柴桂安神胶囊质量标准研究＊

王 芳，吴 昱，刘玉林△， 刘子冬

(1.第四军医大学基础部药品研发中心，西安 710032;2.第四军医大学唐都医院胸外科，西安 710038)

柴桂安神胶囊是由柴胡、桂枝、川芎等12味中药组成，有疏肝解郁、益气健脾等作用，用于治疗神经官能症所引起的失眠、健忘、偏头痛、心悸、胸闷、焦虑等以及因神经紧张而引起的胃肠功能紊乱，如腹泻、恶心、腹胀等。为确保柴桂安神胶囊的质量，本文对桂枝、川芎、白术进行了薄层鉴别，同时用HPLC法测定了阿魏酸的含量，建立了可靠、准确的质量控制方法。

1 仪器及试药

日本岛津L20AB高效液相色谱仪，SPD-20A紫外检测器，SK5200LH超声仪，METTLER分析电子天平，硅胶G(青岛海洋化工厂)。

桂枝对照药材由中国药品生物制品检定所提供(批号121191-200402);川芎对照药材由中国药品生物制品检定所提供(批号120918-200809);白术对照药材由中国药品生物制品检定所提供(批号120925-200708);阿魏酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号110773-200611);甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂为分析纯。柴桂安神胶囊由第四军医大学西京医院药品制剂科提供(批号060305、070520、080329)。

2 定性鉴别

2.1 泽泻、白术的显微实验鉴别

取本品粉末2g轻轻研细，置显微镜下观察，可见木栓细胞黄棕色，类圆形或多角形，壁薄，草酸钙结晶多见，可检出淀粉粒(泽泻)，草酸钙针晶细小，薄壁细胞含有菊糖，表面显放射状纹理，导管短小，为网纹及具缘纹孔(白术)，符合药典[1]。

2.2 桂枝薄层鉴别

取本品粉末10g加乙醇30ml密塞，时时振摇，放置30min滤过，滤液浓缩至 1ml，作为供试品溶液。取缺桂枝药材的空白粉末10g，同法制成空白药材对照溶液。另取桂枝对照药材1g同法制成对照药材溶液。按照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以石油醚(60℃ ～90℃)-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开、取出并晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照样品无此斑点(图1)。

2.3 川芎薄层鉴别

取本品粉末10g加乙醚50ml，超声处理30min滤过、蒸干，用乙酸乙酯2ml溶解作为供试品溶液。取缺川芎药材的空白粉末10g，同法制成空白药材对照溶液。另取川芎对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。按照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂展开并取出、晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照样品无此斑点(见图2)。

2.4 白术薄层鉴别

取本品粉末 10g加正己烷 30ml，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。取缺白术药材的空白粉末10g，同法制成空白药材对照溶液。另取白术对照药材0.5g，同法制成0.5ml对照药材溶液。按照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取对照溶液10ul，供试品溶液和空白药材溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯=5∶1溶液为展开剂，板子在展开槽中饱和20min，展开、取出并晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，加热显色。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照样品无此斑点(见图3)。

图1 桂枝的薄层色谱图

图2 川芎的薄层色谱图

图3 白术的薄层色谱图

3 含量测定

3.1 色谱条件

采用色谱柱为 Agilent ZE-C18柱(4.6 mm×250 mm)。流动相∶甲醇-3%醋酸溶液(32∶68)，流速:1.0mL/min，检测波长为323nm，柱温:室温。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度摇匀;精密量取3ml，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，即得(每 1ml含阿魏酸 12μg)。

3.3 供试品溶液的制备

取本品20粒，研匀，精密称取1g左右，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，密塞、摇匀并称定重量，超声处理30min放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀、静置，取上清液用微孔滤膜(0.45um)滤过，取续滤液，即得。

3.4 阴性对照溶液的制备

取除川芎外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备不含川芎的阴性样品。按3.3项下的制备方法制成阴性对照溶液。

3.5 干扰试验

在上述色谱条件下，分别取阿魏酸对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液各10ul，注入色谱仪。样品色谱图中，在与阿魏酸对照品色谱相应的位置上，有一相同保留时间的色谱峰。而阴性对照品溶液在此保留时间处无干扰(见图4～图6)。

图4 阿魏酸对照品溶液HPLC色谱图1为阿魏酸

图5 供试品溶液HPLC色谱图 1、阿魏酸

图6 阴性对照溶液HPLC色谱图

3.6 线性关系考察

精密吸取对照品溶液 2、5、10、15、20、25、30、40、50ul分别进样，以峰面积为纵坐标，阿魏酸浓度(μg·ml－1)为横坐标进行线性回归。得回归方程:y=44262x－35145，r=0.998，阿魏酸在 0.03μg～0.5μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

3.7 精密度试验

精密吸取上述浓度的对照品溶液10uL，连续进样5次，以阿魏酸的峰面积积分值计算，RSD为0.97%。

3.8 重复性试验

取同一批号(080329)样品5份，每份约1.0g，按照供试品制备方法项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，阿魏酸平均含量为0.0152mg/粒，RSD 为 0.94%

3.9 稳定性试验

取同一批号(070520)样品供试液，分别于2、4、6、8、12h 进样，阿魏酸平均含量为 0.0150mg/粒，RSD为0.95%。

3.10 回收率试验

表1显示，采用加样回收法，取已知阿魏酸含量样品约0.5g(20070520)6份，分别加入一定量的阿魏酸对照品，按“3.3”方法制备供试品溶液，分别进样测定。

表1 加样回收率测定结果(n=6)

3.11 样品测定

表2显示，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入高效液相色谱中测定。

表2 3批样品测定结果(n=3)

4 讨论

4.1 提取方法

本文在鉴别川芎项中，供试品提取分别应用加热回流法和超声提取法。经多次试验证明，2种方法均有很好的效果，可以有效、完全地提取出有效成分。但其超声提取方法简便，易于操作，所以本方法选用了超声提取方法。

4.2 提取成分

川芎含有生物碱(如川芎嗪)、酚性成分(阿魏酸)、挥发油以及内酯素、维生素 A、叶酸、甾醇、蔗糖、脂肪油等，其中阿魏酸为川芎中的主要成分，本文分别用乙醇、甲醇[2]、70% 甲醇超声[3]、酸水提乙醚萃取[4]、80%甲醇作为提取溶液。结果表明，80%甲醇提取效果好，杂质少，方法简便。

4.3 实验研究

本文分别采用流动相甲醇-0.1%磷酸溶液(25∶75)、甲醇-0.1%磷酸溶液(30∶60)、甲醇-3%醋酸溶液(32∶68)、乙腈-0.085% 磷酸溶液(17∶83)进行实验。通过实验发现，流动相中有醋酸可以抑制阿魏酸的分解[5、6]，用甲醇-3% 醋酸溶液(32∶68)可达到分离的最好效果。

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社，2005:68，168.

[2]丁 丽，刘宗武.反相高效液相色谱法测定不同溶媒川芎提取物中阿魏酸的含量[J].时珍国医国药，2007，18(7):1690-1691.

[3]张玉爱，吴泽榕，郑起平，等.HPLC测定养血当归软胶囊中阿魏酸的含量[J].中成药，2006，28(4):599.

[4]张 健，金 墚，杨传敏，等.HPLC测小儿运脾合剂中川芎酸的含量[J].中国药房，2005，16(24):1895.

[5]冯毅凡，等.高效液相色谱法测定参茸白风丸中阿魏酸的含量[J].广东药学院学报，1996，12(1):19.

[6]张 洪，等.反相高教液相色谱法测定归芪口服液中阿魏酸的含量[J].药物分析杂志，1996，15(1):17.