吗啡缓释栓的研制及其体内外释药相关性研究

夏亚子 ，刘立琼 ，丁明和 ，卢 青 ，王 玮 ，娄 杰 ，束家有

（1.武汉大学药学院，湖北武汉 430072；2.武汉市马应龙药业股份公司，湖北武汉 430000）

吗啡栓剂特别是缓控释栓剂经直肠给药[1-3]临床缓解癌症疼痛已成为一种常用的口服替代方法。一种商品名为Moraxen吗啡缓控释栓已在英国上市[4]，该制剂用高于普通栓剂3～4倍的吗啡剂量维持24 h镇痛作用。Moraxen不仅解决了许多癌症患者吞咽困难的服药问题，而且避免吗啡肝脏首过效应。参考文献[5-6]，以PEG6000和PEG400为组合基质，添加阻滞剂卡波姆，氮酮为促渗透剂制备吗啡缓控释栓；采用自行设计的体外溶出装置，以栓剂释放度和理化性质为指标进行体外溶出筛选；经大白兔直肠给药测定动物体内药物释放曲线，进行体内释药模式筛选，并用3p87程序计算药代动力学参数。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1.5 g栓模（诸暨市云路九岩山公司）；KA-10000台式离心机（上海安亭科技仪器厂）；可调微量移液器（10～100 μl，100～1000 μl，日本 NICHIRYO）；KQ-250DB 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Waters高效液相色谱系统；Waters 484紫外检测器；Waters 745B数据处理机。

1.2 试药

吗啡标准品（北京药品生物制品检定所）；吗啡原料药（马应龙制药有限公司）；冰醋酸（分析纯，北京红星化工厂）；甲醇（分析纯，天津市博迪化工有限公司）；药用PEG400、PEG6000（北京会友化工有限公司）；卡波姆940（天津市科密欧化学试剂开发中心）；庚烷磺酸钠（色谱级，上海晶纯实业有限公司）；普通栓（武汉马应龙药业集团股份有限公司，批号：060505）；氮酮（分析纯，天津市科密欧化学试剂开发中心）；二丁基羟基甲苯BHT（分析纯，北京益中伟业化工有限公司）。

2 方法与结果

2.1 栓剂的制备

按栓剂的规格（35 mg/1.5 g）进行投料，将碾碎过80目筛的PEG6000、卡波姆、BHT混匀，80℃水浴加热熔化，滴加处方量的PEG400、氮酮；加入过200目筛的吗啡细粉，搅拌约0.5 h；倒入栓模冷却，刮去多余部分，脱模即得。

2.2 体外溶出试验与体外释放度的测定

将特制的若干个6 ml带磨口塞刻度玻璃试管（L*Φ=6 cm×1 cm）分两排固定在木板孔道中，使刻度玻璃试管下部尽量伸出；在试管底部向上伸出一根细玻璃管（L*Φ=4.0 cm×0.1 cm）供取样用；在刻度试管中插入略小于试管内径的网状塑料管，构成简易的往复式溶出装置。将上述试管板装在水浴锅上，使试管底部3～4cm浸入水中。将按处方制备的吗啡缓释栓置于体外溶出仪的玻璃试管内，加入2 ml蒸馏水，（37.5±2.0）℃恒温。 分别在 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 h时从试管取出溶出液10 μl，补充同等体积介质，置于离心管中，稀释至1 ml，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，HPLC法测定含量，计算其累积释放率。为了符合漏槽条件，分别在3、6 h用30%PEG溶液置换试管中的溶出液。

2.3 体内血药浓度测定

2.3.1 体内筛选试验 将按比例缩小制备的微型缓释栓（含吗啡 18～20 mg）与普通栓（含吗啡 18～20 mg）蘸少许石蜡，分别塞入禁食 24 h的新西兰兔肛门内。 分别于 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 h 以及 24.0 h 时从两只家兔的耳缘静脉取血1 ml，置于含少量肝素钠溶液（肝素钠∶水=1∶4）离心管中。

