亲和吸附离心管法检测甲胎蛋白异质体用于诊断肝癌的研究

邢怀广 李捷 韩善乐

亲和吸附离心管法检测甲胎蛋白异质体用于诊断肝癌的研究

邢怀广 李捷 韩善乐

目的采用亲和吸附离心管法检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)，分析甲胎蛋白异质体AFPL3在诊断肝癌的临床应用价值。方法选择121例甲胎蛋白AFP阳性患者血清(≥10ng/ml)。使用亲和吸附离心管方法检测血清甲胎蛋白异质体AFP-L3，并且对研究对象进行跟踪，分析甲胎蛋白异质体用于临床在鉴别肝癌的作用。结果以甲胎蛋白异质体AFP-L3≥10%作为诊断指标，肝癌患者血清中甲胎蛋白异质体AFP-L3异常升高者明显高于其他肝病患者(P＜0.01);对58例临床确诊为肝癌的患者甲胎蛋白异质体AFP-L3的诊断灵敏度是79.31%;在63例临床诊断为其他肝脏疾病的患者甲胎蛋白异质体AFP-L3的诊断特异性达到92.06%，甲胎蛋白异质体AFP-L3的符合率85.95%。结论应用亲和吸附离心管法检测甲胎蛋白异质体AFP-L3在肝癌与良性肝脏病变鉴别诊断中具有重要临床价值。

甲胎蛋白异质体;肝癌;离心法

肝癌是世界上最常见的10种恶性肿瘤之一，全世界每年约有25万人肝癌［1］;肝癌发病之初较为隐匿，临床难以检出，临床诊断是一般多为晚期，治疗效果差，因此早期发现肝癌并且及时治疗可以提高患者的5年存活率。近年随着影像学的发展，一部分体积小的肝癌患者得以及时发现，患者5年存活率有了一定的提高。但是影像学技术检测用于诊断肝癌仍然受到很多的限制，使很多患者未能及时得到准确诊断，失去了最佳的治疗时机。甲胎蛋白(AFP)定量检测是目前早期发现肝癌的主要血清学标志物，但是其他一些疾病也可能引起甲胎蛋白的升高，特别是属于肝癌高危监测人群的慢性肝炎、肝硬化患者［1，2］。因此寻找肝癌早期诊断高灵敏度、高特异性的鉴别指标具有重要的临床意义。

近年研究发现，良性肝病时肝细胞坏死后再生性AFP与恶性肝癌细胞产生的AFP在糖链结构上有差异［3］，而且不同糖链的AFP与凝集素的亲和性不同，因此根据与凝集素亲和性不同，可对AFP的来源进行判断。其中AFP-L3即甲胎蛋白异质体为肝癌细胞所特有。国内外研究表明，AFP-L3是肝癌高度特异性指标，比单纯检查总甲胎蛋白能显著提高准确率，可以不受甲胎蛋白≥400ng标准的限制。但是长期以来AFP-L3指标无法在临床做为常规指标使用，原因是AFP-L3与甲胎蛋白的差异只存在于糖链上，之前报道的检测方法为凝集素亲和电泳方法，方法复杂，不宜做为肝癌鉴别的常规检测方法。因此很有必要研究新的方法检测AFP-L3［4，5］。

本研究采用亲和吸附离心管方法检测患者血清中的甲胎蛋白异质体，并且对患者进行跟踪，探讨甲胎蛋白异质体检测用于鉴别肝癌的临床意义，

1 资料与方法

1.1 一般资料选取我院2009年9月至2010年8月的均为甲胎蛋白阳性(AFP≥10ng/ml)的住院患者121例，男89例，女32例，年龄25～67岁，平均51.7岁。其中，肝癌患者58例，肝硬化患者32例，慢性活动性肝炎患者31例。诊断标准为2000年中华医学会转染病与寄生虫学分会、肝病学分会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎诊断标准［6］及卫生部医政司组织并由全国肿瘤防治办公室与中国抗癌协会合编的《新编常见恶性肿瘤诊治规范》中有关原发性肝癌的诊断标准。所有标本温育分离血清后立即检测。

1.2 试剂和方法甲胎蛋白异质体检测采用亲和吸附离心管法，试剂由北京热景生物技术有限公司提供，甲胎蛋白检测采用化学发光法，仪器为美国贝克曼化学发光免疫分析仪DXI 800型。

