高效液相色谱法测定骨刺消片中薯蓣皂苷含量

袁春筱，陈志新

(1.重庆医科大学附属第二医院，重庆 400010; 2.中国人民解放军第6905工厂职工医院，重庆 400712)

高效液相色谱法测定骨刺消片中薯蓣皂苷含量

袁春筱1，陈志新2

(1.重庆医科大学附属第二医院，重庆 400010; 2.中国人民解放军第6905工厂职工医院，重庆 400712)

目的测定骨刺消片中薯蓣皂苷的的含量。方法采用高效液相色谱(HPLC)法。色谱柱为Symmetry C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈－水(26∶74)为流动相，检测波长为203 nm。结果薯蓣皂苷进样量在0.56～5.60 μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9);平均回收率为98.24%，RSD为0.88%(n=6)。结论HPLC法快速、准确，可用于该制剂的质量控制。

薯蓣皂苷;骨刺消片;高效液相色谱法

骨刺消片由穿山龙、淫羊藿、川牛膝、熟地黄、枸杞子组方，具补肾、健骨、活血、止痛功效，用于治疗骨质增生、骨刺疼痛等症。穿山龙为方中君药，主要成分为薯蓣皂苷，有祛风除湿、舒筋通络、活血止痛作用。采用高效液相色谱(HPLC)法测定穿山龙中薯蓣皂苷含量，目前尚未见文献报道。笔者对此进行了研究，旨在为本制剂的质量控制提供理论依据。

1 仪器与试药

Waters 2695/2996型高效液相色谱仪。薯蓣皂苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111701－200501);水为去离子水，乙腈为色谱纯;其余试剂均为分析纯;骨刺消片(市售，批号分别为100504，100510，100601)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Symmetry C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －水(26 ∶74);流速:1.0 mL/min;检测波长:203 nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。理论板数按薯蓣皂苷峰计算应不低于3 000。

2.2 溶液制备

精密称取薯蓣皂苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.28 mg的溶液，作为对照品溶液。取本品10片，研细，取约0.5 g，精密称定，加入甲醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 mL 使溶解，过 D101型大孔树脂柱(3 g，Φ0.9 cm)，用水 60 mL 洗脱，弃去水洗液，再用80%乙醇35 mL洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例及制备工艺制备不含穿山龙的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备缺穿山龙阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察: 精密吸取对照品溶液 2，4，8，16，20 μL，注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标、进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=261 285X－106 127，r=0.999 9(n=5)。结果表明，薯蓣皂苷进样量在0.56～5.60 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

方法专属性试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱图相应位置上有相同色谱峰，阴性对照品溶液在此保留时间处无相应吸收峰，表明阴性样品无干扰，选择性好(见图1)。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定薯蓣皂苷峰面积值。结果的RSD为0.75%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密称取样品1份，照拟订的供试品溶液制备方法和测定条件，分别于0，2，4，8，14 h时进样。结果薯蓣皂苷峰面积的RSD为0.92%(n=5)，表明供试品溶液在14 h内稳定。

重复性试验:精密称取同一批样品6份，依法制备供试品溶液并测定薯蓣皂苷含量。结果平均含量为 0.21 mg/片，RSD为1.01%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的同批样品6份，分别精密加入薯蓣皂苷对照品，照供试品溶液制备方法，按确定的色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 薯蓣皂苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

分别精密称取样品1份，依法制备供试品溶液，并测定含量。结果批号为100504，100510，100601的样品中薯蓣皂苷含量分别为 2.12，2.23，2.29 mg/片。

3 讨论

拟订的含量测定方法简便、准确，重现性良好，为该制剂的质量控制和检测方法提供了理论依据。

曾对样品提取、纯化方法进行了比较[1－2]，由于供试品中穿山龙药材部分为原生药粉末，故采用甲醇超声提取;并对样品采用D101型树脂、AB－8型树脂、D201型树脂进行纯化对比试验，结果D101型树脂的纯化效果明显，吸附率和解吸率优于其他类型树脂，能够纯化供试品溶液。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:250.

[2]熊 山，陈玉武，叶祖光.楮实子中总皂苷含量测定[J].中国现代中药，2009(7):26.

Determination of Dioscin in Gucixiao Tablets by HPLC

Yuan Chunxiao1，Chen Zhixin2(1.Second Affiliated Hospital，Chongqing Medical University，Chongqing，China400010;2.Staff Hospital，6905 Factory of PLA，Chongqing，China400712)

ObjectiveTo determine the contents of dioscin in Gucixiao Tablets.Methods The HPLC method was adopted and the C18column(200 mm ×4.6 mm，5 μm)was used.The mobile phase was acetonitrile － water(26 ∶74).The detection wavelength was at 203 nm.Results The calibration curve of dioscin was linear in the range of 0.56 － 5.60 μg(r=0.999 9).The average recovery rate was 98.24% ，RSDwas 0.88% (n=6).Conclusion HPLC is quick and accurate，which can be used for the quality control of Gucixiao Tablets.

dioscin;Gucixiao Tablets;HPLC

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2011)02－0034－02

2010－10－20)