B细胞非霍奇金淋巴瘤患者FHIT与Bcl-2关系的初步探讨

杨 敏，陈 琦

(遵义医学院附属医院，贵州遵义563003)

脆性组氨酸三联体(FHIT)是一种抑癌基因，主要参与细胞生长与生长抑制信号的调控，在体内可诱导细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的增殖。Bcl-2基因在淋巴瘤的发生发展中起重要作用［1］。本研究采用免疫组化EnVision法对B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织中FHIT、Bcl-2蛋白进行检测，以探讨二者异常与B细胞NHL发病的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 NHL组为52例淋巴瘤标本，来自遵义医学院第一附属医院病理科2003～2008年病理存档石蜡包埋标本，其中男32例、女20例，年龄8～76岁、平均40岁。标本经甲醛液固定，常规石蜡包埋，4 μm切片，并以HE染色、免疫组化确定诊断。淋巴结内病变34例，淋巴结外病变18例。经形态及免疫组化证实为B细胞型NHL，病理分类和恶性度分级参照WHO(2001年)标准，其中低度恶性组12例为惰性淋巴瘤，中—高度恶性组40例为侵袭性淋巴瘤。另取10例组织细胞性坏死性淋巴结炎标本作对照。两组在年龄、性别上差异无统计学意义。

1.2 检测方法 试剂盒均购自Gene Tech(上海)有限公司，操作按说明书进行。以PBS代替一抗作阴性对照，试剂盒中已知阳性片作为阳性对照。主要步骤包括:制备的切片常规脱蜡水化;置0.3%过氧化氢中，PBS洗3次×5min;将切片浸泡于抗原修复液(FHIT蛋白用Tris-EDTA缓冲液pH 9.0微波煮沸10min后PBS洗3次×5min，Bcl-2用枸橼酸盐缓冲液pH 6.0高压煮沸2min)抗原修复;加一抗(即用型)鼠抗人抗体，4℃孵育24 h，PBS洗3次×5min;加二抗(EnVision复合物)，37℃孵育20min，PBS洗3次×5min;经DAB染色后，以苏木素复染细胞核，常规脱水、透明、封片。

1.3 结果判定 阳性信号呈棕黄色颗粒，阳性判定分别由两位病理医师在不了解临床情况下记数500个细胞，结果用半定量记分方法［2］。①按阳性细胞占细胞总数的多少分为:≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。②按细胞着色强弱分为:无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。然后以两项记分之和判断阳性程度:0～1分为(-)，2～3分为(+)，4～5分为(++)，6～7分为(+++)。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行秩和检验、秩相关分析，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 FHIT蛋白缺失结果 NHL组(-)38例、(+)4例、(++)5例、(+++)5例，缺失率为67.3%;对照组分别为 1、1、12、7 例，缺失率为73.1%。FHIT蛋白在NHL组中表达低于对照组(P＜0.01)。

2.2 Bcl-2蛋白表达结果 NHL组(-)8例、(+)3例、(++)16例、(+++)25例，阳性率为84.6%;对照组分别为6、1、2、1例，阳性率为40%。Bcl-2蛋白在NHL组中表达高于对照组(P＜0.05)。

2.3 相关性结果 NHL组中FHIT蛋白、Bcl-2蛋白表达呈负相关关系(秩相关 rs=-0.593、P＜0.01)。

3 讨论

很多研究证实人类多种肿瘤存在FHIT结构的异常，其中以外显子的异常最为常见［3］，主要是缺失外显子5和8，其他异常较少见。FHIT蛋白通过调控细胞周期和诱导细胞凋亡来抑制肿瘤发生。研究表明，在肺、食管、胃、肾、子宫颈、胰腺、乳腺等肿瘤组织中存在FHIT蛋白表达下降或缺失［4］。

Bcl-2是一种原癌基因，通过阻断细胞凋亡来影响细胞生存［5］。Bcl-2基因过度表达可引起肿瘤细胞对凋亡的抵抗。Bcl-2基因在淋巴瘤的发生发展中起重要作用。研究报道约15%的弥漫大B细胞淋巴瘤患者有染色体t(14∶18)易位，然而有40%～60%的弥漫大B细胞淋巴瘤患者表达Bcl-2蛋白，且与预后不良相关［6］。

B细胞NHL患者FHIT蛋白的研究国内尚未见报道。本研究结果显示，53例B细胞NHL病理切片中35例(73.1%)存在FHIT蛋白表达缺失，而Bcl-2蛋白阳性表达率为84.6%，二者呈负相关。提示FHIT蛋白的缺失在B细胞NHL的发生发展中起重要作用，在FHIT蛋白缺失的病理切片中存在Bcl-2蛋白的高表达，支持FHIT蛋白可诱导细胞凋亡的发生，而Bcl-2蛋白过度表达可引起肿瘤细胞对凋亡的抵抗，FHIT蛋白的缺失可能与线粒体的内部通道细胞凋亡受阻有关，但该过程如何介导细胞凋亡有待进一步研究。

［1］Miyashita T，Reed JC.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy-induced apoptosis in a human leukemia cell line［J］.Blood，1993，81(1):151-157.

［2］马大烈，白辰光.免疫组织化学阳性标记结果的观察和判断［J］.临床与实验病理学杂志，2003，19(5):557-560.

［3］Tai SK，Lee JI，Ang KK，et al.Loss of Fhit expression in head and neck squamous cell carcinoma and its potential clinical implication［J］.Clin Cancer Res，2004，10(16):5554-5557.

［4］An HJ，Kim KR，Kim IS，et al.Prevalence of human papillomavirus DNA in various histological subtypes of cervical adenocarcinoma:a population-based study［J］.Mod Pathol，2005，18(4):528-534.

［5］Hermine O，Haioun C，Lepage E，et al.Prognostic significance of bcl-2 protein in expression in aggressive non-Hodgkin's lymphoma:Groupe d'Etude des Lymphomas de I'Adulte(GELA)［J］.Blood，1996，87(1):265-272.

［6］Gascoyne RD，Adomat SA，Krajewski S，et al.Prognostic significance of Bcl-2 protein expression and Bcl-2 gene rearrangement in diffuse aggressive non-Hodgkin's lymphoma［J］.Blood，1997，90(1):244-251.