失血性休克大鼠血清游离脂肪酸及甘油三酯水平变化分析

许会彬，李国勤，王 青，王化芬，王永清，刘文清，崔 庆

临床急诊创伤患者中，失血性休克（hemorrhagic shock，HS）是引起死亡的首要因素。HS发生后，机体短期内即出现明显的代谢改变甚至紊乱，包括糖类、脂类、氨基酸、维生素及核酸等物质[1-3]。笔者曾用代谢组学的方法对HS大鼠血清代谢组进行了研究，并筛查出代谢组主成分为乳酸和脂类[4]。脂类的主要功能之一是储存能量及氧化供能，而执行该功能的脂类主要包括游离脂肪酸 （FFA）和甘油三酯（TG）。本研究对不同程度HS及中度HS不同时相的大鼠血清FFA及TG水平进行了检测（由于重度HS存活时间相对较短，本文未就重度HS不同时相大鼠的相关指标进行观测），以探讨FFA及TG水平与休克程度及时相的相关性。

1 材料与方法

1.1 动物分组与模型制作 雄性Wistar大鼠50只，体重（250±10）g，由军事医学科学院动物中心提供。随机分为5组（每组10只）：正常对照（SHS）组；重度失血性休克（RHS）组；中度失血性休克（MHS），按休克后采血时间的不同又分为休克30 min（MHS-30 min）组、休克 60 min（MHS-60 min）组及休克120 min（MHS-120 min）组。各休克组以1%戊巴比妥钠（35 mgPkg，ip）麻醉，左侧股动脉插管连于恒流泵以备放血，1kUPkg肝素钠左侧股静脉注射使全血肝素化，手术灯照射给动物保温。以控压梯度放血模式，分三阶段放血。动物手术后稳定10 min后，开始快速放血，此时记为失血模型的0 min。RHS组第一阶段：放血 （10±1）min使平均动脉压降至（35±1）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），微量调整失血量维持血压稳定10 min；第二阶段：微量调整失血量维持血压在（40±1） mmHg，稳定 15 min；第三阶段：微量调整失血量维持血压在（45±1）mmHg，稳定30 min，三阶段放血完毕，制成RHS模型。模型制成60 min后，快速从股动脉采血。MHS组三阶段血压分别控制在（55±1） mmHg、（60±1） mmHg 及（65±1）mmHg。MHS组按模型制成后采血时间的不同又分为三组（MHS-30 min组、MHS-60 min组及MHS-120 min组），即在模型制成后，分别在30、60和120 min快速从股动脉采血。SHS组除不通过股动脉放血致休克处理外,其余同HS组。

1.2 仪器与试剂 酶标仪由BIO-RAD公司生产，FFA试剂盒由美国ADL公司生产；OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪由日本OLYMPUS公司生产。甘油三酯（TG）试剂盒由上海申能-德赛公司提供。

1.3 检测方法 FFA检测应用ELISA方法；TG检测试剂盒为酶法。

1.4 统计学处理 用SPSS11.5软件处理数据。数据先求出均数±标准差（±s），各组间比较采用t检验。

2 结 果

2.1 MHS组、RHS组及SHS组比较 ①MHS各组及RHS组FFA水平较SHS组均显著降低（P<0.01），而TG水平显著上升（P<0.01）；②RHS组与MHS组比较，FFA及TG水平均显著下降（P<0.01）。结果见表1。

表1 三组大鼠血清FFA及TG水平（±s）

表1 三组大鼠血清FFA及TG水平（±s）

与 SHS 组比较，△P<0.01；与 MHS 组比较，＃P<0.01

FFA（μg/ml） TG（mmol/L）178.57±14.54 0.39±0.12 115.16±19.76△ 1.37±0.39△25.11±5.90△＃ 0.66±0.09△＃组别 n SHS组 10 MHS组 30 RHS组 10

2.2 MHS三不同时相组之间比较 FFA水平随休克时间延长逐渐下降，MHS-60 min组较MHS-30 min 组 显 著 下 降 （P<0.01），MHS-120 min 组 较MHS-60 min组显著下降 （P<0.05）；TG水平呈先上升后下降的趋势，MHS-60 min组TG水平分别是MHS-30 min组及 MHS-120 min组的 2.28倍和1.99倍（P<0.01）。 结果见表2。

表2 MHS大鼠不同时相组间血清 FFA 及 TG 水平（±s，n=10）

表2 MHS大鼠不同时相组间血清 FFA 及 TG 水平（±s，n=10）

与 SHS 组比较，△P<0.01；与 MHS-30 比较，＃P<0.01；与 MHS-60 比较，▲P<0.05

组别 FFA（μg/ml） TG（mmol/L）SHS 组 178.57±14.54 0.39±0.12 MHS-30 min 组 149.79±18.39△ 0.60±0.20 MHS-60 min 组 115.16±19.76△＃ 1.37±0.39△MHS-120 min 组 104.50±16.06△▲ 0.69±0.18△

