不同贮藏年限哈蟆油的电泳比较

艾秋霞,肖井雷,姜大成

（长春中医药大学,吉林 长春 130117）

不同贮藏年限哈蟆油的电泳比较

艾秋霞,肖井雷,姜大成*

（长春中医药大学,吉林 长春 130117）

哈蟆油;贮藏;年限;蛋白质;电泳

哈蟆油是一种名贵的动物药,为东北地区特产的一种营养价值极高的滋补性中药。哈蟆油在贮藏过程中,常常颜色变深变暗,出现类似“走油”的现象,这些现象不仅使哈蟆油的品质降低,还直接影响其经济效益。哈蟆油中含有大量蛋白质、氨基酸等,这些成分的变化是否会引起其品质发生变化,故本实验采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法考察了不同贮藏年限哈蟆油的蛋白质情况。

1 实验材料

1.1 仪器 双稳定时电泳仪DYY-8C[5-600 V,2-200 mA,120 W],北京六一仪器厂;小型双垂直电泳槽DYCZ-24D,北京六一仪器厂;脱色摇床（水平）WD-9405B型,北京六一仪器厂。所用试剂均为分析纯。

1.2 实验材料 本实验所用样品购于吉林省舒兰市新安乡梨花林场二人班蛙场,经长春中医药大学姜大成教授鉴定为蛙科动物中国林蛙（Rana temporaria chensinensis David）雌体的输卵管干制品,1～5号分别代表不同贮藏年限（2002,2003,2006,2007,2008年）哈蟆油样品。

2 实验方法

2.1 样品制备[1-2]称取等量中哈蟆油（样品1～5）,分别加入等量稀释4倍的浓缩胶缓冲液研磨,离心30 min（4 000 r/min）,取上清液置冰箱中备用。

2.2 电泳操作 试剂和凝胶的配制参照文献法进行[3],样品上清液加入等体积的40%蔗糖液混匀,用微量注射器进样,在电极缓冲液中加入溴酚蓝指示剂示踪。电泳开始时,电压控制在80 V,样品进入分离胶后加大到150V,整个电泳过程维持电压强度不变。待示踪指示剂距离前沿约1 cm时,停止电泳。取出板胶,先在水中漂洗,然后放入0.1%的考马斯亮蓝R250染色液中,在常温下摇床染色10 h,再用含40%甲醇和10%冰醋酸的脱色液脱色,反复更换脱色液,直至背景无色为止。

2.3 电泳图谱测绘 按泳动率将电泳图谱分为A（泳动率 ≤0.3）、B（泳动率 0.3～ 0.75）、C（泳动率≥0.75）3个区,按公式（泳动率=蛋白质泳动距离/指示剂泳动距离）计算各样品谱带的泳动率。根据样品谱带的泳动率、形态、着色度绘制电泳图谱,以涂黑、斜纹、空白3种符号分别代表一级、二级、三级蛋白谱带,见图1。

图1 5种样品的电泳鉴别图谱（由左至右为1～5号样品）

3 结果与讨论

由谱图1得知,不同贮藏年限哈蟆油的蛋白质电泳谱带情况基本相同,均为一级带2条（A区2条）、二级带3条（B区1条,C区2条）、三级带1条（B区1条）,说明不同贮藏年限的哈蟆油的蛋白质相对稳定。只是2002年在C区位置出现的2条为三级带,这可能是由于贮藏时间过长导致蛋白质变化所致,具体原因需做蛋白质含量分析才能得出结果。

:

[1]姜大成,肖井雷.中国林蛙与哈蟆油[M].长春:吉林科学技术出版社,2006:269-311.

[2]曾明,石振武.凝胶电泳鉴别哈士蟆油与蟾蜍输卵管[J].中药材,1991,14（4）:25.

[3]张贵君,李晓波,李仁伟,等.常用中药生物鉴定[M].北京:化学工业出版社,2006:188-190.

R284.11

A

1007-4813（2010）01-0133-01

艾秋霞（1975-）,女,硕士研究生。研究方向:生药学。

姜大成,男,教授,硕士研究生导师。Tel:13944103315

（

2009-05-25）