江苏常州地区园林苗木根际寄生线虫的鉴定1)

胡 嫦

(江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室(南京林业大学)，南京，210037)

王 宇 谈家金 叶建仁

(常州出入境检验检疫局) (江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室(南京林业大学))

植物线虫的分布极广，每种植物几乎至少都有1种寄生线虫，目前世界上已记载的植物线虫已达200多属5 000余种［1］。近10多a来，我国园林苗木生产规模不断扩大，出口园林苗木业发展迅速，但苗木上的寄生线虫一直限制着其出口创汇。为了查明园林苗木根际寄生线虫的种类，笔者从江苏省常州地区一苗木出口基地采集多种园林苗木的根际土壤，对其中的寄生线虫进行了分离鉴定，从而为进一步研究其线虫病害的检疫和防治奠定基础。

1 材料与方法

1.1 样品的采集

于2010年4月6日，从江苏省常州地区金坛市一苗圃内共采集了21种园林苗木的根和根际土壤。21种园林苗木:蒲苇(Cortaderia selloana)1年生，芦竹(Arundo donax)5年生，黄菖蒲(Iris pseudoacorus)2年生，银边麦冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)3年生，金边麦冬(Liriope spicatavar.Variegata)2年生，常绿鸢尾(Iris tectorumMaxim)3年生，花菖蒲(Iris ensataThunb)2年生，海寿花(Pontederia cordata)1年生，金边丝兰(Yucca filamentosa)6年生，金森女贞(Ligustrum lucidumcv.Aureomarginatum)半年生，扶芳藤(Euonymus fortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)半年生，月季(Rosa chinensisJacq)2 年生，亚菊(Ajania pallasiana(Fisch.ex Bess.)Poljak)1 年生，洒金桃叶珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)半年生，常春藤(Hedera nepalensisvar.sinensis(Tobl.)Rehd)半年生，银枝小蜡(Ligustrum sinenseLour)1年生，浓香茉莉(Jasminum sambac(L.)Aiton)1年生，美丽月见草(Oenothera biennisL.High)1年生，天人菊(Gaillardia pulchella)1年生，红花继木(Loropetalum chinense(R.Br.)Oliver var.rubrumYieh)1 年生，金边黄杨(Euonymus japonicuscv.aureo-marginatus)1年生。每种苗木随机采集3株，每株采集根和根际土壤500 g作为一份样品，共采集样品63份。将样品装入采集袋中，带回实验室后及时分离。

1.2 线虫的分离鉴定

根样中植物线虫的分离采用直接解剖法和改良贝曼漏斗法。根际土壤样品中植物线虫的分离采用淘洗——过筛——改良贝曼漏斗法分离［1］。分离出来的线虫置于60～65℃水浴中处理2～3 min，进行温和杀死，然后用FG固定液(40%甲醛、甘油、蒸馏水的质量比为10∶1∶89)进行固定［1］。固定后的线虫制成临时玻片标本在光学显微镜下，根据形态特征描述(质量特征)和形态特征测计值(数量特征)进行线虫种类的鉴定。线虫形态特征测计采用de Man公式。线虫分类鉴定主要根据谢辉［2］分类系统，同时参照 Hunt［3］的分类系统。

1.3 形态特征测计指标

n为测计的标本数;L为体长(μm);a为体长/最大体宽;b为体长/体前端至食道与肠连接处的距离;b’为体长/体前端至食道腺末端的距离;c为体长/尾长;c’为尾长/肛门处体宽;V为体前端至阴门的距离×100/体长;V’为体前端至阴门的距离×100/体前端至肛门的距离;St为口针长度(μm);LMB为中食道球长(μm);WMB为中食道球宽(μm);T为尾长(μm);SP为交合刺长度(μm);Gub为雄虫引带长度(μm)。

