紫外分光光度法测定毛茛中总皂苷的含量

秦汝兰，孟庆双

(通化师范学院 制药与食品科学系，吉林 通化134002)

毛茛(RanunculusjaponicusThunb.)是毛茛科(Ranunculaceae)毛茛属(Ranunculus)多年生草本植物，在长白山地区广泛分布，具有消炎、镇痛、抗菌等多种活性.在民间广泛用于治疗黄疸、结核、肝炎等病[1].近年来，对毛茛化学成分的研究显示，其全草含有内酯类、黄酮类、皂苷类及生物碱类等化合物[2].目前已从毛茛属植物中得到的皂苷其苷元均为齐墩果酸型三萜皂苷，有研究显示，毛茛总皂苷具有显著的抗心肌肥大作用[3].但有关毛茛总皂苷含量测定方面的研究未见报道，因此本试验以齐墩果酸为对照品，通过紫外分光光度法测定毛茛总皂苷的含量，以期为合理开发利用长白山区药用植物毛茛提供参考性依据.

1 材料与方法

1.1 试验材料、仪器与试剂

毛茛采于通化师范学院后山，经通化师范学院于俊林教授鉴定；齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所批号：110709-200505)；UV-1700紫外分光光度计(苏州市莱顿科学仪器有限公司)；AB256-S/10万电子天平(赛多利斯丹佛TP系列分析天平)；正丁醇、甲醇等试剂均为国产分析纯.

1.2 试验方法

1.2.1 对照品溶液的制备

准确称取105℃干燥至恒重的齐墩果酸标准品0.0060g，置于25ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，配制成0.00024g·ml-1的对照品溶液.

1.2.2 供试品溶液制备[4]

准确称取毛茛粉末约3g，置125ml圆底烧瓶中，加入95%乙醇20ml，连续回流提取3h，过滤，滤液浓缩，用95%乙醇定容至50ml容量瓶中，摇匀.精密量取20ml置蒸发皿中挥散溶剂，残渣加10ml蒸馏水溶解，用水饱和的正丁醇振摇萃取三次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干.残渣加少量甲醇溶解并转移至50ml容量瓶中定容，摇匀.再精密吸取1ml溶液至100ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，作为供试品溶液.

1.2.3 检测波长的选择

将对照品溶液在200～600nm进行扫描，在205nm处有最大吸收波长，故选择205nm为检测波长.

1.2.4 标准曲线的绘制

精密吸取对照品溶液0.05、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分别置于5ml容量瓶中，甲醇定容，配置成不同浓度的标准品溶液，从中各吸取4ml置于比色皿中，在205nm波长处测定吸光度值.

2 结果与分析

2.1 标准曲线的线性范围

根据标准曲线，计算得到回归方程Y=78.673X-0.0458，r=0.9997，表明齐墩果酸对照品在0.0024-0.0480g·ml-1范围内呈良好的线性关系.

2.2 精密度试验

精密吸取对照品溶液4ml于比色皿中，测定吸光度值，连续5次，结果RSD为0.077%，表明仪器精密度良好.

2.3 稳定性试验

称取毛茛粉末约3g，按“1.2.1”项下方法制备毛茛总皂苷提取液，分别在0，1，3，5，7h测定吸光度，结果RSD为0.103%，表明供试品溶液在7h内有良好的稳定性.

2.4 重复性试验

称取毛茛粉末约3g，6份，按“1.2.1”项下方法制备毛茛总皂苷提取液，分别取4ml于比色皿中，测定吸光度值结果RSD为1.31%，表明本方法重现性良好.

表1 回收率试验(n=6)

2.5 加样回收率试验

精密称取已知含量的毛茛粉末0.5g，6份，分别准确加入一定量的齐墩果酸对照品，得出平均回收率为99.10%，RSD为0.98%，表明测定方法稳定可靠，结果见表1.

2.6 样品含量测定

准确量取“1.2.2”项下供试品溶液4ml置比色皿中，平行三次，测定其吸光度值，根据回归方程，计算得到毛茛总皂苷含量为4%.

3 讨论

本试验曾选用了超声提取法、回流提取法、浸渍法等提取手段提取毛茛总皂苷，但得率均较低，分析原因可能是药材在溶剂中时间较短，不足以使总皂苷完全溶出，因此本试验提取方法最终定为连续回流提取法，得到的毛茛总皂苷含量较高为4%，本方法结果准确、重现性好、得率高，可作为毛茛总皂苷含量的测定方法.

长白山区野生毛茛资源极为丰富，因此，本试验为今后毛茛药材抗癌等新的药理作用的开发以及资源的充分利用提供了有利依据.

参考文献：

[1]江苏新医学院.最新中药大辞典(一册)[M].北京：中国中医药出版社，2005：437-438.

[2]郑威，周长新，张水利,等.毛茛化学成分的研究[J].中国中药杂志，2006，31(11)：892-894.

[3]王榕乐.毛茛化学成分及毛茛总苷的药理学研究[D].广州：广东药学院，2007.

[4]万德光，裴瑾，唐远.分光光度法测定威灵仙中总皂苷的含量[J].成都中医药大学学报，2007，30(3)：52-53.