UPLC法测定洋铁酸模中大黄素和大黄酚

蔡广知,王莎莎,孙全乐,沈晓君,郭云龙,贡济宇

（长春中医药大学药学院,吉林长春 130117）

UPLC法测定洋铁酸模中大黄素和大黄酚

蔡广知,王莎莎,孙全乐,沈晓君,郭云龙,贡济宇*

（长春中医药大学药学院,吉林长春 130117）

目的 建立洋铁酸模中大黄素和大黄酚的定量分析方法。方法采用超高效液相色谱法（UPLC法）。结果大黄素和大黄酚的质量浓度与峰面积间呈良好的线性关系。平均回收率大黄素为98.7%,RSD为1.38%;大黄酚为100.4%,RSD为0.98%（n=6）。结论本方法简便、快速,重现性和精密度均较好,优于常规液相色谱（HPLC）,可用于洋铁酸模中大黄素和大黄酚的含量测定。

UPLC法;洋铁酸模;大黄素;大黄酚

洋铁酸模（Rumex patientiaL.var.callosus F.Schm.et Maxim）为蓼科酸模属植物巴天酸模[1]（Rumex patientia L.）的变种,又名洋铁叶,产于我国北方。对该植物的研究,报道很少。但其同属其它植物有研究报道,如:南方所产羊蹄[2-3]（Rumex japonieus）、北方所产巴天酸模（R.patientia）、毛脉酸模（R.gmelini）和新疆产皱叶酸模（R.crispus）。酸模属植物的根中含有大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等蒽醌类有效成分[4],具有抑菌、止血及止咳的功效。以治疗皮肤疾患和止血著称。本文采用超高效液相色谱法测定了洋铁酸模中大黄素和大黄酚的含量。

1 仪器与试药

Waters Acquity超高效液相色谱、紫外检测器和Empower工作站软件。大黄素、大黄酚对照品购于中国药品生物制品检定所:批号分别为110756-200110和110796-200110。洋铁酸模药材样品采于吉林省内各地,经长春中医药大学张亚芝教授鉴定。乙腈为色谱纯,水为重蒸水,其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:ACQUITY UPLC TM BEH C18（1.7μ m,2.1 mm ×50mm）,流动相:乙腈-0.1%磷酸（60∶40）;流速:0.25mL/min;柱温:30℃;检测波长:254 nm 。

2.2 对照品混合溶液的制备 精密称取大黄素对照品适量,加甲醇溶解,制成1.00 mg/mL的大黄素对照品储备液;精密称取大黄酚对照品适量,加甲醇溶解,制成0.53 mg/mL的大黄酚对照品储备液;分别精密吸取0.3 mL的大黄素和大黄酚对照品储备液,置同一10 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,混匀,即得每毫升含大黄素30 μ g和大黄酚10.75 μ g的对照品混合溶液。

2.3 供试品溶液的制备[5-7]取洋铁酸模药材粉末0.5 g,精密称定,置50 mL容量瓶中,加乙醇40 mL,超声提取30 min,放冷,加乙醇定容至刻度,摇匀,滤过,即得。

2.4 标准曲线的制备[8-10]分别精密吸取大黄素、大黄酚对照品储备液0.18,0.27,0.36,0.45,0.54mL,置同一10 mL量瓶中,加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀,得不同浓度的大黄素和大黄酚混合对照品溶液。依次吸取上述混合对照品溶液5 μ L,注入超高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录峰面积积分值和保留时间,计算得大黄素回归方程:Y=6×106X-301 050,r=0.999 9,表明大黄素在0.09～0.27 μ g范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系;大黄酚回归方程:Y=3×107X-434 912,r=0.999 9,表明大黄酚在 0.03～0.09 μ g范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取同一供试品溶液,重复进样5次,测定大黄素、大黄酚的峰面积值,计算RSD分别为0.12%和0.11%,表明仪器的精密度良好。

2.6 重现性试验 取同一样品5份,精密称定,依样品溶液的制备方法制得供试品溶液,分别进样5 μ L,测得大黄素及大黄酚峰面积值,计算RSD分别为0.19%和0.15%,表明方法的重现性良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于0,2,4,8,12,24 h,注入液相色谱仪,测定并记录大黄素、大黄酚的峰面积值,计算 RSD分别为0.18%和0.16%,表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 加样回收率试验 取同一已知含量的样品6份,精密称定,精密加入大黄素和大黄酚对照品溶液,依2.3项下方法分别制得供试品溶液,测定大黄素和大黄酚的峰面积值,计算回收率,大黄素和大黄酚的平均回收率分别为98.7%和100.4%,计算RSD分别为1.38%和0.98%,表明方法的准确度良好。

2.9 样品测定 取各批次洋铁酸模样品,按2.3项下方法制得供试品溶液,进样量5 μ L,测定并记录大黄素、大黄酚的峰面积积分值,计算大黄素及大黄酚的含量,结果见表1,图1、图2。

图1 大黄素、大黄酚标准品液相色谱图

图2 洋铁酸模的超高效液相色谱图

表1 洋铁酸模中大黄素、大黄酚的含量

3 讨论

相对于常规高效液相色谱法（HPLC）而言,超高效液相色谱法（UPLC）[11]有高分离度、高速度、高灵敏度等优点。AQUITY UPLC系统可以实现样品的高效、快速分析。本文中样品采用UPLC法分析检测时间仅为HPLC的1/4,适当增加流速可以使检测时间缩短为HPLC的1/6。UPLC使用1.7 μ m粒径的色谱柱填料,使色谱柱的柱效极大提高,色谱峰变窄,峰容量增加。此外,UPLC进样量为5μ L时,最高峰的吸收值为0.20 AU,HPLC进样量5 μ L时,与UPLC中对应峰的吸收值为1.7 AU,检测灵敏度提高了8倍以上,UPLC的优势明显。UPLC在样品分析测定中的优越性,可以大大提高工作效率。

实验结果表明,不同地区洋铁酸模中游离大黄素和大黄酚的含量差异较大,这可能与采收时间,药材的生长环境等因素不同有关;生长在山上及河边潮湿地区的洋铁酸模药材,其游离大黄素和大黄酚的含量要高于生长在路边干燥地区的药材。洋铁酸模的茎、叶、花及果实中只含有少量的大黄素,未检测出大黄酚。本文首次采用超高效液相色谱法测定了吉林省不同产地洋铁酸模中游离型大黄素和大黄酚的含量,为充分开发利用该种药用资源提供了依据,为UPLC在中药分析中的深入应用积累了条件。

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[11]金高娃,章飞芳,薛兴亚.超高效液相色谱在复杂体系中的应用[J].世界科学技术:中医药现代化,2006（8）:106.

R285.2

A

1007-4813（2010）01-0121-02

蔡广知（1977-）,男,博士研究生。研究方向:中药鉴定和中药分析的教学、科研研究。

贡济宇,女,教授,硕士研究生导师。Tel:0431-86172207,E-mail:gjy0431@126.com

（

2009-10-20）