2 结果与分析

通过对63份根和根际土壤样品中的寄生线虫进行分离鉴定，初步发现5种根际线虫，分别是拟裸露矮化线虫(Tylenchorhynchus paranudusPhukan＆Sanwal)，甘蓝矮化线虫(Tylenchorhynchus brassicaeSiddiqi)，裂片真滑刃线虫(Aphelenchus sparsusThorne＆Malek)，内卷滑刃线虫(Aphelenchoides involutusMinagawa)和伊朗平滑垫刃线虫(Psilenchus iranicusKheiri)。

拟裸露矮化线虫的镜检见图1A，其分类地位为:隶属于垫刃目(Tylenchida Thorne)、刺科(Belonolaimidae Whitehead)、矮化属(TylenchorhynchusCobb)［4］。测量值为:♀(n=23)L=(639.3±41(586.1 ～709.6))μm;a=28.2±1.5(26.4 ～30.8);b=5.0±0.2(4.7 ～5.3);c=14.4±1.4(12.2 ～16.4);c’=3.2±0.5(2.4 ～4.2);V=55.9±1.6(52.9 ～58.9);V’=60.1±1.5(57.3 ～62.8);St=(17.0±1.7(16.5 ～18.9))μm;LMB=(14.2±1.2(12.8 ～18.9))μm;WMB=(9.7±1.1(8.0 ～11.4))μm;T=(44.8±6.1(37.5 ～56.5))μm。♂(n=5)SP=(21.0±1.7(18.0 ～23.6))μm;Gub=(8.7±1.5(6.8 ～10.1))μm。

拟裸露矮化线虫形态描述:雌虫，虫体经温热杀死后呈开放的C形或线形。体表环纹显著，尾部环纹间距稍宽。唇区稍缢缩，呈半圆形，平滑。口针发达，口针基部球明显，前缘微突。中食道球卵圆形，有明显的瓣片;食道腺长梨形，与肠交界明显。阴门位于体中部约55%处，卵巢1对，直生。阴道长约阴门处体宽的1/2，尾部棒状，中部略细，尾端稍膨大，半球形，透明无环纹。雄虫，尾长38～44 μm，长圆锥形，尾端锐尖。精巢单个，直伸。交合刺长18.0～23.6 μm，略弯曲。引带发育较好，长6.8～10.1 μm，交合伞包至尾端。寄主为芦竹(Arundo donax)、银边麦冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)、花菖蒲(Iris ensataThunb)、海寿花(Pontederia cordata)、金边丝兰(Yucca filamentosa)、洒金桃叶珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)。

甘蓝矮化线虫的镜检图见图1B，其分类地位为:隶属于垫刃目、刺科、矮化属［5］。测量值为:♀(n=24)L=(591.7±60.9(415.6 ～692.9))μm;a=27.1±2.4(17.9 ～30.4);b=5.1±0.7(3.5 ～6.6);c=15.4±3.1(10.9 ～25.7);c’=2.8±0.4(2.0 ～3.7);V=57.4±1.2(54.7 ～59.9);V’=61.5±1.7(58.7 ～64.6);St=(15.6±1.8(9.3 ～18.0))μm;LMB=(12.9±1.5(10.3 ～16.0))μm;WMB=(8.6±0.9(6.8 ～ 10.5))μm;T=(39.5±6.7(23.3 ～55.1))μm。♂(n=16)L=(595.1±41.5(509.1 ～639.3))μm;a=26.7±2.9(19.3 ～ 32);b’=5.1±0.3(4.7 ～5.5);c=15.3±1.3(12.7 ～ 17.8);St=(16.2±1.3(13.1 ～18.1))μm;SP=(21.2±1.7(18.0 ～24.6))μm;Gub=(7.7±1.5(5.8 ～10.1))μm。

甘蓝矮化线虫形态描述:雌虫，雌虫虫体两端略变细，角质层环纹明显。唇区稍缢缩，口针发达，锥体部约等于杆部长度，口针基部球前缘略向侧倾斜。中食道球卵圆形，具明显瓣片。食道腺长梨形，与肠交界明显，贲门清楚，排泄孔位于食道腺前端水平处。卵巢2个，对生。尾圆锥形，末端钝尖，光滑，尾腹环约18个。雄虫，引带骨化，背有凸缘。交合刺发达，交合伞具纹，包至尾端。寄主为蒲苇。