2.3.2 血样处理 家兔耳缘静脉取血1 ml，加入1%肝素抗凝，7 000 r/min离心10 min，精密吸取血浆0.2 ml，加入0.8 ml甲醇溶液，4 000 r/min离心10 min，滤膜过滤，37℃水浴中氮气吹干，200 μl甲醇溶液重新溶解，过滤，精密吸取 20 μl进样，进行高效液相色谱测定。高效液相色谱分析参考文献[7]进行。

2.4 结果

2.4.1 体外溶出试验 水凝胶机制的缓释栓剂溶出度测定一直是个难题，各国药典未列出有实际使用价值的方法。常规溶出仪测定体系与直肠环境相差甚远，测定数据没有体内相关性。针对现存的问题，本实验室设计了简易的模拟装置，按照“2.2”方法得A、B、C三种吗啡缓释栓体外溶出度，并将累积溶出百分率与时间进行线性回归，得到累积溶出百分率（M）-时间（t）曲线，见图 1。

2.4.2 吗啡缓释栓体内筛选与药代动力学研究 使用体外溶出度递增幅度平缓的B型吗啡缓释栓，考查指标R2＞0.9，按照“2.3.1”项下方法进行大白兔体内筛选，测得其血药浓度与时间曲线，并与普通栓比较，结果见图2。B型吗啡缓释栓体内药时曲线为6次实验平均结果。

2.4.3 吗啡缓释栓药代动力学参数 将“2.4.1”所测普通栓与B型缓释栓血药浓度结果经3p87软件处理，获得药代动力学参数见表1。

表1 硫酸吗啡普通栓与缓释栓的药代动力学参数

3 讨论

3.1 体外溶出试验结果分析

由图1可知，PEG 组合基质有一定的缓释作用，但缓释时限较短，2～3 h；加入卡波姆（Cb）后不仅缓释时限延长至7～8 h，零级释放的相关系数R2值也大幅度提高。普通栓3～3.5 h溶出98.3%。A型缓释栓3 h溶出65.2%，6 h溶出99.4%，t50%=2.7 h。B型缓释栓 3 h溶出 47.3%，7 h溶出 99.5%，t50%=3.4 h。C型缓释栓3 h溶出32.5%，8 h溶出83.0%，t50%=4.6 h。试验结果显示，加卡波姆0.4 g的B型栓2 h体外释药29.0%，3 h体外释药50.0%，7 h体外释药99.0%，R2为0.994 9，达到《中国药典》规定的控释制剂标准。

3.2 体内血药浓度结果分析

由图2可知，吗啡普通栓和B型吗啡缓释栓大白兔直肠给药试验结果可见：普通栓 Cmax为（40±2） μg/ml，且迅速消除，有效血药浓度保持5h；同等剂量的吗啡缓释栓Cmax为（25±10）μg/ml，血药浓度的峰高仅为普通栓的1/2，呈现的血药平台，持续时间为普通栓的1.0～2.5倍，具有明显的缓控释特点。体外溶出度按零级释放模式统计，相关系数R2＞0.9的处方，进行体内筛选的血药浓度曲线均出现稳定的血药平台，显示良好的体内相关性。

3.3 吗啡缓释栓药代动力学参数描述

根据3p87软件处理家兔血药浓度数据，判定家兔肛门纳入硫酸吗啡缓释栓后体内处置符合二室模型。吗啡缓控释栓与普通栓在兔体内的药动学过程为二室模型。硫酸吗啡普通栓与缓释栓的体清除率（CL）分别为0.065 8和0.062 9 mg·kg·h·（μg/ml），其中缓释栓剂的值相对较小，表明硫酸吗啡缓释栓在体内实际滞留时间较长，有更长的疗效。

吗啡缓控释栓药动学参数t1/2意义不及平均滞留时间（MRT）[8]。通过比较普通栓与缓释栓的MRT可以看出，硫酸吗啡缓释栓在体内实际滞留时间延长5 h，具有明显的缓释特性。缓释栓的相对生物利用度为104.7%。对两种制剂的药代动力学参数进行双、单侧t检验，均无显著性差异（P＞0.05），但吗啡缓释栓与普通栓具有相同生物等效性。

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