3 讨 论

无论是战时还是平时，失血性休克（HS）均是引起急诊创伤死亡的首要因素。随着人们对HS发生、发展病理生理机制认识的日渐深入以及多种救治措施的综合应用，使得HS的救治效果大为改善，救治成功率不断提高。但临床急诊中仍有部分患者，即使救治及时、控制出血、联合应用多种救治措施，却仍然难以摆脱死亡的威胁。原因之一在于HS是一种全身性、多系统、多器官参与的严重综合征，其有效救治的“黄金时间”非常短暂，另外其病程进展的病理生理机制尚未彻底阐明，救治措施尚需进一步完善。因此，对HS病程发展机制的探讨及如何改进救治措施一直是临床工作人员及科研工作者关注的热点[5-7]。

HS发生后，机体出现高代谢状态，同时机体出现胰岛素抵抗，交感神经末梢释出的去甲肾上腺素抑制胰岛素释放，使血循环中胰岛素水平降低。主要表现为胰岛素对促进全身和/或肌肉摄取葡萄糖的能力降低，细胞对糖的氧化利用受阻，导致高血糖。另外，胰高血糖素、皮质醇、儿茶酚胺浓度升高也是血糖升高的因素；而脂肪动员增强，血中FFA增多同时氧化增强。此时，FFA成为主要的供能物质。除脑组织以外，大多数组织均能氧化脂肪酸，尤其以肝脏和心脏最为活跃。正常情况下，肝仅氧化少量葡萄糖，主要由氧化脂酸获得能量；心脏主要利用脂肪酸作为能量底物，其能量供应的60%～70%来自于 FFA 的 β-氧化[8，9]。另外，FFA 在脂肪代谢中起到枢纽作用。一方面外源性的脂肪（TG）通过血浆转运，以FFA形式进人脂肪细胞，再合成脂肪储存，而体内的内源性脂肪主要在肝脏中合成，也通过血浆转运而进入脂肪细胞储存。另一方面储存的脂肪不断降解，以FFA形式进入各组织被氧化利用，使TG代谢处于动态平衡中。

本文中对不同程度HS及MHS不同时相大鼠血清FFA及TG检测结果显示：①MHS各组及RHS组FFA水平较SHS组均显著降低（P<0.01），而TG水平显著上升（P<0.01）；②RHS组与MHS组比较，FFA及TG水平均显著下降（P<0.01）；③MHS三不同时相组之间比较：FFA水平随休克时间延长逐渐下降，MHS-60 min组较MHS-30 min组显著下降 （P<0.01），MHS-120 min 组较 MHS-60 min 组显著下降 （P<0.05）；TG水平呈先上升后下降的趋势，MHS-60 min组TG水平分别是MHS-30 min组及 MHS-120 min组的 2.28倍和 1.99倍 （P<0.01）。以上结果提示：①血清TG水平变化，说明HS发生后，脂质储存池（脂肪细胞、肝脏等）释出TG，使外周血中TG水平升高，以适应机体的高代谢状态，脂肪动员加强，从而补充血浆FFA的含量，从能量消耗的角度可认为是机体的应激保护机制，而随着休克的加重，TG水平出现下降，一方面提示随着脂肪动员的持续，机体脂质储存池中TG含量不断减少；另一方面提示了TG向FFA的转化水平与FFA消耗相比，明显不足；②随着HS进程的延续，血清TG水平呈双相变化，即先上升后下降，说明HS发生后，一方面，脂质储存池（脂肪细胞、肝脏等）释出TG，使外周血中TG水平升高；另一方面，TG不断被氧化供能，以适应机体的高代谢状态。在HS初期，TG的释放量大于消耗量，因此呈现上升趋势；而随着HS病程的延长，TG的消耗量大于释出量，血浆浓度下降。该结果提示HS发生后，机体出现高代谢状态，FFA的消耗急剧增加，机体代偿对FFA的补充仍难以抵消机体高代谢所致FFA的减低；FFA的消耗量随着HS程度的加重而增加，能量的来源愈发不足；随着HS时间的延长，FFA的消耗量随之增加，能源物质的缺失愈发严重。因此，FFA及TG水平的变化大致反映了HS过程中能量代谢状况（图1）。

图1 HS状态能量代谢特点

综上所述说明，HS条件下的高代谢状态，FFA的消耗显著增加，机体的代偿机制难以缓解FFA的不足，提示补充或增加能量储备可能是一条有效的抗休克途径。

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