β－catenin和E－cadherin在子宫内膜癌中的表达和意义

任世文，李洪安，李霞，王芳，陈胜民，赵瑾，蒋金芳，潘晓琳，李锋

（石河子大学医学院／新疆地方与民族高发病教育部重点实验室，石河子832002）

子宫内膜癌（endometrial carcinoma，EC）是发生在子宫内膜的一组上皮恶性肿瘤，是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一，近年来其发病率呈上升及年轻化趋势，Ahmedin Jemal等［1］经统计发现在2009年美国女性子宫内体新增肿瘤42160例，死亡7780例，在妇女生殖道恶性肿瘤中发病率是最高的。

许多研究表明β－catenin和E－cadherin表达的改变与肿瘤的发生发展和转移密切相关。β－catenin是一种多功能的胞内蛋白，具有信号传导和细胞间粘附连接的双重功能；E－cadherin属于钙依赖的同种亲和性粘附分子，具有促进上皮细胞间粘附，维持组织结构和功能完整性的作用，E－cadherin粘附功能的维持与β－catenin密切相关［2］。

本研究采用免疫组化SP法检测β－catenin和E－cadherin在子宫内膜癌中的表达及其与子宫内膜癌的组织学分级、组织学类型和肌层浸润的关系，旨在探讨其与子宫内膜癌的发生、发展和转移的关系。

1 资料与方法

1．1 研究对象

收集石河子大学附属医院2000年1月～2010年8月临床资料完整的子宫内膜癌手术切除的石蜡标本69例；子宫内膜癌的组织分类及分级采用WHO（2003）标准，所有HE切片经两位资深病理医师复诊：其中子宫内膜样腺癌58例，浆液性癌11例；高分化癌19例、中分化癌25例、低分化癌25例；无或小于l／2肌层浸润者50例，大于或等于1／2肌层浸润者19例。

所有患者均未接受化学药物、放射治疗及性激素治疗，并选择同期因良性病变切除的正常子宫内膜组织10例作为良性对照。

所有标本均用40%甲醛固定，石蜡包埋，所有内膜组织均经病理学检查证实。

1．2 研究方法

采用免疫组化SP三步法，β－catenin和 E－cadherin鼠抗人抗体均购自北京中杉金桥生物公司。

SP三步法免疫组化检测试剂购自北京中杉金桥生物公司。严格按照试剂盒说明书进行操作，具体如下：石蜡切片厚4μm，60℃烤片2h；二甲苯脱蜡，梯度至水，放入到3%的过氧化氢（H2O2）甲醇液中10 min，以阻断内源性过氧化物酶；抗原热修复；PBS液冲洗5min×3次，滴加一抗（即用性β－catenin，E－cadherin鼠抗人单抗，抗体工作液配置浓度均为1∶100）；4℃冰箱过夜；37℃恒温箱孵育30min，PBS液冲洗5min×3次，滴加二抗；37℃恒温箱孵育30min，PBS液×3次，滴加三抗；37℃恒温箱孵育30min，PBS液冲洗5min×3次；用新鲜配置的DAB显色，自来水冲洗、复染、脱水、透明、封片。

1．3 结果判定标准

β－Catenin以细胞质或细胞膜棕黄色为阳性，ECadherin以细胞膜或细胞质棕黄色为阳性，观察至少10个具代表性的高倍视野，选取染色部位较为集中的区域进行细胞计数和结果判定，记分采用3个参数的半定量分析：即阳性细胞数、染色强度、及两者记分的乘积。平均每高倍视野阳性染色细胞数：＜5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100%，分别计为0分、1分、2分、3分、4分；染色强度：无着色为0分、浅棕黄色1分、棕黄色2分、棕褐色3分；两者记分乘积，根据两项记分乘积将1－4分记为阴性（－），5分及5分以上记为阳性（＋）。

1．4 统计学方法

所有数据分析采用统计软件SPSS16．0处理系统，采用卡方检验（χ2）、Fisher确切概率法分析不同子宫内膜组织间的差异及子宫内膜癌组织中βcatenin，E－cadherin的表达和临床病理特征之间的关系；采用Spearman相关性检验分析子宫内膜癌组织中这两个指标表达的相关性。以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 β－catenin和E－Cadherin在子宫内膜癌中的表达

以细胞膜或细胞质棕黄色为阳性表达，见图1～4。

图1 β－catenin在子宫内膜癌中阳性表达（×200）Fig．1β－catenin was positive expression in endometrial carcinoma（×200）

图2 β－catenin在子宫内膜癌中阴性表达（×200）Fig．2β－catenin was negative expression in endometrial carcinoma（×200）

图3 E－cadherin在子宫内膜癌中阳性表达（×200）Fig．3E－cadherin was positive exression in endometrial carcinoma（×200）

图4 E－cadherin在子宫内膜癌中阴性表达 （×200）Fig．4E－cadherin was negative expression in endometrial carcinoma（×200）

