比色法测定饮料中柚皮苷含量的研究

陆雪梅

（安徽省宣城市产品质量监督检验所，宣城 242000）

比色法测定饮料中柚皮苷含量的研究

陆雪梅*

（安徽省宣城市产品质量监督检验所，宣城 242000）

介绍了利用比色法测定橙汁饮料中柚皮苷的方法。柚皮苷与一缩二乙二醇反应显色，在420 nm波长下测定其吸光度，建立柚皮苷含量与吸光度的线性方程为D（λ） =3.473 2 ρ+0.008 9，线性范围为0 g/L～0.24 g/L，r=0.998 9，平均回收率为97.49%，相对标准偏差为2.85%。该方法具有简便、快速、准确的特点，适用于含有此类物质饮料的检测。

比色法；柚皮苷；饮料

柚子是芸香科植物柚的成熟果实，是我国东南沿海地区出产的主要水果之一，栽培面积及产量均居世界首位。柚子含有各类维生素及生物活性物质，是制作各种饮料的优良原料。柚子中含有丰富的生物类黄酮，柚皮苷是其主要成份，占其总黄酮质量的80%。柚皮苷具有多种生理功能，具有抗氧化、抗菌、消炎以及抗病毒等作用。但是另一方面，柚皮苷又是许多饮料中苦味物质的主要来源，含量超过50 mg/L时就会产生苦感。因此，在此类饮料的生产加工的过程中，建立对柚皮苷的快速、简便、准确的测定方法是必要的。目前，对于柚皮苷的检测主要有高效液相法和分光光度法。高效液相法存在试剂用量大、过程复杂、检测时间长以及成本较高等缺点；分光光度法测定的是总黄酮的含量，与实际结果有一定的误差。比色法测定通过柚皮苷与特定的显色剂发生反应，能够较为准确和快速地测定出样品中柚皮苷的含量。本试验研究了利用比色法测定饮料中的柚皮苷的含量，为此类产品的监控提供了一个较为实用的方法。

1 材料与方法

1.1 实验材料

含柚汁饮料，购自宣城市苏果超市；柚皮苷标准品，购自Sigma公司，纯度≥98 g/100g；其他试剂购自国药集团上海化学试剂公司，均为分析纯。

1.2 仪器设备

723型可见光分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；TDL-40B台式离心机，上海安亭科学仪器厂；EL-20实验室pH计，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；BS224S电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司。

1.3 溶液的制备

1.3.1 对照品溶液的制备

精密称取经过干燥后至恒重的柚皮苷对照品1 g于1000 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制得质量浓度为1 g/L的对照品溶液，使用时按比例稀释到所需的质量浓度。

1.3.2 供试品溶液的制备

将市面上购得的含柚汁饮料经过滤纸过滤后置于500 mL容量瓶中即为供试品。

1.3.3 样品的测定

取供试品溶液1.0 mL，注入10 mL的具塞比色管中，每个比色管中再加入体积浓度90%的一缩二乙二醇5 mL、4 mol/L的NaOH溶液0.1 mL、蒸馏水3.9 mL后混匀，于40℃水浴加热10 min显色后于420 nm处测吸光度值。

2 结果与讨论

2.1 最大吸收波长的确定

取对照品、供试品溶液各1.0 mL，分别注入10 mL的具塞比色管中，每个比色管中再加入体积浓度90%的一缩二乙二醇5 mL、4 mol/L的NaOH溶液0.1 mL、蒸馏水3.9 mL后混匀，于40℃水浴加热10 min显色后，利用分光光度计进行全波长扫描，结果表明，两者在420 nm处有最大吸收。

2.2 显色条件的优化

在样品溶液加热显色的过程中，有许多因素对吸光度值都有影响。本试验主要考察了显色温度、显色时间以及加碱量对于测定的影响。

2.2.1 显色温度的影响

以1.0 mL的标准液为试样，分别在30℃、35℃、40℃、45℃的条件下显色，结果见图1。结果表明随着温度的升高，显色达到平衡所需要的时间就相对越短，综合考虑以40℃为最佳显色温度。

