非小细胞肺癌患者术后血清VEGF动态变化与血小板的相关性研究

胡瑛 李宝兰 时广利 荣长利 高广阔

肿瘤的生长、侵袭和转移有赖于血管生成（angiogenesis）[1,2]。许多血管生成因子参与了肿瘤的血管生成过程[3,4]。其中，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）在肿瘤的血管生成中起重要作用[5-7]。许多研究[8-12]证实非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）患者血清VEGF水平显著升高。近年有报道[13-15]NSCLC患者手术切除原发肿瘤后其血清中VEGF显著升高。VEGF储存于血小板膜的α-质粒中[16]，在凝血过程中由于血小板活化而被释放[17]。研究[18]发现肿瘤患者血小板计数与血清VEGF水平呈正相关，有作者[19-21]提出血小板可能是血清中VEGF的主要来源。尚不清楚NSCLC患者手术前后血小板的动态变化情况。因此本文目的是通过监测NSCLC患者手术前后血清VEGF浓度及血小板计数动态变化，分析两者之间是否有相关性。

1 材料与方法

1.1 研究对象 76例2008年5月-2008年10月于本院胸外科行肺切除手术的NSCLC患者，监测行肺切除手术前后患者血清VEGF浓度及血小板计数的动态变化。患者的入选标准：①于术前经细胞学或病理学确诊，或经手术病理证实的Ia-IIIb期NSCLC患者；②术前常规检查及功能评价均符合手术的适应证；③均未经化疗、放疗或其它与抗肿瘤相关的治疗；④近两周内无外伤或其它手术治疗史；⑤无视网膜病变；⑥无缺血性心脏疾病；⑦年龄＞18岁；⑧女性患者非月经期。

1.2 临床资料 按照UICC（1997）分期标准进行术后病理分期。中位年龄为58.05岁（33岁-79岁）；男性65例，女性11例；腺癌34例，鳞癌34例，腺鳞癌8例；低分化7例，中分化69例；I期35例（Ia期10例，Ib期25例）、II期10例（IIa期1例，IIb期9例）、III期31例（IIIa期29例，IIIb期2例）。

1.3 主要仪器及试剂 人类VEGF检测试剂盒（R&D有限公司），Thermo labsysstems酶标仪（芬兰），BioRAD MODEL1575洗板机（芬兰），Eppendrop低温高速离心机（德国），37oC DHP120 型温孵箱（上海市实验仪器总厂），血球计数仪1800i（日本）。

1.4 标本的采集及检测 分别在手术前1天-2天、术后1、7天，清晨空腹抽取患者外周静脉血，用于检测VEGF的血标本不抗凝，取血后当日离心（1 000 rpm）10 min，分离血清，置于-80oC保存待测定；同日非抗凝管封装血标本后2 h内检测血小板。采用酶联免疫吸附试验法（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）测定血清VEGF浓度。

1.5 统计学分析 结果以Mean±SD表示，应用SPSS 13.0统计软件包处理，组间比较应用t检验、方差分析，相关性采用Pearson相关分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 围术期血清VEGF的变化 NSCLC患者术前、术后1天、术后7天的血清VEGF分别为（842.06±527.24）pg/mL、（1 119.28±609.62）pg/ mL及（1 574.09±873.38）pg/mL，三者比较差异具有统计学意义（F=22.05,P＜0.001），其中术前与术后1天（t=-4.634, P＜0.001）、术后7天与术前（t=-10.192, P＜0.001）及术后1天与术后7天（t=-6.092, P＜0.001）比较均有统计学差异（图1）。

2.2 围术期血小板计数的变化 NSCLC患者术前、术后1天、术后7天的血小板计数分别为（230.42±82.56）×109/L、（196.47±81.48）×109/L及（237.90±86.94）×109/L，三者比较差异具有统计学意义（F=5.288,P=0.006），其中术前及术后1天比较有统计学差异（t=4.309, P＜0.001）；术后7天与术前比较无统计学差异（t=-0.521, P=0.353）；术后1天及术后7天比较有统计学差异（t=-4.555, P＜0.001）（图2）。

图 1 NSCLC患者围术期血清VEGF的变化NSCLC：非小细胞肺癌；POD1：术后1天；POD7：术后7天。Fig 1 Peruoperative danymic changes of serum VEGF in patients of NSCLC NSCLC: non-small cell lung cancer; POD1: peruoperative day 1; POD7: peruoperative day 7.

