恶性黑素瘤组织中Bmi-1及增殖细胞核抗原的表达

庞琳娜,张江安,于建斌,甄 希,徐文博

郑州大学第一附属医院皮肤科郑州 450052

#通讯作者,男,1962年5月生,博士,教授,主任医师,研究方向:皮肤肿瘤,E-mail:yjbdoctor@sina.com

干细胞再生因子 Bm i-1是一种转录抑制因子,属于转录因子多梳基因家族,在胚胎发育、神经干细胞及白血病干细胞的维持和自我更新过程中发挥关键的调控作用[1-3]。近年研究[4-6]表明,Bmi-1的高表达与多种肿瘤干细胞的自我更新及肿瘤的侵袭性关系密切。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是真核生物复制复合体的重要成分,具有协调DNA复制、调控细胞周期等多种生物学功能,与肿瘤的发生发展和恶性程度相关[7-9]。作者应用免疫组织化学方法检测恶性黑素瘤(malignantmelanome,MM)、皮内痣组织中Bmi-1及PCNA蛋白的表达情况,探讨二者在MM发生发展中的意义。

1 材料与方法

1.1 标本收集 从郑州大学第一附属医院病理科2007年 1月至 2009年 9月存档蜡块中挑选病理诊断明确、临床资料完整的标本共66例。其中MM 36例[男 19例,女17例,年龄 32～87(61.4±12.9)岁,病程4.0～28.0(15.7±7.1)个月;26例皮肤原发性黑素瘤,10例皮肤及皮外转移性黑素瘤],皮内痣 30例[男 14例,女 16例,年龄 8～72(25.34± 22.81)岁,病程3.0～58.0(30.9±15.0)个月]。所有病例术前均未行化疗或其他治疗。

1.2 Bmi-1及PCNA的免疫组化SP法检测 鼠抗人Bmi-1单克隆抗体(即用型)购自美国Upstate公司,PCNA单克隆抗体(即用型)、SP-9000免疫组化试剂盒和AEC显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。按照说明书步骤操作。用PBS液代替一抗作空白对照,用已知的阳性片作为阳性对照。光学显微镜下观察组织标本的着色程度。Bmi-1与PCNA蛋白阳性表达均定位于细胞核内,呈红色颗粒状。高倍镜下取 4个不同的视野,计数细胞总数及阳性细胞数[10]。按阳性细胞所占的百分比计分:阳性细胞率 ＜10%为 1分,10%～为 2分,50%～为3分,75%～为4分;按染色的强弱程度计分:阴性染色计为 1分,弱染色计为 2分,中等强度染色计为 3分,强染色计为 4分。根据二者的乘积判断结果,＞4分为阳性表达。

1.3 统计学处理 采用SPSS 16.0进行分析,应用χ2检验、Fisher精确概率法比较MM和皮内痣组织中Bmi-1、PCNA蛋白阳性表达率,应用列联系数rP分析MM组织中Bm i-1与PCNA蛋白表达的关联性。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 2种组织中Bmi-1及PCNA蛋白的表达 Bmi-

1和PCNA蛋白主要在肿瘤细胞的胞核中表达,见图1。MM、皮内痣组织中Bm i-1蛋白的阳性表达率分别为61.1%(22/36)、20.0%(6/30),差异有统计学意义(χ2=11.323,P=0.001);PCNA蛋白的阳性表达率分别为80.6%(29/36)、10.0%(3/30),差异有统计学意义(χ2=32.614,P＜0.001)。原发性黑素瘤和转移性黑素瘤组织中Bmi-1蛋白的阳性表达率分别为57.3%(15/26)和70.0%(7/10)、Bmi-1蛋白的阳性表达率分别为73.1%(19/26)和100.0%(10/10),差 异均无统计学意义(P=0.706和0.155)。

