薄层色谱法鉴别活血通脉片研究

徐晓弘，熊 鑫

（大庆油田总医院药学部，黑龙江大庆 163001）

薄层色谱法鉴别活血通脉片研究

徐晓弘，熊 鑫

（大庆油田总医院药学部，黑龙江大庆 163001）

目的：建立活血通脉片的薄层鉴别方法。方法：运用TLC法对该制剂中的三七、赤芍、红花、川芎四味药材进行鉴别研究，其中均以各自的阴性对照品和相应有效成分进行对照试验。结果：经多次试验斑点清晰，重现性好，阴性无干扰。结论：表明该方法操作简单、稳定、专属性和重现性强，可作为该制剂质量控制的定性依据,也为今后标准的修订提供了依据。

活血通脉片；薄层鉴别；对照

活血通脉片处方来源于多年临床应用的验方，在中医理论指导下，以活血化瘀，通经活络为组方原则[1]，以三七、赤芍、红花等中药组成处方，主要用于冠状动脉硬化引起的心绞痛，胸闷气促，心气不足，瘀血作痛。活血通脉片以三七药效为主治疗心脏疾病的新制剂,其有效成分具有增加冠脉血流量、扩张血管、降低心肌耗氧量等作用[2]、保护脑组织等多方面的药理活性[3]，同时为广大心脏病患者带来了福音[4]。本文根据所查文献，结合复方中主药的特点，对川芎、红花、赤芍进行薄层色谱定性鉴别。以便对活血通脉片的质量更好的控制。

1 试剂与药品

三七、红花、川芎、赤芍药材（长春宏检药材公司）；人参皂苷Rb1、Rg1、三七皂苷R1对照品、木犀草素对照品（中国药品生物制品检定所）；95%乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、磷酸、甲醇、盐酸、氯仿、硫酸、正己烷（北京化工厂）；羧甲基纤维素钠（天津市光复精细化工研究所）；乙醚（天津天泰精细化学品有限公司）；以上所用液体试剂除色谱乙腈、甲醇外均为分析纯，固体试剂为化学纯。

2 方法与结果

2.1 性状

本品为黄褐色的片或糖衣片，气香，味微苦。

2.2 薄层鉴别

按《中国药典》2005年版一部项下的鉴别方法及结合文献对三七、川芎、红花、赤芍进行薄层鉴别，从而进行定性分析。

2.2.1 三七的薄层鉴别 取本品1.0 g，加甲醇溶液25 ml，超声处理（100 W，40 kHz）30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次（15、10、10 ml），合并正丁醇液，用氨试液提取3次，每次15 ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15 ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每毫升各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶23∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的三个斑点。

2.2.2 红花的薄层鉴别 红花具有活血通经、祛瘀止痛的功效，有抗凝血、抗血栓的作用[5]，研究结果也表明红花具抑制炎症反应的作用。取本样品1.5 g，取25 ml 80%丙酮，超声提取20 min，滤过，滤液浓缩至10 ml，作为供试品溶液。另取红花对照药材细粉，放入80%丙酮振摇提取15 min，作为对照药材溶液。另按处方比例和制法，制得不含红花的样品作为阴性对照液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取对照药材溶液2 μl、三批供试品溶液、阴性对照液各5 μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶2∶0.4）为展开剂，展开，晾干。层析结果，日光下检识，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，见图2。

2.2.3 赤芍的薄层鉴别[6]赤芍是中国传统的重要天然药物之一，用于清热凉血、散瘀止痛[6]、镇静，经常用于妇科疾病。从赤芍中分离得到的赤芍精在体内有抗高脂肪和高胆固醇引起的血小板聚集作用和血栓形成作用[7]，赤芍总苷可以显著改善机体微循环状态，降低血浆黏度。取本品粉末1.5 g，加乙醇10 ml，振摇5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取赤芍对照药材细粉，同法制成对照药材溶液。另按处方比例和制法，制得不含赤芍的溶液作为赤芍阴性对照液。取芍药苷对照品，加乙醇制成每毫升含2 mg的溶液，作对照品溶液。照薄层色谱法 （《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取三批供试品溶液、药材对照品、阴性对照品各4 μl，芍药苷对照品5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸 （40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干。喷5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，重现性好，见图3。

2.2.4 川芎的薄层鉴别 取本品粉末5 g，加乙酸乙酯50 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸至约5 ml，通过中性氧化铝柱（100～200目，6 g，内径为1 cm，105℃活化1 h，干法装柱）上，用乙酸乙酯50 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶液1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.5 g，加乙酸乙酯10 ml，超声处理15 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）[8]，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，晾干。置紫外灯下（365 nm）检识，供试品色谱中在与对照药材相应位置上呈相同颜色斑点。

3 讨论

活血通络片是以三七、赤芍、红花、降香、郁金、川芎、陈皮、木香、石菖蒲、枸杞子、黄精等十七味药材组成，具有活血通脉，强心镇痛的功效，用于冠状动脉硬化引起的心绞痛，胸闷气促，心气不足，瘀血作痛。本文运用TLC法对该制剂中的三七、赤芍、红花、川芎四味药材进行了鉴别研究，其中均以各自的阴性对照品和相应有效成分进行对照试验，经多次试验斑点清晰，重现性好，阴性无干扰，结果表明该方法操作简单、稳定、专属性和重现性强，可作为该制剂质量控制的定性依据，也为今后标准的修订提供了依据。

[1]付长庚.试论血瘀在中风发病中的作用[J].山东中医药大学学报，2006,30 (1):32-33.

[2]周绚,傅超美,易秋艳,等.三七药材、三七总皂苷及三七缓释片的指纹图谱[J].华西药学杂志,2009,24(1):77-79.

[3]李毛全,夏伦祝,章俊如,等.超临界CO2萃取三七中挥发油及皂苷的工艺研究[J].安徽医药,2009,13(3):261-273.

[4]江苏新医学院.中药大辞典[M].上册.上海:上海人民出版社,1977:1300.

[5]徐如英,童树洪.红花的化学成分及药理作用研究进展[J].综述报告, 2010,19(20):86-87.

[6]孙荣斌,程宝荣,武露凌.赤芍中脂溶性成分GC/MS联用分析[J].长春中医药大学学报,2010,26(2):283-284.

[7]孙英连.赤芍总苷对大鼠急性心肌缺血的影响[J].中草药,2009,12(40): 1961-1962.

[8]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005:103,109.

Study on deterination of Promoting coronary circulation Tablets by TLC

XU Xiaohong,XIONG Xin
(School of Pharmacy,General Hospital of Daqing Oil,Heilongjiang Province,Daqing 163001,China)

Objective:To establish a thin layer distinction method of identification of Promoting coronary circulation Tablets.Methods:The TLC was adopted for carring out research of pseudo-ginseng,radix paeoniae rubra,safflower and ligusticum wallichii,in contrast to the negative and effective ingredient in contrast to the corresponding.Results:The experiment was shown that it had a clear and well spot and no interference of negative.Conclusion:It is indicated that the method is simple,stability,and in the exclusive property and can be used for qualitative control of the quality and standards for the amendment provides a basist.

Promoting coronary circulation Tablets;Thin layer distinction;Comparison

R927.2

A

1673-7210（2011）02（b）-038-03

2010-12-15）