几种养殖鱼类血清转氨酶活性参考值的探讨

王丽宏 叶元土 张宝彤 萧培珍 唐精 张波

我国水域辽阔，气候多样，渔业和生物资源丰富，是世界上水产业相对较发达的国家之一，这些丰富多样的水生种质资源为我国水产业及国民经济的快速发展提供了重要的物质基础。但随着水产业的迅猛发展，产生了一系列影响其健康发展的不利因素，如环境影响（病毒、细菌、代谢毒素等）、饲料保管不善（脂肪氧化、蛋白质变性）、原料组分等，导致水产动物各种疾病的频繁发生，严重影响了养殖经济效益。到目前为止，我们对鱼病的判断还主要停留于定性描述，很难从实质上作出定量分析。近年来，关于动物健康参数的调查在人和鼠上的研究相对较多，但在鱼类方面尚未见文献报道，因此，建立一套系统的适合养殖鱼类的健康评价标准，已成为当前水产业发展的一个先导。

血清中各种生化指标比机体的理化组成能更快地反映组织的健康状况和机体的代谢机能。本文主要侧重研究了不同鱼类间血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)活性。AST和ALT是反映肝脏健康状态最敏感的酶学指标，对肝病的诊断治疗具有重要价值。通过本研究，以期为其标准的建立提供一个前期的铺垫，为我国渔业的健康、生态养殖，为养殖环境的改善等提供重要的技术支持。

1 材料和方法

1.1 试验鱼

试验用鳊鱼 (Parabramis pekinensis)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鲫鱼(Carassius auratus)、黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)、鲤鱼(Cyprinus carpio)、镜鲤(mirror carp)、罗非鱼(Tilapia)均为各地区主要养殖品种，其规格见表1。

1.2 采样

试验鱼全部称重，测量体长，随即进行尾静脉采血，离心（3500 r/min、10 min），分离血清，置液氮中低温保存，用于血清ALT、AST活性的测定。同时，解剖、分离肝（胰）脏，迅速取其适量样品放入波恩氏液（Bouin's）中固定，用于肝脏冰冻切片的制作，其余样品放置低温保存用于测定肝脏脂肪含量。

表1 不同地区几种鱼类间的生长情况

1.3 测定指标及分析方法

1.3.1 转氨酶活性及肝（胰）脏脂肪含量

血清中天门冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)两项生化指标均采用岛津全自动生化分析仪进行分析测定。

肝胰脏样品解冻后迅速采用恒温105℃烘干失水法进行干燥，然后采用索氏脂肪提取法进行粗脂肪含量的测定。

1.3.2 肝（胰）脏冰冻切片

取适量固定（Bouin's）后的肝胰脏组织，修成规整的组织块，包埋、修块、切片，切片厚度为 2～3 μm、干片、染色（苏木精、伊红）、干燥、中性树胶封片、干燥后进行观察拍照。

1.4 数据统计

数据均采用SPSS17.0统计软件对各项指标数据进行正态性检验，计算平均值与标准差及参考范围，结果用平均值±标准差（X±S）表示。

2 结果

2.1 不同地区各种鱼类肝脏脂肪含量(见表2)

表2 几种鱼类间的肝（胰）脏脂肪含量

2.2 不同地区各种鱼类血清转氨酶情况

试验测定了几种鱼类间的血清ALT、AST的指标，ALT、AST活性及ALT/AST区间范围见表3、表4。

表3 几种鱼类间的血清转氨酶活性范围

表4 几种鱼类间的血清转氨酶活性(U/l，X±S)

2.3 冰冻切片

解剖、分离肝脏，立即取部分肝脏组织，放入波恩氏液（Bouin's）中固定待用。取适当大小的组织块进行修整、清洗、切片（3 μm）、干片、染色、中性树胶封片、干燥、观察拍照。部分鱼的肝组织冰冻切片（A-D和A1-D1为互相对应不同倍数下的同一尾鱼,依次为鲤鱼、草鱼、鳊鱼、黄颡鱼、鲫鱼，其中 A-D×100，A1-D1×400，黄颡鱼的冰冻切片为表3数据中没有包括在内的病鱼）见图1。

由图1可见，CC-1、DD-1肝脏存在明显的脂肪化，特别是图D、D-1更为严重，细胞边界不清晰，肝脏细胞中充满了脂肪滴，细胞质严重破碎，细胞膜不完整，细胞核偏移甚至导致溶解消失，此外，还可见一些肝脏组织存在轻度的纤维化。

3 讨论

血清AST和ALT是肝病诊断的重要指标，正常时血清中AST和ALT含量较低，因此，其活性变化对了解肝病状况具有重要的意义。ALT绝大部分位于细胞浆，AST主要位于线粒体，肝损伤较轻时，仅限细胞膜的通透性增加，细胞浆内的ALT释放入血；在肝细胞受损严重时，线粒体里的AST释放入血。因此，通过对两种转氨酶正常参考值的建立，以便更快速地对鱼类肝病进行诊断，具有十分重要的意义。

图1 部分鱼的肝组织冰冻切片

由于我国各地自然环境的不同，各地鱼类区系组成存在一定的差异。因此，试验范围涉及较广，主要包括江苏、河北、广东、湖北等相关地区的主要品种，如草鱼、鳊鱼、鲤鱼、鲫鱼、黄颡鱼、罗非鱼等养殖鱼类。由试验结果可见，不同鱼类间转氨酶值存在一定差异，其中罗非鱼的ALT、AST活性相对较大，而且不同地区的同一种鱼类转氨酶活性也存在差别，这可能与鱼的品种、食性等具有一定的关联，此外，不同地区的养殖模式也存在差异，不易达到条件的完全统一，且以上这些条件均会对动物的生理状况产生影响。因此，为了更有效地分析评价，本试验在对其血清生化指标检测的同时，结合其肝脏组织学观察。通过冰冻切片观察可见，某些个体肝脏存在严重的脂肪化，如图E/E1为黄颡鱼，脂肪化较严重，且该个体对应的脂肪含量为54.48%，AST和ALT活性分别为423 U/l、277 U/l，均明显高于其均值 22.94±11.58%、(217.72±61.50)U/l、(18±5.94)U/l，具有一定的相关性。通过本试验的初步调查，将为该标准的进一步建立和完善奠定一定的基础。同时，结合各地区的养殖品种、管理状况、饲养环境及养殖模式等，建立适合于该地区的生化指标参考标准，对动物的健康养殖和调控，将具有十分重要的现实意义。但由于影响动物血清生化指标的因素较多，当前的试验研究正着手从细胞分子水平方面进行更深入的探讨。

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