图1 2种组织中Bm i-1及PCNA蛋白的表达

2.2 MM组织中Bm i-1与PCNA蛋白表达的关联性 见表1。

表1 MM组织中Bm i-1及PCNA阳性表达的关联性 例

3 讨论

作者的研究结果显示,MM组织中Bmi-1蛋白的表达高于皮内痣组织,与文献[11]报道结果一致。原发性黑素瘤和转移性黑素瘤组织中Bmi-1蛋白的阳性表达率差异无统计学意义,提示 Bmi-1与MM转移可能没有直接关系,但由于病例数偏少,尚需进一步证实。另一方面,由于 Bmi-1已作为干细胞标志在多种肿瘤干细胞表达,该课题组前期的研究结果已提示干细胞标志物CD133、Nestin和CD 44以及肿瘤多药耐药基因 ABCG2[10-13]均在 MM中高表达,结合该研究再次提示 MM中可能存在肿瘤干细胞。

该研究结果显示,MM组织中PCNA的阳性表达率高于皮内痣组织,但原发性黑素瘤与转移性黑素瘤组织间其阳性表达率差异无统计学意义,提示二者之间的细胞增殖程度类似。

另外,该研究结果还显示MM组织中Bmi-1与PCNA蛋白的表达有关,也即Bmi-1的高表达与肿瘤细胞的增生活跃相一致。因此推测Bmi-1和PCNA参与了MM的发生发展。

[1]Häyry V,Tanner M,Blom T,et al.Copy number alterations of the polycomb gene BMI1 in gliomas[J].Acta Neuropathol,2008,116(1):97

[2]Fasano CA,Phoenix TN,Kokovay E,et al.Bmi-1 cooperates with Foxg1 tomaintain neural stem cell self-renewal in the forebrain[J].Genes Dev,2009,23(5):561

[3]Bhattacharyya J,Mihara K,Yasunaga S,et al.BMI-1 exp ression is enhanced through transcriptional and posttranscriptional regu lation during the progression of chronic myeloid leukem ia[J].Ann Hematol,2009,88(4):333

[4]Lukacs RU,Memarzadeh S,Wu H,etal.Bmi-1 is a crucial regu lator of prostate stem cell self-renewal andmalignant transformation[J].Cell Stem Cell,2010,7(6):682

[5]Shimono Y,Zabala M,Cho RW,et al.Downregulation of m iRNA-200c links breast cancer stem cells with normal stem cells[J].Cell,2009,138(3):592

[6]He S,Iwashita T,Buchstaller J,et al.Bm i-1 over-exp ression in neural stem/progenitor cells increases proliferation and neurogenesis in cu lture but has little effect on these functions in vivo[J].Dev Biol,2009,328(2):257

[7]Naryzhny SN.Proliferating cell nuclear antigen:a proteom ics view[J].CellMol Life Sci,2008,65(23):3789

[8]陈志敏,史惠蓉.子宫内膜腺癌组织中核干细胞因子和增殖细胞核抗原的表达[J].郑州大学学报:医学版, 2009,44(3):562

[9]苏联珍,吴静.PTEN和PCNA在子宫内膜癌组织中的表达[J].西安交通大学学报:医学版,2007,28(2):187

[10]林妙霞,文卓夫,冯智英.大肠癌中Bm i-1的表达及临床病理意义[J].中国病理生理杂志,2009,25(3):497

[11]Mihic-Probst D,Kuster A,Kilgus A,et al.Consistent expression of the stem cell renewal factor BMI-1 in primary andmetastatic melanoma[J].Int JCancer,2007,121(8):1764

[12]苏蓓蓓,张江安,于建斌,等.干细胞标志物CD 133、Nestin和CD 44在恶性黑素瘤皮损中的表达及意义[J].中华皮肤科杂志,2009,42(11):751

[13]徐文博,张江安,于建斌,等.ABC转运蛋白ABCG2在皮肤黑素瘤中的表达[J].中国皮肤性病学杂志,2010,24(5):395