1.3 统计学方法应用SPSS 13.0软件进行统计分析，不同组别间AFP-L3的比较采用单因素方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 甲胎蛋白(AFP)在肝癌与非肝癌患者中的分布121份血清标本中，58份来自临床诊断为肝癌的患者，另外63份来自非肝癌患者，临床诊断为肝硬化或慢性肝炎患者。根据甲胎蛋白AFP的含量将研究对象分为3组:≥400 ng/ml组、200～400 ng/ml组以及≤200 ng/ml。在58份肝癌标本中有32份AFP≥400ng/ml，占55.17%;＜400 ng/ml的有27份，占44.83%。此外，在63份非肝癌标本中，有9份标本AFP≥400 ng/ml，占14.29%，AFP＜400 ng/ml的有54份，占85.71%，详见表1。

表1 肝癌、肝硬化及慢性肝炎标本AFP水平(ng/ml)

2.2 AFP-L3在良恶性肝脏疾病中的分布以AFP-L3(%)≥10%作为临界指标，肝癌及慢性肝炎、肝硬化标本AFP-L3 %测定结果见表2。58份肝癌标本中有56份测定结果为阳性，达79.31%。63份非肝癌中5份阳性。而肝癌标本的AFP-L3(%)分布明显不同于慢性肝炎、肝硬化标本，前者集中于AFP-L3(%)≥10，后者集中于10以下，两者相比，差异有统计学意义(P＜0.001)，见图1。

表1 肝癌、肝硬化及慢性肝炎患者AFP-L3%水平

图1 AFP-L3%在肝癌与非肝癌中的分布

2.3 AFP与AFP-L3在肝癌诊断中的作用比较当AFP设定为≥400 ng/ml时，32例肝癌在此范围，其敏感性仅为55.17%(32/58)，其特异性为85.71%(54/63)，符合率71.66%［(32+54)/121］;对于甲胎蛋白异质体AFP-L3%≥10%，其敏感性为79.31%(46/58)，特异性为92.06%(58/ 63)符合率85.95%［(46+58)/121］。

以上数据显示，检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)的肝癌诊断符合率比单独检测甲胎蛋白明显提高，结果见表3。

表3 AFP与AFP-L3%在肝癌诊断中的作用比较(例，%)

3 讨论

甲胎蛋白AFP是肝癌重要的血清学指标。由于AFP也在肝细胞癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、胆道肿瘤和睾丸肿瘤等的血清中出现，而15%～58%的慢性乙肝患者和11-47%的肝硬化患者血清中的AFP会有所升高。因此在高危人群中，AFP作为肝癌诊断指标尚缺乏特异性［6］。

肝癌的早期诊断是基于对长期患有慢性肝脏疾病的高危人群的跟踪筛查，目前临床常通过腹部超声和血清AFP的检测来对肝癌进行早期筛查。有研究显示，血清AFP对肝癌的阳性预测值是32%，腹部超声的阳性预测值是54%。可以看出目前临床所用方法对肝癌的预测率不足。

而甲胎蛋白异质体(AFP-L3)对于肝癌的预测已经是公认非常有效的一个指标，研究报道敏感性可以达到94%。AFP-L3的检测能够在慢性乙肝患者和肝硬化等高危人群中发现直径＜2 cm的肝癌。一项跟踪研究显示，AFP-L3比影像学可以提前9～12个月发现肝癌的存在。

在本项研究中，收集的标本都为临床检测为AFP阳性患者，由于临床慢性肝炎的AFP分布多为低浓度值，所以我们选择了AFP含量在1000ng/ml以下标本，其中肝癌患者58例，肝炎、肝硬化患者63例。当以AFP-L3%≥10为阳性判断指标，肝癌患者的诊断灵敏度为率达79.31%，对包括肝炎及肝硬化等在内的非肝癌标本的特异性达到92.06%，符合率85.95%，检测甲胎蛋白异质体AFP-L3的符合率比单独检测甲胎蛋白AFP明显提高。AFP-L3在肝癌与非肝癌组之间分布有显著性差异。说明以AFP-L3≥10%为鉴别诊断指标时，肝癌和良性肝病可以得到明显区分。我们的研究结果与国内的某研究结果一致［7］。

