两面针总碱对溃疡性结肠炎大鼠抗炎作用的实验研究

徐 露 黄 彦 董 志 易 东

1 重庆医科大学(重庆 400016）

2 重庆市中医院(重庆 400021）

3 第三军医大学（重庆 400038）

溃疡性结肠炎 (UC）是以直肠、结肠黏膜及黏膜下层的炎症和溃疡形成为病理特点的慢性非特异性肠道疾病，其发机理尚不完全清楚。两面针系芸香科花椒属植物，具有驱风湿、消肿止痛之功效，主要用于治疗风湿关节痛、跌打扭伤肿痛、神经痛、牙痛等。两面针生物碱为其主要有效成分。本研究旨在观察两面针对UC大鼠活动指数(DAI）、血清肿瘤坏死因子α(TNF－α）、白细胞介素8(IL－8）、超氧化物歧化酶 (SOD）及丙二醛(MDA）的影响，以确定其对UC的治疗作用，为开发经济有效的治疗UC药物提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 清洁级SD大鼠50只，由重庆医科大学实验动物中心提供，雄性，体质量150～200g。随机分为5组，每组10只。两面针购自安徽致和堂药业有限公司（批号：20080508，纯度＞85%）；2，4－二硝基氯苯（DNCB）购自美国Sigma公司；柳氮磺胺吡啶(SASP）购自上海三维制药有限公司（批号：20080703）；血清TNF－α、IL－8检测试剂盒购自河南华美公司；SOD、MDA检测试剂盒购自南京建成公司。

1.2 方法 （1）模型制备：模型对照组、SASP组和TAZ高、低剂量组大鼠采用DNCB和乙酸联合建模法复制UC模型。大鼠颈背部用100mg/L Na2S脱毛后,以20g/L的DNCB丙酮液0.25mL(5滴）滴背，每日1次，连续14d，在第15日以直径3mm导尿管经肛门插入结肠腔8cm处，注入0.1%DNCB乙醇液0.25mL，第16日在同一部位注入8%乙酸溶液2mL，准确计时10s后，再用5mL生理盐水冲洗。继续饲养2周，造模动物出现粪便稀溏和黏液脓血便等UC常见症状。（2）给药方法：正常对照组与模型对照组大鼠给予生理盐水1mL/200g，SASP组灌胃SASP 100mg/200g,两面针高剂量组灌胃两面针200mg/200g，两面针低剂量组灌胃两面针100mg/200g，每日灌胃1次，连续14d。每日观察各组大鼠腹泻、便血、体重改变等情况，评价疾病活动指数。14d后，各组大鼠断头取血，分离血清，检测血清TNF－ α、IL －8、SOD 及 MDA 水平。（3）疾病活动指数(DAI）评价及血清各指标检测：采用DAI评价UC。血清TNF－α、IL－8水平测定采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定；SOD活性、MDA含量用比色法测定；均严格按照试剂盒规定方法测定。

1.3 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件。计量资料以（）表示，采用 t检验。

2 结果

2.1 各组DAI评分、血清TNF－α及IL－8水平比较 见表1。模型对照组DAI分值、血清TNF－α及IL－8水平较正常对照组明显增高（P ＜0.01）；两面针两治疗组DAI、血清TNF－α、IL－8较模型组对照明显降低（P＜0.05）；两面针低剂量组与SASP组各数值差异无统计学意义（P＞0.05）；两面针高剂量组各指标较SASP组明显降低（P ＜0.05）。

表1 各组大鼠DAI、血清TNF－α及IL－8水平比较 (）

表1 各组大鼠DAI、血清TNF－α及IL－8水平比较 (）

与正常对照组比较，*P＜0.01；与模型对照组比较，▲P＜0.01；与两面针低剂量组比较，△P＜0.05。下同

组 别正常对照组模型对照组SASP组两面针高剂量组两面针低剂量组DAI评分(分）0.62±0.43 8.11±1.74*3.87±1.38 2.76±0.91▲△3.65±1.22▲TNF－α（ng/L）6.86±1.51 38.79±8.10*24.55±6.36 16.76±4.25▲△22.48±5.72**IL－8（ng/L）2.48±0.79 26.43±6.57*14.26±3.85 10.27±3.06▲△14.53±3.98▲

2.2 各组大鼠血清SOD活力及MDA含量水平比较 见表2。模型对照组SOD活力较正常对照组明显降低，MDA含量较正常对照组明显增高，差异都具有统计学意义（P＜0.01）；两面针两治疗组SOD活力较模型对照组增高，MDA含量较模型对照组降低，差异均具有统计学意义（P＜0.01）；两面针低剂量组与SASP组的SOD活力、MDA含量水平差异无统计学意义（P＞0.05）；两面针高剂量组SOD值显著高于SASP组；MDA水平低于SASP组，差异均具有统计学意义（P ＜0.05）。

3 讨论

UC的病因及发病机制尚未完全明了，目前大多学者认为UC的发生是免疫、遗传、环境及肠道细菌等多种因素共同作用的结果，其中免疫因素是最重要的因素之一。细胞因子在调节肠道免疫中扮演重要角色。TNF－α和IL－8是具有多种生物学活性的细胞因子，也是重要的炎症因子，可参与许多变态反应性疾病和自身免疫性疾病的发生。研究表明，IL－8是一种较强的白细胞趋化因子。多种炎症介质如TNF－α、IL－l等均能诱导单核细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞分泌IL－8。UC患者的外周血中TNF－α和IL－8水平均显著增高。因此，IL－8可进一步通过对中性粒细胞的趋化作用，导致肠组织内各种炎症细胞浸润；而TNF－α可加重并促进肠黏膜组织炎性损伤。本研究表明，两面针能够明显降低UC大鼠血清TNF－α和IL－8水平，从而减轻炎症反应，可能是其治疗UC的主要机制之一。

表2 各组大鼠血清SOD活力及MDA含量水平比较 (）

表2 各组大鼠血清SOD活力及MDA含量水平比较 (）

与SASP组比较，▲P＜0.05

组 别正常对照组模型对照组SASP组两面针高剂量组两面针低剂量组SOD（NU/mL）12.84±2.26 5.55±1.13*10.16±1.69 11.52±1.80**▲9.89±1.54**MDA(μm/mL）26.92±5.18 60.34±11.86*36.21±6.47 28.65±5.65**▲35.93±6.42**

目前已有大量文献报道氧自由基损伤是UC发病过程的一个重要因素，可提高机体抗自由基损伤的能力,同时降低MDA含量,对UC有明显的治疗作用。本实验表明，两面针能显著提高UC大鼠SOD活力，降低MDA含量，说明两面针有良好的抗氧自由基损伤作用，这也可能是其治疗UC的主要机制之一。综上所述，两面针有良好的抗UC作用，这可能与其降低TNF－α、IL－8及MDA水平，提高SOD活力有关。

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