桑叶提取工艺研究

许莉，孟宪军

（1.沈阳农业大学食品学院，辽宁沈阳110161；2.辽宁公安司法管理干部学院，辽宁沈阳110161）

桑叶提取工艺研究

许莉1，2，孟宪军1

（1.沈阳农业大学食品学院，辽宁沈阳110161；2.辽宁公安司法管理干部学院，辽宁沈阳110161）

采用正交试验方法对中药桑叶的提取工艺进行研究，并以出膏率及芦丁含量为考察指标，优选出最佳提取工艺，结果为：加入12倍量的水，提取3次,每次提取1 h，合并水提液，滤过，滤液减压浓缩成清膏，静置过夜。加入95%乙醇使醇浓度达到50%，温度为20℃，静置12 h后取上清液，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量，水浴上加热浓缩，减压干燥（60℃，0.03 MPa），制成干膏，粉碎，即得。

桑叶；正交试验；芦丁；提取工艺

Abstract:This article was to study the extraction process of the traditional Chinese medicine mulberry leaves by orthogonal experimental method,And in percentage of the extract and the content Rutin as the indexes,select the best technology,the result was：adding 12 times the amount of water,extracted three times,each time extracting 1 hour,combined water extract,filter,the filtrate concentrated under vacuum to clear cream,standing overnight.Then added 95%ethanol to 50%ethanol content in the mixture,the temperature was 20℃,standing for 12 hours after taking the cream,the filtrate recovered ethanol decompression and concentrated to appropriate,continue to water bath concentration,vacuum drying(60℃,0.03 MPa),made form dried extract,crush,that was.

Key words：mulberry leaves;orthogonal experiment;rutin;extraction process

桑叶，又名“铁扇子”，为《中国药典2010年版》（一部）收载品种，是桑科桑属植物桑Morus alba L.的叶，也是国家颁布的药食两用品种之一。桑叶中含有多种有效成分，主要有黄铜类、生物碱类、多糖类，以及挥发油、甾类、氨基酸、维生素和微量元素等[1]。桑叶具有很好的营养价值和药用价值。历代本草文献中，都有相关记载。桑叶可以治疗风热感冒、肺热咳嗽、目赤肿痛[2]。现代研究桑叶具有降血糖、降血压、降血脂、提高免疫力、抗氧化、抗炎、抗衰老等多种药理作用，在医药和食品中都有广泛应用[3]。桑叶中的总黄酮类化合物含量占桑叶干重的1.0%～3.0%，属于植物茎叶中黄酮类化合物含量较高，而黄酮类成分主要有芸香苷（芦丁）等，具有降血糖等作用[4]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100 Series高效液相色谱仪、Agilent色谱工作站：美国安捷伦公司；SPD-10A紫外检测器、LC-10ATVP输液泵：日本岛津公司；UV-3010型紫外可见分光光度计：日本日立公司；AR2140电子分析天平：上海奥豪斯公司；AS3120A超声波清洗器（天津）；METTLER AB135-S十万分之一电子天平：瑞士梅特勒公司。

1.2 试药

芦丁对照品（批号：0080-9504），购于中国药品生物制品检定所。本试验所用桑叶药材分别购自沈阳、浙江、重庆、山东、河南、鞍山等地，经辽宁中医药大学药学院李峰教授鉴定均为桑叶（Morus alba.L）药材。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 药材前处理

桑叶以原药材投药。

2.2 提取工艺路线的设计

水作为溶剂，价廉易得，故本工艺以水为提取溶剂，对水提取工艺进行了加水量、提取时间、提取次数的考察。为除去杂质以减少服用量以及降低成本，故本工艺在水提取工艺的基础上还采用了醇沉工艺，对醇沉工艺进行了醇沉浓度、醇沉温度、静置时间的考察。

2.3 提取工艺条件的选择

2.3.1 水提取工艺条件的选择

以水为提取溶剂，选择加水量、提取次数、提取时间定为三因素，选用正交表L9（34）进行正交试验考察，因素水平表见表1。

表1 因素水平表Table 1 Factor level table

2.3.1.1 考察指标的确定

以出膏率和芦丁含量为考察指标确定最佳水提取工艺条件。

1）出膏率的测定

称取9份桑叶药材，每份100 g，按正交方案加水提取，合并水提液，滤过，滤液减压浓缩成清膏（置250 mL量瓶中定容），静置过夜。精密吸取上清液50mL至蒸发皿中，水浴锅加热浓缩，减压干燥（60℃,0.03 MPa）制成干膏，精密称定，计算出膏率，结果见表2、3。

2）芦丁含量测定

精密吸取正交试验下桑叶水提液的上清液2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，过滤即得，采用高效液相色谱法测定溶液中芦丁的含量，结果见表2、3。