裂片真滑刃线虫的镜检图见图1C，其分类地位为:滑刃目(Aphelenchida)、真滑刃科(Aphelenchidae)、真滑刃属(Aphelenchus)［8］。测量值为:♀(n=23)L=(704.1±82.4(502.8 ～770.2))μm;a=30.4±3.3(25.0 ～ 38.3);b=6.0±0.9(4.5 ～7.8);b’=4.4±0.5(3.6 ～5.5);c=30.2±5.1(17.3 ～38.8);c’=1.8±0.4(1.3 ～ 3.0);V=76.4±1.2(72.7 ～78.0);V’=75.9±14.9(74.6 ～81.3);St=(16.5±1.7(12.6 ～18.9))μm;LMB=(19.7±2.0(15.5 ～ 22.5))μm;WMB=(13.2±2.2(9.7 ～17.6))μm;T=(23.2±6.2(17.6 ～44.6))μm。

裂片真滑刃线虫形态描述:雌虫，虫体粗壮，圆筒形，两端稍细，体表环纹细。唇区低，前端平圆，不缢缩。口针长12.6～18.9 μm，无口针基部球。食道前体部圆筒状，中食道球大，呈椭圆形。食道腺长叶状，从背侧面覆盖肠，覆盖长度约为体宽的两倍。阴门位于虫体中后部，阴门唇隆起，阴道长约为体宽的1/3～1/2。单卵巢，前伸，卵母细胞单行排列。尾圆筒形，末端圆或宽圆，常有辐射状条纹或透明边缘。尾较短，尾长约为肛门处体宽的1.5倍。雄虫未见。寄主为蒲苇(Cortaderia selloana)、金边丝兰(Yucca filamentosa)、金森女贞(Ligustrum lucidumcv.Aureomarginatum)、扶芳藤 (Euonymus fortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)、月季(Rosa chinensisJacq)、亚菊(Ajania pallasiana(Fisch.ex Bess.)Poljak)、洒金桃叶珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)、常春藤(Hedera nepalensisvar.sinensis(Tobl.)Rehd)、银枝小蜡(Ligustrum sinenseLour)、浓香茉莉(Jasminum sambac(L.)Aiton)、天人菊(Gaillardia pulchella)、红花继木 (Loropetalum chinense(R.Br.)Oliver var.rubrumYieh)。

内卷滑刃线虫的镜检图见图1D，其分类地位为:隶属于滑刃目(Aphelenchida)、滑刃科(Aphelenchoididae)、滑刃属(Aphelenchoides)［6］。测量值为:♀(n=22)L=(421.1±72.6(313.1 ～485.4))μm;a=28.1±2.2(24.0 ～33.6);b=6.1±0.8(5.1 ～7.9);b’=4.4±0.5(3.7 ～5.7);c=8.2±3.1(5.7 ～17.7);c’=7.1±1.5(3.2 ～9.5);V=61.6±3.8(52 ～70.3);V’=71.0±3.4(59.1 ～79.2);St=(13.2±1.8(10.8 ～16.0))μm;LMB=(13.3±1.3(10.1 ～15.2))μm;WMB=(9.1±0.7(7.9 ～10.6))μm;T=(64.1±13.2(40.7 ～75.8))μm。