目前AFP-L3检测常用的方法有植物凝集素免疫交叉电泳技术，该方法技术要求高、操作繁琐、试剂昂贵，限制了AFP-L3检测在临床的应用。美国FDA于2005年批准检测该指标应用于肝癌诊断，并把甲胎蛋白AFP-L3诊断肝癌的阳性界定值为10%。如果患者血清中总AFP只有轻微的升高而AFP-L3所占的比例超过10%，这就提示肝癌发生的可能性很大［8］。

本研究采用亲和吸附甲胎蛋白异质体AFP-L3，原理为采用亲和离心柱技术分离出甲胎蛋白异质体，然后再定量测定样本中甲胎蛋白和甲胎蛋白异质体的含量，两者相比较即可得到患者血清中甲胎蛋白异质体的比例，用于诊断肝癌，临床应用很方便。

本研究中，尚有12例肝癌患者血清AFP-L3%＜10%，占肝癌人数的20.68%，这与日本学者报道一致，提示对肝癌的诊断尚应结合其他血清学指标或影像学资料［1］。国外研究认为甲胎蛋白AFP-L3没有异常升高的肿瘤患者其肿瘤倍增时间短，预后较好。

总之，对肝癌的准确诊断是提高患者生存率和生活质量的重要前提。研究利用亲和离心柱法检测AFP-L3，操作简便，节约成本，用于肝癌诊断有较好的敏感性和特异性，如与AFP联合使用，做为肝癌筛查的联合试验指标，应有很高的临床应用价值。

［1］殷正丰.甲胎蛋白异质体作为肝癌标志物的临床应用.实用肿瘤杂志，2004，19(1):1-4．

［2］沈铮，沈霞.甲胎蛋白及其异质体检测的临床应用价值.上海医学检验杂志，2000，15(6):361-366．

［3］Li D，Mallory T.AFP-L3:a new generation of tumor marker for hepatocellular carcinoma.Clin Chim Acta，2001，313(1):15-19．

［4］青柳璺.肿瘤标志物的临床诊断意义及展望—甲胎蛋白(AFP)L3组分.日本医学介绍，2005，26:49-50．

［5］Hu KQ，Kyulo NL.Clinical significance of elevated alpha-fetoprotein(AFP)in patients with chronic hepatitis C，but not hepatocellular carcinoma.Am J Gastroenterol，2004，99(5):860-865．

［6］游绍莉，辛绍杰．229例甲胎蛋白明显升高肝病患者的临床分析．实用预防医学，2006，13(6):1613-1614．

［7］徐爱芳．新微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体对肝癌诊断的研究．中华实验和临床病毒学杂志，2007，21(1):67-69．

［8］Shiraki K，Takase K，Tameda Y，et al.A clinical study of lectinreactive alpha-fetoproteinas an early indicator of hepatocellular carcinoma in the.follow-up of cirrhotic patients.Hepatology，1995，22:802-807．

The studies of alpha-fetoprotein isoforms using with centrifugal column method in diagnosis of hepatocel-luar carcinoma

XING Huai-guang，LI Jie，Han shan-le．Department of Radioimmunoussay，LiaochengPeople's Hospital，Liaocheng 252000，China

ObjectiveTo explore the clinical significance of alpha-fetoprotein-L3(AFP-L3)with centrifugal column method in the diagnosis of hepatocelluar carcinoma.MethodsThe serum samples of 121 patients with elevated AFP level(≥10ng/ml)were detected by chemiluminescence immunoassay for AFP and centrifugal column method for AFP-L3，and the clinical value of AFP-L3 were studied in the differentiation diagnosis of hepatocelluar cancer.ResultsThe level of AFP-L3(%)in serum of patients with hepatocellular carcinoma was significantly higher than those in the patients with other liver diseases(P＜0.05).Taking AFP-L3 (%)≥10ng/ml as the diagnositic criteria，the sensitivity of AFP-L3 was 79.31%in 58 hepatocellular carcinoma patients and the specificity of AFP-L3 was 92.06%in 63 other liver diseases patients.The diagnostic accuracy was 85.95%.ConclusionDetection of AFP-L3 seemed be of clinical value in diagnosis and differential diagnosis of hepatocellular carcinoma．

Alpha-fetoprotein isoforms;Hepatocelluar carcinoma;Centrifugation

252004聊城市人民医院放免室(邢怀广)，内科(李捷);莘县人民医院内科(韩善乐)

邢怀广afriend001@163.com