β2-兴奋剂类药物残留检测的研究进展

赵晓凤，徐雪华，万宇平 ，李 静

（1.新疆兽药饲料监察所，新疆 乌鲁木齐 830000；2.乌鲁木齐市农产品质量安全检测中心，新疆 乌鲁木齐 830000；3.北京勤邦生物技术有限公司，北京 102206）

β2-兴奋剂类药物（β2-肾上腺素受体激动药，BAA）是一类与肾上腺素受体结合，激动受体，产生肾上腺素样作用的药物的总称，又可称为拟交感胺类药物，基本化学结构为β-苯乙胺，一般可分为苯胺型（如克伦特罗，CL）、苯酚型（如沙丁胺醇，SAL）、苯二酚型（如特布他林）等3大类。由于β2-兴奋剂类药物具有降低脂肪含量，提高瘦肉率的作用，所以许多生产者就采用BAA作为饲料添加剂来提高瘦肉率和改善胴体品质。后来发现BAA对人体有潜在的危害，现已被世界各国列为禁止用于食品动物的化学物质。因此，研究BAA残留对人类健康有着积极的意义。

1 检测方法

目前对BAA类药物残留检测的方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、气/质联用分析法（GC/MS）、放射免疫分析法（IA）、气相色谱法（GC）、高效薄层色谱法（HPTLC）、液/质联用分析法（LC/MS）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）和放射受体分析法等。

1.1 高效液相色谱法（HPLC） HPLC是具有高效分离和检测能力的方法，我国将其作为检测瘦肉精的半确证性方法，其最低检测限为0.05μg/kg，优点是精确度高，假阳性率低，缺点是检测过程烦琐，时间长，价格高，操作难度较大且只能用于单样本检验。赵榕等运用反相高效液相色谱法测定猪肝中的盐酸克伦特罗，在243 nm检验波长下，用Waters-alliance高效液相色谱系统进行检测，流动相为甲醇和0.01mol/L磷酸二氢钠（35∶65），最后根据保留时间定性，扫描光谱进一步确证，通过对试样峰高或峰面积与标准峰高或峰面积进行比较定量，得出最低检出浓度为0.25mg/kg，浓度在0.1～2.0μg/mL具有很好的线性关系，回收率达（101.2±9.75）%。

1.2 气/质联用分析法 （GC/MS） 气/质联用分析法（GC/MS）比HPLC灵敏度更高，假阳性率更低，在我国为确证性方法，其优点是可以对多种残留物进行定性、定量分析，但要求样品有较低的沸点且具有热稳定性。而沙丁胺醇由于极性大、沸点高，不适宜直接用这种方法分析，往往需要衍生化后再作进一步检验。苗虹等人选用BSTFA-甲苯作衍生物，以弱极性或非极性的毛细管柱为气相色谱柱，得出此法的检测限为0.5g/kg，回收率为75.5%。

1.3 放射免疫分析法（IA） 放射免疫分析法（IA）的主要作用机理是对盐酸克伦特罗残留进行放射性免疫分析，用氚标抗原来测定抗体。但由于其分子量不大，不能成为抗原，故首先要把它与其他载体结合成半抗原再行检测。这种方法灵敏度要比ELISA高，但由于实验条件要求较高，目前不能广泛应用，相关的报道也不多。用此技术检测尿、肝中的瘦肉精残留量，其检测灵敏度尿样为0.13mg/mL，肝脏为0.461g/kg。Normand Braulieu等（1985）首次用SAL-BSA作连接物免疫家兔，获得了抗SAL多克隆抗体，用C14标记琥珀酸酐，建立了检测SAL的放射免疫分析方法。Adam等（1990）用SAL-BSA连接物免疫小鼠，首次制备了抗SAL单克隆抗体，并用此单抗进行了SAL残留的放射免疫分析。Delahaut等利用SAL抗血清研究出了可以进行多种BAA类药物检测的RIA试剂盒，该试剂盒和CL的交叉反应是118%，检测限达1～4μg/kg。

1.4 酶联免疫吸附测定法（ELISA） Bucknall等（1993）用CL-OA偶联物免疫家兔获得了抗CL多克隆抗体，并建立了CL的竞争ELISA检测法，用于检测牛肝中的CL残留。其他研究者还分别用牛血清蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）连接CL免疫兔、羊获得多克隆抗体，建立了ELISA、RIA等免疫检测方法。Petruzzelli等（1996）用CL－BSA连接物作免疫原免疫Balb/c小鼠，用杂交瘤技术首次获得CL的单克隆抗体，建立了检测CL的竞争ELISA法，并对马尿和人尿进行了分析，其灵敏度达1 μg/L。近几年国内对CL、SAL残留检测的报道逐渐增多，多名研究者都建立了酶免疫分析方法用于检测动物组织、饲料中的CL和SAL。王建平等在国内首次采用SAL-BSA免疫家兔制备SAL多克隆抗体，建立了检测猪肝与猪尿中SAL与CL的ELISA法，得出检测限为0.48μg/kg。

1.5 其他方法 除了以上提到的快速筛选方法和确证检测方法外，还有其他用于检测BAA残留的分析方法。汤晓勤等（2004）建立了一种单极扫描极谱法来检测猪肉中的CL，其检测限为1.2 μg/kg，此方法无需昂贵的仪器，适于基层实验室使用。胥传来等（2005）曾报道采用间接竞争化学发光法检测猪肉中的CL，检出限可达0.01μg/L，检测范围为0.04～25.8μg/L。段建平等（2005）建立了一种可同时检测饲料中SAL、CL和西马特罗的毛细管区带电泳法，检测限达20μg/kg，该方法可直接用于对饲料样品的检测。戴华等（2003）建立了一种HPLC法用于检测饲料中的SAL和CL，使用二极管阵列检测器检测，检测限分别为0.36 μg/g和0.1 μg/g。张素霞（2005）曾报道了一种检测猪饲料中RAC的HPLC法，用荧光检测器检测，检测限达0.48 μg/g。近几年，国内有多名研究者都建立了仪器分析方法用于对此类药物的残留检测。

2 分析比较

目前，国内外的食品安全事件之所以接连发生，除了有关食品质量安全的法律法规不健全之外，食品检测技术不过关、检测仪器使用不方便也是很重要的原因。因此为保护人类健康，进行有效的监管，尽快建立一种实用、快捷、准确可靠的检测技术至关重要。

由于各种检测方法都存在自身的优点和缺点，故对各类检测方法要进行合理运用。对于BAA类药物残留检测来说，虽然高效液相色谱法、GC/MS法等具有精确可靠、灵敏度高、重复性好以及假阳性少等优点，但需要昂贵的仪器设备，而且要选择出合理的前处理条件和色谱条件，单位时间内能处理样品的能力有限。酶联免疫测定法适合于对药物残留的初步筛选，它能在短短的几个小时内检测几十上百个试样，属于快速检测方法。它不需要复杂的仪器设备，而且由于抗体对抗原有高度的特异性，因此检测灵敏度较高；同时由于抗原抗体发生反应的条件比较简单，所以样品前处理可以简化，使得整体操作简单；通过酶显色，用酶标仪直接读数判定结果，速度快，检测成本低，非常适合在基层检测部门应用。

近几年国内对BAA类药物残留的免疫法检测报道逐渐增多，但大多是针对CL，虽然也制备出SAL单克隆抗体，但对SAL的免疫研究和残留检测还处于起步阶段。因此，尽快建立一套完整的BAA类药物残留检测方法，对于进一步健全和完善我国食品安全保障体系，维护社会稳定，促进经济发展和国际贸易市场竞争力具有十分重要的理论意义和现实意义。

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