图 2 NSCLC患者围术期血小板计数的变化Fig 2 Peruoperative danymic changes of platelet count in patients of NSCLC

图 3 NSCLC患者血清VEGF浓度的组间比较（以血小板均数为分界值分组）Fig 3 Comparison of serum VEGF concentration among groups of NSCLC patients (grouped by the mean of platelet count)

2.3 围术期血小板计数与血清VEGF动态变化的相关性分析NSCLC患者术前、术后1天及术后7天血清VEGF及血小板计数之间行相关性分析，结果显示术前、术后1天及术后7天血清VEGF及血小板计数之间的相关系数分别为-0.069（P=0.554）、-0.093（P=0.424）及0.293（P=0. 010），其中术后7天两组间有显著相关性。分别以术前、术后1天及术后7天的血小板均数为分界值，将所研究病例分为两组，行统计学处理，比较不同血小板水平的组间血清VEGF浓度，术前（t=-0.349, P=0.728）及术后1天（t=1.181,P=0.242）之间比较无统计学差异，术后7天两组间比较差异具有统计学意义（t=-2.223, P=0.029）（图3）。

3 讨论

VEGF即血管内皮通透因子（vascular endothelial permeability factor, VPF），是血小板源生长因子（platelet devived growth factor, PDGF）家族的一个成员，可由正常细胞和肿瘤细胞产生和分泌[22]。VEGF是一类糖蛋白，广泛分布于人和动物体内的脑、肾、肝、脾、肺、骨骼等组织。VEGF是通过与其内皮细胞膜上的受体（VEGFR）结合发挥作用。VEGF对血管内皮细胞的增殖、水解基底膜、细胞迁移和血管构建的调控作用最强，特异性最高[23,24]。通过增加内皮细胞有丝分裂及迁移，重塑细胞外基质及增加血管通透性，从而调节病理性血管生成，通过激活蛋白水解酶降解基质，从基因水平上调多种蛋白酶及蛋白酶的激活物[25]。

研究[13-15]发现手术切除原发肿瘤后其血清中VEGF显著升高，那么切除原发肿瘤后，VEGF主要来源于何处？1988年报道57%的小细胞肺癌患者中β-凝血球蛋白升高，β-凝血球蛋白本是血小板活化的标志，其后发现NSCLC患者中β-凝血球蛋白水平同样显著升高[26]。有研究[19-21]提出血小板可能是血清中VEGF的主要来源。如果术后血小板是血清VEGF的主要来源，那么术后两者水平之间必定呈正相关，本文结果并不完全支持此推断。本文中再次证实血清VEGF水平于手术后明显升高，术后1天及术后7天均呈显著上升趋势。血小板计数的动态变化与血清VEGF不同，术后1天显著降低，术后7天升至术前水平。目前尚无肺癌患者在手术前后血小板计数变化的相关报道。George[18]的研究表明，结肠癌患者术后20 h内血小板及血清VEGF均显著升高，且两者有显著相关性。术后1天血小板计数显著降低的原因尚待进一步研究，但同一时间血清VEGF仍显著升高，说明术后血清VEGF升高不仅来自血小板活化后的释放，尚有其它组织或细胞释放VEGF。

本文中术前及术后1天的血清VEGF水平与血小板计数间无相关性，术后7天两者有相关性，进一步分析发现术后7天时，血小板计数低于均数的组中，血清VEGF水平显著低于血小板计数高于均数组的血清VEGF水平，两组之间差异有统计学意义。说明血小板与VEGF之间可能有相互作用。凝血过程使血小板活化，诱导了VEGF等多种肿瘤血管生成因子的释放[27]；同时VEGF可以增加血小板的粘附能力，促进凝血的发生，从而诱导了血小板的活化[28]。有研究[18]认为随着VEGF升高，血小板水平升高可能是血小板在发挥清除体内循环中VEGF的作用。

术后7天时血小板计数与术前水平相同，但血清VEGF水平却升高显著。其原因可能为：①术后有其它合成及释放VEGF的途径，有研究发现中性粒细胞中富含VEGF[29,30]；②手术激活了凝血机制使血小板活化，从而术后血小板释放VEGF能力比术前显著提高。

综上所述，术后血清VEGF水平显著升高，血小板计数的动态变化与血清VEGF之间无正相关性，但术后7天血小板计数高的组别中血清VEGF水平显著升高。尚待进一步了解血小板在肿瘤生长及转移中的作用，更多了解血小板与肿瘤血管生成因子之间的关系，从而为制定肺癌治疗方案提供更多的参考。