内卷滑刃线虫形态描述:雌虫，虫体较小，由中间向两端渐变细，尤其尾部更细;经温和热杀死后，虫体向腹面强烈弯曲，后部呈钩状。体长313～485 μm，体表环纹细密。唇区明显缢缩。口针细弱，具有很小的基部球。食道体部呈圆筒形，中食道球椭圆形至矩圆形，具有发达的瓣膜。食道腺长叶状，从背面覆盖肠的前端。排泄孔位于中食道球后约一个中食道球长度处，距离虫体前端约70 μm。阴门横裂，约位于虫体中后部62%处，阴道稍向前倾斜。单卵巢，前伸，可延伸到食道腺后缘处。后阴子宫囊长超过一个体宽。自肛门后尾逐渐变细，尾向腹面弯曲，呈钩状。尾末端钝圆，无尾尖突。雄虫未见。寄主为银边麦冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)、常绿鸢尾(Iris tectorumMaxim)、金森女贞(Ligustrum lucidumcv.Aureomarginatum)、扶 芳 藤 (Euonymusfortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)、亚菊(Ajania pallasiana(Fisch.ex Bess.)Poljak)、洒金桃叶珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)、常春藤(Hedera nepalensisvar.sinensis(Tobl.)Rehd)、银枝小蜡(Ligustrum sinenseLour)、浓香茉莉(Jasminum sambac(L.)Aiton)、天人菊(Gaillardia pulchella)、金边黄杨(Euonymus japonicuscv.aureo-marginatus)。

伊朗平滑垫刃线虫的镜检图见图1E，其分类地位为:隶属于垫刃目(Tylenchida)、垫刃科(Tylenchidae)、平滑垫刃属(Psilenchus)［16］。测量值为:♀(n=30)L=(978.5±156.1(824.2 ～1268.7))μm;a=35.7±2.3(30.7 ～46.0);b=6.5±0.6(5.3 ～8.1);c=7.7±0.6(6.7 ～8.8);c’=6.3±1.0(5.1 ～8.1);V=48.4±1.2(46.6 ～51.4);V’=57.0±1.7(54.2 ～61.2);St=(14.2±2.3(10.1 ～20.3))μm;LMB=(14.7±2.2(11.6 ～19.7))μm;WMB=(9.6±1.3(6.5 ～12.7))μm;T=(133.2±16.4(101.4 ～163.3))μm。♂(n==17)SP=(25.7±4.3(18.3 ～35.5))μm;Gub=(3.7±0.5(3.0 ～4.5))μm。

图1 常州园林苗木根际寄生线虫初步鉴定

伊朗平滑垫刃线虫形态描述:雌虫，虫体较大，热杀死后虫体向腹面弯曲，呈开放的“C”形;体环细，体中部环纹宽约1.0 μm，肛门后体环略粗。头架不发达，前端平，头部与体部连接处不缢缩，有环纹。口针弱，无口针基部球。食道前体部管状，中食道球卵圆形，具发达的肌肉质瓣，食道腺梨形，与肠交界清楚。阴门横裂，位于虫体中部稍前，双生殖腺，对伸;受精囊长，内有精子;卵母细胞双行排列。尾较长，末端棒状，有透明尾，约为尾长的1/3。雄虫，虫体比雌虫稍小;精巢前伸，末端转折或不转折;交合刺发达，引带不伸出泄殖腔口;交合伞位于泄殖腔周围。寄主为芦竹、黄菖蒲、银边麦冬、金边麦冬、花菖蒲、金边丝兰、扶芳藤、月季、洒金桃叶珊瑚、银枝小蜡、美丽月见草、天人菊、红花继木、金边黄杨。

