ATP与Kv1.2相互作用在HIE后阿米巴样小胶质细胞活化中的机制研究

李 凡 何 亮 龚 敏 李树清

昆明医学院病理生理学教研室，昆明650500

ATP与Kv1.2相互作用在HIE后阿米巴样小胶质细胞活化中的机制研究

李 凡 何 亮 龚 敏 李树清

昆明医学院病理生理学教研室，昆明650500

目的：以炎症介质的生成作为阿米巴样小胶质细胞（Amoeboid microglial cells，AMC）活化的指标，重点观察缺血缺氧性脑病（Hypoxia Ischemia encephilopathy，HIE）后 Kv1.2与三磷酸腺苷（Adenosine 5'-triphosphate，ATP）诱导的AMC活化间的关系，进一步探索HIE后AMC活化与ATP之间可能存在的分子机制。方法：通过荧光双重标记，观察大鼠出生后1天、3天、5天、10天、14天AMC表达Kv1.2和ATP受体P2X4的改变；建立新生大鼠HIE动物模型，观察Kv1.2和ATP受体P2X4表达的时间消长变化。体外采用缺氧和ATP诱导激活AMC，通过Real-time PCR和 Western Blotting技术，分别从mRNA和蛋白质水平检测缺氧和ATP诱导AMC后，AMC表达Kv1.2、P2X4、白细胞介素1-β（Interleukin-1β，IL-1β）和肿瘤坏死因子—α（Tumor necrosis factor，TNF-α）的改变；以PBFI为荧光指示剂，观察缺氧及ATP诱导后AMC胞内K＋浓度的变化；最后，使用Kv1.2通道的特异性阻断剂Ts Tx，观察阻断Kv1.2通道对缺氧和ATP诱导AMC活化后，AMC胞内K＋浓度及表达IL-1β、TNF-α的影响。结果：HIE后Kv1.2、P2X4表达出现增加；体外缺氧和ATP诱导AMC活化后，Kv1.2、P2X4、IL-1β和TNF-α在mRNA和蛋白质水平表达出现上调；ATP激活AMC后，Kv1.2表达的上调，呈现浓度和剂量依赖效应，同时，细胞内K＋浓度降低，利用Ts Tx阻断Kv1.2通道，发现AMC胞内K＋浓度有所恢复，IL-1β和TNF-α的表达亦出现下调。结论：Kv1.2与HIE诱导的AMC活化释放炎症介质相关。