秦优11号制种去杂保纯及纯度鉴定技术

宋贤勇，王 文，孙统庆

（江苏中江种业股份有限公司，江苏南京 210036）

秦优11号属半冬性甘蓝型三系杂交油菜品种，由咸阳市农业科学院和三原县种子公司育成，不育系2168A为细胞质雄性不育系，商品油菜籽含油量44.6%～45.3%，芥酸含量0.0%～0.1%，硫苷含量25.68～25.73μmol/g，为高含油率的“双低”杂交油菜。2008年通过陕西省、江苏省和国家农作物品种审定委员会审定，适宜在长江中下游地区和江苏全省种植。但是，由于自身特性和许多不良因素的影响，对该品种纯度产生一定的影响，因而制种过程中去杂保纯以及种子成熟收获后纯度鉴定工作尤为重要，并且必须建立严格的质量跟踪档案。现将秦优11号去杂保纯和纯度鉴定技术措施介绍如下。

1 秦优11号制种去杂保纯技术

1.1 严把亲本种子纯度关

秦优11号亲本种子不育系为2168A，恢复系为5012C，由陕西省咸阳市农业科学研究所和三原县种子公司提供，实行了严格的植物检疫，2008年和2009年正季纯度鉴定都在99%以上。

1.2 确保基地隔离安全

秦优11号制种基地位于陕西省三原县，四季分明，土层深厚，土壤肥沃，灌溉条件好，同时拥有天然的隔离屏障，是杂交油菜理想制种基地。为杜绝周边其他十字花科作物（白菜、自生油菜等）的影响，要在秦优11号亲本抽薹前连根带蔸彻底清除。

1.3 加强生育期去杂除劣工作

秦优11号每年制种面积均达1 000亩，涉及农户多，去杂除劣工作贯穿于生育期的整个过程，公司专门安排技术员进行指导监督。苗期和蕾薹期根据亲本生长形态特征拔除母本行中的白菜型株，多头株，叶色差异明显株，长相高大、株形松散、花蕾饱满的植株，父本行中的变异株。在初花前5～7天，主花序花蕾明显时进行打顶保纯工作，避免微量花粉对纯度的影响。2008年和2009年制种基地都遭遇了“初春低温”，造成不育系转育严重，对花蕾饱满、肥大的植株采取重打顶甚至二次打顶措施。花期着重去除母本行里的保持系株、微量花粉、优势株及其他杂株，拔除父本行里的异品株和变异株。成熟期全面清理前期遗留的各种杂株、异常萝卜角果株及开反花的种间杂株。

1.4 抓好收获管理工作

收获时避免机械混杂，父本终花后及时砍去，清理出田，并检查一二次。2008年正是由于宣传不够，管理不严，监督不力，出现了少量恢复系混入杂交种的现象。当母本田块有80%左右的角果黄熟时进行收获，各田块单独堆放，分场脱粒，避免机械混杂。

2 秦优11号纯度鉴定技术

2.1 青海鉴定

5月10日左右，在制种基地按片区差异，采用5点取样法选定取样田块，每块田取5点，每点取5株，随机分上中下部位采取黄熟角果，晒干，脱粒，混合均匀，在青海省农业科学院试验地进行种植鉴定。抢早播种，确保通过春化。每个样品播1 000粒左右，不间苗，少施或不施基肥，不追氮肥，促使早开花，植株瘦弱有利于鉴定。在蕾期和花期根据秦优11号品种特征特性进行纯度鉴定。

2.2 正季鉴定

正季鉴定在我公司六合基地于当年9月份到来年4月进行，每个样品播1 000粒左右，不间苗，少施或不施基肥，不追氮肥。对入库样品同时进行直播和移栽鉴定，同时不育系和恢复系各播一小区用于对比，在苗期至盛花期根据杂交种的特征和育性表现进行纯度鉴定。

2.3 SSR鉴定

本公司利用SSR分子标记技术对秦优11号的双亲及F1进行了引物筛选和纯度检测技术的研究，筛选出引物BN12和BN1表现为稳定的共显性 （见图1），经过两年与田间种植鉴定结果的对比，误差均在容许误差范围内，这表明筛选的SSR标记完全可以用于秦优11号杂交种纯度的快速、准确鉴定。

图1 引物BN12(A)和BN1(B)的筛选结果

2.4 三种鉴定方法比较分析

以本公司正季纯度鉴定结果为标准参考值，分析发现青海鉴定结果及200株幼苗SSR分析结果与标准参考值之间的差值均在允许误差范围内 （见表1）。青海鉴定周期长，费用高，样品质量不能代表最终收购样品质量；正季鉴定结果准确，但结果滞后于销售；而SSR技术稳定可靠，对DNA质量要求不高，时间短效率高，最大优点在于可以将恢复系鉴定开来，避免了产量上的损失，具有很大的应用潜力。

表1 秦优11号纯度青海、江苏与SSR鉴定结果比较

秦优11号纯度的保证以田间控制为重中之重，严把亲本关，安全隔离，严格去杂除劣，避免机械混杂，后期借助于异地鉴定、正季鉴定及SSR鉴定技术，做到心中有数，将优质种子投放到市场中去，增强企业的社会责任心。