3 结论与讨论

从常州金坛一苗圃地21种园林苗木中采集了63份根及根际土壤样品，分离鉴定其中的寄生线虫，初步鉴定出5种，分别是拟裸露矮化线虫(Tylenchorhynchus paranudusPhukan＆Sanwal)，甘蓝矮化线虫(Tylenchorhynchus brassicaeSiddiqi)，裂片真滑刃线虫(Aphelenchus sparsusThorne＆Malek)，内卷滑刃线虫(Aphelenchoides involutusMinagawa)和伊朗平滑垫刃线虫(Psilenchus iranicusKheiri)。已有报道从同一苗圃地采集10种园林苗木根际分离鉴定出双宫螺旋线虫、林伯滑刃线虫和喜悦平滑垫刃线虫3种寄生线虫［7］。矮化线虫属已报道130多种，主要在根部外寄生，但是在某些条件下，它们也可以侵入根内转为内寄生。拟裸露矮化线虫的寄主有大王椰子(Roystonea regia)、香蕉(Musa paradisiaca)等，在福建、广西等均有 分 布［8－9］。笔 者 在 芦 竹 (Arundo donax)、银 边 麦 冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)、花菖蒲(Iris ensataThunb)、海寿花(Pontederia cordata)、金边丝兰(Yucca filamentosa)和洒金桃叶珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)上分离发现，这六种园林苗木均为拟裸露矮化线虫的新寄主，同时该种线虫亦为江苏省新记录种。甘蓝矮化线虫的寄主有甘蓝(Brassica oleraceavar.capitataL.)、莴苣(Lactuca sativaL.)、白菜(Brassica pekinensis(Lour.)Rupr.)等，在江苏、北京、上海、广西、四川、香港等均有分布［8，10－11］。笔者在蒲苇根际首次发现该线虫。真滑刃线虫属已报道约30个种［2］。裂片真滑刃线虫的寄主有小麦(Triticum aestivumL.)、甘薯(Ipomoea batatas(L.)Lam.)、花生(Arachis hypogaeaL.)、大蒜(Allium sativumL.)等，在云南、贵州、广东、吉林、陕西、甘肃、美国等均有分布［8，12－13］。笔者在蒲苇(Cortaderia selloana)、金边丝兰(Yucca filamentosa)、金森女贞(Ligustrum lucidumcv.Aureomarginatum)、扶芳藤(Euonymus fortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)、月季(Rosa chinensisJacq)、亚菊(Ajania pallasiana(Fisch.ex Bess.)Poljak)、洒金桃叶珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)、常春藤(Hedera nepalensisvar.sinensis(Tobl.)Rehd)、银枝小蜡(Ligustrum sinenseLour)、浓香茉莉(Jasminum sambac(L.)Aiton)、天人菊(Gaillardia pulchella)、红花继木(Loropetalum chinense(R.Br.)Oliver var.rubrumYieh)等12种园林苗木根际土壤中发现，这些苗木均为裂片真滑刃线虫的新寄主。滑刃线虫属是滑刃目线虫中最大的属，该属线虫食性杂，寄主范围广，分布广泛，有些种类是农林业生产中的重要病原物。内卷滑刃线虫的寄主有桔梗(Platycodon grandiflorus(Jacq.)A.DC.)、苦参(Sophora flavescensAit.)、青绿苔草 (Carex breviculmisR.Br.)、苍耳 (Xanthium sibiricumPatrin ex Widder)、大豆(Glycine max(L.)Merr.)、黄花菜(Hemerocallis minorMill.)、等，在云南、辽宁、山东、安徽、日本、巴基斯坦等均有分布［8，14－153］。笔者在银边麦冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)、常绿鸢尾(Iris tectorumMaxim)、金森女贞(Ligustrum lucidum cv.Aureomarginatum)、扶芳藤(Euonymus fortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)、亚菊(Ajania pallasiana(Fisch.ex Bess.)Poljak)、洒金桃叶珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)、常春藤(Hedera nepalensisvar.sinensis(Tobl.)Rehd)、银枝小蜡(Ligustrum sinenseLour)、浓香茉莉(Jasminum sambac(L.)Aiton)、天人菊(Gaillardia pulchella)和金边黄杨(Euonymus japonicuscv.aureo-marginatus)根际土壤中发现，这11种园林苗木均为内卷滑刃线虫的新寄主，同时该种线虫亦为江苏省新记录种。平滑垫刃线虫属已报道约10个种，其中伊朗平滑垫刃线虫的寄主有无花果(Ficus caricaL.)、红枣(Ziziphus jujubaMill.)、桃树(Amygdalus persicaL.)等，在上海、新疆、黑龙江、云南等地有分布［16－18］。笔者在芦竹(Arundo donax)、黄菖蒲(Iris pseudoacorus)、银边麦冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)、金边麦冬(Liriope spicatavar.Variegata)、花菖蒲(Iris ensataThunb)、金边丝兰(Yucca filamentosa)、扶 芳 藤 (Euonymus fortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)、月季(Rosa chinensisJacq)、洒金桃叶珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)、银枝小蜡(Ligustrum sinenseLour)、美丽月见草(Oenothera biennisL.High)、天人菊(Gaillardia pulchella)、红花继木 (Loropetalum chinense(R.Br.)Oliver var.rubrumYieh)、金边黄杨(Euonymus japonicuscv.aureo-marginatus)等14种园林苗木根际土壤中发现，这些苗木均为伊朗平滑垫刃线虫的新寄主，同时该种线虫亦为江苏省新记录种。

