5次，测定峰面积，RSD=1.6%。

2.2.6 稳定性试验 取同一批号（090121）样品的供试液，分别于 0、2、4、8、16、24h 进行测定，结果供试品溶液中盐酸小檗碱的RSD为1.9%。表明样品供试液在24h内相对稳定。

2.2.7 加样回收试验 取复方荞桃颗粒样品 （批号20091003）约0.5g，精密称定，共6份，分别加入盐酸小檗碱对照品适量，混匀，按2.2.3项下方法制成供试品溶液后进样测定，结果表1。

表1 加样回收试验结果 （n=6）

2.2.8 样品含量测定 取3批复方荞桃颗粒样品（批号20090808、20091003、20091216），精密称定，按 2.2.3 项下方法制成供试品溶液，再按2.2.4项下方法进行衍生化处理后，照上述色谱条件测定，按2.2.4项下回归方程进行计算，结果3批样品盐酸小檗碱含量分别为 2.1、2.3、2.0mg/g。

3 讨 论

黄连具清热燥湿，泻火解毒的功效，是处方中治疗湿热痞满，呕吐吞酸，有舒肝和胃止呕之效的主要药味。黄连中主要成分为盐酸小檗碱，为此，选择黄连中盐酸小檗碱为含量测定指标，结果准确，方法简便且重现性好。

［1］国家药典委员会.中国药典：一部［M］.北京：化学工业出版社，2005：附录ⅥB.