2．2 β－catenin在正常子宫内膜组织表达

表达结果见表1。

表1 正常子宫内膜、子宫内膜癌中β－catenin，E－cadherin表达比较Tab．1Comparision of expression ofβ－catenin and E－cadherin in normal Endometria tissue and endometrial carcinoma tissue

子宫内膜癌组织中阳性表达率分别为80%，46%，表达差异具有统计学意义（P＜0．05），E－cadherin在正常子宫内膜组织，子宫内膜癌组织中阳性表达率分别为90%，33%，表达差异具有显著统计学意义（P＜0．005），见表1。

2．3 β－catenin、E－cadherin的表达与子宫内膜癌临床病理学关系

β－catenin的表达与子宫内膜癌的组织学类型、肌层浸润无关（P＞0．05），与组织学分级呈负相关（P＜0．05）；E－cadherin的表达与子宫内膜癌的组织学类型无关（P＞0．05），与组织学分级，肌层浸润呈负相关（P＜0．05），见表2。

表2 β－catenin，E－cadherin的表达与子宫内膜癌临床病理学的关系Tab．2The relationship of expression and clinical pathological characteristics betweenβ－catenin and E－cadherin in endometrial carcinoma

2．4 在子宫内膜癌组织中β－catenin，E－cadherin的相关性

表3 子宫内膜癌中β－catenin，E－cadherin表达的关系Tab．3The relationship of expression betweenβ－catenin and E－cadherin in endometrial carcinoma

在子宫内膜癌组织中β－catenin和E－cadherin成正相关（RS＝0．196，P＜0．05），见表3。

3 讨论

β－catenin是一条由多肽链组成的蛋白质，其编码基因称为CTNNB1，定位于染色体上3p21、3p22［3］。β－catenin具有双重功能：一是作为重要的粘附分子与E－cadherin相互作用形成E－cadherin／catenin复合体，维持上皮细胞极性和完整性［4］；二是Wnt信号传导通路中的关键调控点，并是Wnt信号通路的正向调节因素，介导Wnt信号从膜至胞浆进核的传递［5］。吴时敏等［6］研究发现β－catenin在子宫内膜癌中的阳性表达率明显高于正常子宫内膜组织（P＜0．05），阳性表达定位于细胞质∕细胞核；本研究结果显示β－catenin在子宫内膜癌中阳性表达率明显低于正常子宫组织（P＜0．05），阳性表达定位于细胞膜∕细胞质，表明β－catenin的阳性表达异常和子宫内膜癌的发生具有密切的关系，另外本研究发现β－catenin的阳性表达与子宫内膜癌组织学分级呈负相关（P＜0．05），提示β－catenin表达降低可能在子宫内膜的发生、发展过程中起着一定的作用。

E－cadherin是一种分子量为120kD的钙依赖性跨膜蛋白，通过 E－cadherin，α－、β－、γ－catenin复合体介导同种亲和性细胞相互连接，形成E－cadherin／catenin复合体，维持细胞结构和功能的完整性。E－cadherin表达下调时，β－catenin便从 E－cadherin／catenin复合体中解离，导致胞浆内游离β－catenin量增加，从而异常激活wnt信号通路，使细胞发生异常增殖分化，并且使肿瘤细胞脱离原发灶，获得侵袭性生长的特性，因此E－cadherin又可以看做是一种抑癌基因。相关研究显示［7］，如果肿瘤细胞分化良好，保留上皮形态，那么E－cadherin就基本表达正常，而在低分化或未分化的肿瘤细胞中，E－cadherin就表达较低或不表达。本研究结果显示在子宫内膜癌中，E－cadherin与正常子宫内膜组织相比表达明显下降，差异具有显著统计学意义（P＜0．005）；并且随着组织学分级的降低，肌层浸润深度的增加，E－cadherin表达率逐渐下降，差异具有统计学意义（P＜0．05），这一点与文献报道基本相符［8－9］。表明 E－cadherin表 达 的 降 低 导 致 其 介 导 的粘附功能下降，而肿瘤细胞趋于离散，从原发部位脱落，侵犯到邻近的部位，进而出现远处转移，因此我们认为E－cadherin表达的降低与子宫内膜癌的发生及恶化有着及密切的关系。

β－catenin和 E－cadherin通过形成 E－cadherin／catenin复合体来维持细胞结构和功能的完整性，Gonzalez MA 等［10］报道，20%的乳腺 癌 E－cadherin表达降低，22%乳腺癌β－catenin表达降低，两者间具有正相关性（P＜0．05），本研究发现在子宫内膜癌中β－catenin和E－cadherin成正相关（P＜0．05），提示了在子宫内膜癌发生发展过程中由于E－cadherin表达降低导致β－catenin从E－cadherin／catenin复合体中游离出，在胞浆中异常激活wnt通路从而进入到细胞核，导致转移与恶化。因而联合检测βcatenin和E－cadherin的表达情况，可作为子宫内膜癌早期诊断及作为预测子宫内膜癌转移的生物学标志，对预后评估亦有着重要意义。

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