江苏常州作为全国较大的绿化苗木生产基地之一，拥有优良的生产出口条件。国际花木市场对江苏常州花木的需求日益增加，然而国际口岸对苗木寄生线虫的检疫要求也愈来愈高，寄生线虫已成为制约常州花木顺利走向世界的检疫技术瓶颈。通过此次实验初步报道了多种园林苗木的根际寄生线虫，从而为开展苗木寄生线虫的检疫和防治奠定了较好的前期基础。

［1］冯志新.植物线虫学［M］.北京:中国农业出版社，2001.

［2］谢辉.植物线虫分类学［M］.2版.北京:高等教育出版社，2005.

［3］Hunt D J.Aphelenchida，Longidoridae and Trichodoridae:their sistematics and bionomics［M］.Wallingford:U K CAB international，1993.

［4］Phukan P N，Sanmal K C.Tylenchorhynchus paranudussp.andT.anulatus(Cassidy，1930)Golden，171 from Assam［J］.Indian Journal of Nematology，1982，12:383－385.

［5］Siddiqi M R.Studies onTylenchorhynchusspp.(Nematoda:Tylenchida)from India.Zeits［J］.Parasitkde，1961，21:46－64.

［6］Mingawa N.Aphelenchoides involutusn.sp.(Tylenchida:Aphelenchoididae)from Ishigaki Japan［J］.Japanese Journal of Nematology，1992，22:21－25.

［7］谈家金，王宇，胡嫦，等.三种园林苗木根际寄生线虫种类鉴定初报［J］.中国森林病虫，2010，29(6):5－8.

［8］刘维志.植物线虫志［M］.北京:中国农业出版社，2004.

［9］柯云.园林植物根部寄生线虫种类鉴定及植物源杀线剂的研究［D］.厦门:厦门大学生命科学学院，2008.

［10］徐建华，魏大为，詹裕定，等.江苏省大棚蔬菜寄生线虫的种类和发生［J］.南京农业大学学报，1994，17(1):47－51.

［11］张宇，高俊明，李红.太谷菜园植物寄生线虫种类调查［J］.山西农业科技，2009，37(8):54－59.

［12］王雪梅，赵洪海，刘维志，等.山东省济南和平度两地大蒜根际线虫种类鉴定［J］.青岛农业大学学报，2008，25(4):285－288.

［13］张宇，高俊明，李红.太谷县玉米田植物寄生线虫种类及垂直分布［J］.山西农业科技，2009，37(10):51－54.

［14］从日东，闫超杰，段玉玺.大连地区针叶树根部土壤中的4种滑刃线虫［J］.植物检疫，2007，21(1):12－14.

［15］林丽飞，胡先奇，刘春国，等.云南省灯盏花根际土壤寄生线虫的种类鉴定［J］.植物保护，2008，34(3):69－73.

［16］赵文霞，杨宝君.中国植物线虫名录［M］.北京:中国林业出版社，2006:67－59.

［17］古丽阿斯曼·米吉提，旺古丽·苏皮，谢辉.新疆果树根围寄生线虫新记录种的记述［J］.新疆农业大学学报，2007，30(3):40－43.

［18］周春那，谢辉，徐春玲，等.中国花卉植物寄生线虫新记录种记述［J］.华中农业大学学报，2005，24(1):10－14.