近交系小鼠过氧化氢酶-2遗传生化标记位点的研究

王 洪，刘双环，王淑菁，岳秉飞

（中国药品生物制品检定院，北京 100050）

遗传生化标记检测法是一种简便、迅速、准确地保证近交系小鼠遗传质量的方法。选择一些在品系间具有多态性的同工酶和异构蛋白作为生化标记，将动物脏器组织匀浆上清液、血液中的酶、蛋白质等进行电泳后，以特异的生物化学方法进行染色来识别待测的性状。国家标准 GB/T 14927.1—2008中显示小鼠遗传生化标记检测的14个位点里有5个生化位点存在杂和形式，并且其相应的杂合图谱在最新版本的国家标准中可以找到。杂合图谱为近交系小鼠的遗传质量控制提供了判断依据。过氧化氢酶-2是近交系小鼠生物化学标记基因检测法的14个生化位点之一，在现行的国家标准里并没有过氧化氢酶-2的杂合型图谱的描述。过氧化氢酶-2是取小鼠的肾匀浆，进行醋纤膜电泳，根据电泳条带的快慢来判断该位点的基因型。该位点的染色方法简便迅速，但是条带很宽，对于杂合型的判断很难，也未见相关报道。基于此，本文对小鼠遗传生化标记位点过氧化氢酶-2的杂合型图谱进行探讨［1，2］。

1 材料和方法

1.1 实验动物

8周龄近交系小鼠，CBA/Ca，雄，4只，SPF级，来自上海斯莱克实验动物有限责任公司［SCXK （沪）2007-0005］；

8周龄近交系小鼠，BALB/c，雌，4只，SPF级，来自国家啮齿类实验动物种子中心［SCXK（京） 2005-0004］；

8周龄近交系小鼠，C57BL/6，雌，4只，SPF级，来自国家啮齿类实验动物种子中心［SCXK（京） 2005-0004］。

1.2 实验材料、仪器及试剂

Tris和柠檬酸，均为分析纯，北京化学试剂公司提供。

Ce-2标准样品试剂盒及染色用试剂盒，中国药品生物制品检定所提供。

醋酸纤维素膜（涤纶基），浙江台州路桥四甲生化塑料厂提供。

电泳槽，北京市六一仪器厂产品。

电泳仪，BIO-RAD Model 3000Xi，美国。

毛细管离心机，IEC MB CENTRIFUGE，美国。低温高速离心机，HITACHI 20PR-52D，日本。酸度计，sartorious PB-10，德国。

1.3 实验方法

F1代的培育：

将1只雄性 CBA/Ca与2只雌性 BALB/c同居，21 d之后，7只杂交F1代动物CCBF1出生。

将1只雄性 CBA/Ca与2只雌性 C57BL/6同居，21 d之后，5只杂交F1代动物B6CBF1出生。

F2代的培育：

A组，将1只雄性CBA与2只雌性B6CBF1同居，20 d之后，5只F2代动物出生。

B组，将1只雄性 CBA与2只雌性 CCBF1同居，26 d之后，7只F2代动物出生。

C组，将1只雄性B6CBF1与2只雌性C57BL/ 6同居，42 d之后，6只F2代动物出生。

D组，将1只雄性CCBF1与2只雌性CCBF1同居，22 d之后，9只F2代动物出生。

E组，将1只雄性CCBF1与2只雌性 BALB/c同居，30 d之后，6只F2代动物出生。

F组，将1只雄性B6CBF1与1只雌性B6CBF1同居，30 d之后，7只F2代动物出生。

取六组实验的父母本和所有F2代，共52只动物，按照GB/T 14927.1—2008对52只小鼠进行Ce-2遗传生化标记检测［3，4］。

2 结果

六组52只F2代小鼠过氧化氢酶-2生化标记位点的基因型和表现型，见表 1和图1、2、3、4、5和6。

表1 F2代小鼠 过氧化氢酶-2生化标记位点的基因型Tab.1 The genotypes of F2 mice for Ce-2 biochemical marker