图1 温度对显色时间的影响

2.2.2 显色时间的影响

以1.0 mL的标准液为试样，在40℃条件下分别显色 4 min、6 min、8 min、10 min、12 min、14 min，结果如图2所示，可见在10 min时就已经达到最大吸光度值，因此显色时间定为10 min。

图2 显色时间对显色效果的影响

2.2.3 加碱量的影响

用比色法测定柚皮苷的含量，是基于柚皮苷在碱性条件下与一缩二乙二醇反应呈黄色为基础的，所以加碱量对反应有重要的影响。以1.0 mL的标准液为试样，添加了不同量的4 mol/L的NaOH溶液，考察其对吸光度值的影响，试验结果如图3所示，可见碱的添加量在0.1 mL比较合适。

图3 加碱量对显色效果的影响

2.3 线性关系

准确称取一定质量的柚皮苷标准品，分别配制成 0.04 g/L、0.08 g/L、0.12 g/L、0.16 g/L、0.20 g/L、0.24 g/L的柚皮苷标准溶液，用移液管取以上不同质量浓度的柚皮苷标准液各1.0 mL分别注入10 mL的具塞比色管中，每个比色管中再加入体积浓度90%的一缩二乙二醇5 mL、4 mol/L的NaOH溶液0.1 mL、蒸馏水3.9 mL后混匀，于40℃水浴加热10 min，在420 nm下测吸光度，以1.0 mL蒸馏水做同样处理作空白对照，以吸光度值对标样的含量作图，其标准曲线方程为D（λ）=3.473 2 ρ+0.008 9线性范围为0 g/L～0.24 g/L，r=0.998 9，线性关系良好，结果如图1所示。

图4 柚皮苷标准曲线方程

2.4 稳定性试验

以0.16 g/L的标准溶液按照1.3.3所述的方法，分别于0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h进行显色反应测定吸光度值，其吸光度值分别为0.567、0.566、 0.552、 0.549、 0.540、 0.538、 0.536， 其RSD为2.33%，表明供测试的样品在6 h内基本保持稳定。

2.5 重复性试验

以0.08 g/L的标准溶液按上述1.3.3的方法重复显色反应5次，测吸光度值分别为0.304、0.311、0.308、0.315、0.302，计算RSD为1.70%，可见该方法的重复性较好。

2.6 回收率试验

准确量取已测柚皮苷含量的柚汁饮料100 mL，加入一定质量的柚皮苷标准品，混合均匀后，取1.0 mL，按照1.3.3项进行测定，计算加样回收率，结果平均回收率为97.49%，RSD为2.85%。结果见表1。

表1 加标回收率实验结果（n=5）

2.7 样品的检测

选取5个批号的样品，按照1.3.2项的方法制备，并且按照1.3.3项操作测定这5份样品中中柚皮苷的含量，样品中柚皮苷的含量结果见表2，饮品中的柚皮苷的含量平均为1.406 mg/L，低于人的苦感值50 mg/L。在不影响口感得前提下，果汁饮料中含有适量的柚皮苷有利于提高产品的生理保健功能。

表2 样品中柚皮苷的含量

3 结论

柚皮苷作为黄酮类化合物具有重要的生理活性，通过控制其在饮料中的含量可以提升产品的内在品质。利用比色法测定饮料中的柚皮苷的含量，具有快速、简便的特点，为此类产品的监控提供了一个较为实用的方法。

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Determination of contents of naringin in beverage by colorimetry

LUXUE-Mei*
（Anhui province XuanChengproducts qualitysupervision and inspection institute，XuanCheng242000，China）

The paper established a method to determination of naringin in beverages by colorimetry.The naringain produced colour with diethylene glycerol that was quantitated in the 420 nm wavelength.The calibration curve was D（λ）=3.473 2 ρ+0.008 9 in the range from 0 g/L to 10.24 g/L （r=0.9989）for naringin.The average recovery was 97.49%with RSD of 2.85%.The method is simple，rapid，and accurate.It is suitable for determination of contents of naringin in beverage.

colorimetry；naringin；beverage

TS272.7

A

1673-6004（2011）02-0044-03

* 陆雪梅，女，1972年出生，1990年毕业于中国科学技术大学分析化学专业，工程师。

2011-04-11