直观分析和方差分析结果表明：提取次数对结果影响显著，加水量和提取时间对结果影响均不显著，并结合实际情况，最佳水提取条件为A2B3C1，即加水12倍量，提取3次,每次提取1 h。

表2 L9（34）水提取工艺条件正交试验表Table 2L9（34）orthogonal extraction conditions of the water table

表3 方差分析表Table 3 ANOVA table

2.3.1.2 验证试验

称取3份桑叶药材，每份100 g，分别加水12倍量，提取3次，每次提取1 h，合并水提液，滤过，滤液减压浓缩成清膏（置250 mL量瓶中定容），静置过夜。测定出膏率及芦丁含量，结果见表4。

表4 验证试验结果Table 4 The verification test results

结果表明，验证试验结果达到预测结果要求。

因此确定中药桑叶的最佳水提取工艺为加水12倍量，提取3次,每次提取1 h。

2.3.2 醇沉工艺条件的选择

本试验选择醇做为溶剂，选择醇沉浓度、醇沉温度、静置时间为三因素，选用正交表L9（34）进行正交试验考察，因素水平见表5。

2.3.2.1 考察指标的确定

以出膏率和芦丁含量为考察指标确定最佳醇沉工艺条件。

1）出膏率的测定

表5 醇沉因素水平表Table 5 Alcohol precipitation factor level table

称取9份桑叶药材，每份100 g，按水提取正交方案进行提取，合并水提液，滤过，滤液减压浓缩成清膏（置250 mL量瓶中定容），静置过夜，吸取上清液100 mL，按正交表进行醇沉试验，得醇沉液，抽滤，滤液置250 mL量瓶中定容。精密吸取醇沉液50 mL置蒸发皿中，水浴锅加热浓缩，减压干燥（60℃,0.03 MPa）制成干膏，精密称定，计算出膏率，结果见表6、7。

2）芦丁含量测定

精密吸取正交实验下桑叶醇沉液的上清液2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，过滤即得，采用高效液相色谱法测定溶液中芦丁的含量，结果见表6、7。

表6 醇沉条件考察实验结果Table 6 Conditions for alcohol precipitation of investigation experiment results

表7 方差分析表Table 7 ANOVA table

直观分析和方差分析结果表明：3个考察因素对结果影响均不显著，并结合实际情况，最佳醇沉工艺条件为A1B1C1，即醇沉浓度为50%，温度为20℃，静置时间为12 h。

2.3.2.2 验证试验

称取3份桑叶药材，每份100 g，分别加水12倍量，提取3次，每次提取1 h，合并水提液，滤过，滤液减压浓缩成清膏（置250 mL量瓶中定容），静置过夜。加入95%乙醇使醇沉浓度达到50%，在20℃下，静置12 h，分别测定出膏率及芦丁含量，结果见表8。

表8 验证试验结果Table 8 The verification test results

结果表明，验证试验结果达到预测结果要求。

因此确定中药桑叶的最佳醇沉工艺为醇沉浓度50%，温度为20℃，静置时间为12 h。

2.4 10批不同商品地桑叶药材的提取

称取10批不同商品地桑叶药材各30 g，分别加水12倍量，提取3次，每次提取1 h，合并水提液，滤过（相对密度为1.1），滤液减压浓缩成清膏（置250 mL量瓶中定容），静置过夜。加入95%乙醇使醇沉浓度达到50%，在20℃下，静置12 h后取上清液，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量，水浴锅上加热浓缩，减压干燥（60℃，0.03 MPa），制成干膏，粉碎，即得。10种不同商品地桑叶药材提取物的量，见表9。

表9 10批不同商品地桑叶药材的出膏率Table 9 10 different groups of goods in percentage of the extract of Mulberry leaves

3 结论

本试验采用了水提醇沉的方法，通过对出膏率和芦丁含量的考察确定了最佳提取工艺，即加水12倍量，提取3次,每次提取1 h，合并水提液，滤过，滤液减压浓缩成清膏（置250 mL量瓶中定容），静置过夜。再加入95%乙醇使醇沉浓度达到50%，温度为20℃，静置时间12 h后取上清液，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量，水浴上加热浓缩，减压干燥（60℃，0.03 MPa），制成干膏，粉碎，即得。

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Extraction Process of Mulberry Leaves Research

XU Li1，2，MENG Xian-jun1
（1.College of Food Science，Shenyang Agricultural University，Shenyang 110161,Liaoning,China;2.Liaoning Administration College of Police and Justice，Shenyang 110161,Liaoning,China）

2010-05-20

许莉（1966—），女（汉），副高级工程师，在职硕士研究生，从事教学和中药保健食品研究与开发。

*通信作者：孟宪军（1960—），男（汉），教授，博士生导师，博士，主要从事果蔬加工方面的研究。