3 讨论

图1 A组动物过氧化氢酶-2结果Fig.1 The rusult of Ce-2 of A mice

图2 B组动物过氧化氢酶-2结果Fig.2 The rusult of Ce-2 of B mice

图4 D组动物过氧化氢酶-2结果Fig.4 The rusult of Ce-2 of D mice

图5 E组动物过氧化氢酶-2结果Fig.5 The rusult of Ce-2 of E mice

图6 F组动物过氧化氢酶-2结果Fig.6 The rusult of Ce-2 of F mice

3.1 父本 CBA表现型为 a型，母本 B6CBF1表现型为a型，如果双方基因型均为纯和的话，F2代动物不应该出现b型。已知父本CBA为纯合a型，母本B6CBF1为已知纯合的CBA（b型）和已知纯合的C57BL/6（a型）交配得到的杂交 F1代。虽然该F1代表现为a型，但是其理论基因型应为ab型，F2代中纯和的b型动物出现的几率为50％，这就是F2代5只动物中有1只出现 b型的原因，也说明 a型和b型基因不是共显性的，a型为完全显性。

3.2 父本CBA表现型为a型，母本CCBF1表现型为a型，如果双方均为纯合型的话，F2代动物不能够出现 b型。已知父本 CBA为纯合 a型，母本CCBF1为已知纯合的 CBA（b型）和已知纯合的BALB/c（a型）交配得到的杂交 F1代。虽然该 F1代表现为a型，其理论基因型应为ab型，F2代中纯合的b型动物出现的几率为50％，这就是 F2代7只动物中有3只出现b型的原因，也说明a型和b型基因不是共显性的，a型为完全显性。

3.3 父本B6CBF1为a型，母本C57BL/6为a型。父本B6CBF1为已知纯合的CBA（b型）和已知纯合的C57BL/6（a型）交配得到的杂交F1代。虽然该F1代表现为a型，其理论基因型应为 ab型，可是母本C57BL/6为纯合a型，即使F2代出现ab杂合基因型，因为a型基因的完全显性，F2代中也不应该出现b型表现型。这与实际检测结果一致，F2代的6只动物均表现为a型。

3.4 父本和母本都是CCBF1，为a型，CCBF1为已知纯合的CBA（b型）和已知纯合的BALB/c（a型）交配得到的杂交F1代。虽然该F1代表现为a型，其理论基因型应为ab型。F2代动物有可能出现纯合b型的几率为25％。在实际检测中，9只F2代动物均表现为a型。即使有杂合ab型动物存在，由于a型基因的完全显性，表现型也只能是a型。

3.5 父本CCBF1为a型，母本BALB/c为a型，父本CCBF1为已知纯合的CBA（b型）和已知纯合的BALB/c（a型）交配得到的杂交 F1代。虽然该 F1代表现为a型，其理论基因型应为ab型，可是母本BALB/c为纯合 a型，即使 F2代出现杂合基因型，因为a型基因的完全显性，F2代中也不应该出现b型表现型。这与实际检测结果一致，F2代的6只动物均表现为a型。

3.6 父本和母本都是B6CBF1，为a型，B6CBF1为已知纯合的 CBA（b型）和已知纯合的C57BL/6（a型）交配得到的杂交F1代。虽然该F1代表现为 a型，其理论基因型应为ab型。F2代动物有可能出现纯合的 b型，几率为25％。在实际检测中，7只F2代动物中有1只表现为b型。

3.7 六组实验的结果充分说明，过氧化氢酶-2的等位基因不是共显性的，其基因型 a为完全显性。国家标准GB/T 14927.1—2008规定小鼠遗传生化标记位点是14个，除过氧化氢酶-2以外，其它13个位点的等位基因都是共显性的。严格地说，过氧化氢酶-2作为遗传生化标记位点是不合适的。该位点的表现型只能看到纯合的b型和a型，而无法见到杂合型，因为完全显性的a型将b型掩盖了。因此在检测小鼠的过程中，可能会出现将杂合型误判为纯合 a型的可能［5-7］。

［1］孙靖 .实验动物学基础［M］.北京：北京科学技术出版社，2005.

［2］中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测法》（GB/T 14927.1—2008）［E］.2008.

［3］Margaret C. Green. Genetic Variants and Strains of the Laboratory Mouse［M］.New York：International Committee on Standardized Genetic Nomenclature formice，1981.

［4］Tatsuji N，Kozaburo E，Takeshi T.ICLAS Manual for Genetic Monitoring of Inbred Mice［M］.Tokyo：University of Tokyo Press，1984.

［5］Milan F，Jan S，Jirina H.Gene polymorphisms of superoxide dismutases and catalase in diabetes mellitus［J］.BMC Med Genet.2008，9：30.

［6］Xia Y，Won S，Du X.Bulk Segregation Mapping of Mutations in Closely Related Strains of Mice［J］.Genetics.2010.

［7］Ahn J，Nowell S，McCann SE.Associations between catalase phenotype and genotype：modification by epidemiologic factors［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2006，15（6）：1217 -22.