RP-HPLC 法测定柴黄升板颗粒中黄芩苷的含量

高立金 郭志鹏

（1、廊坊市药品检验所，河北 廊坊 065000 2、新兴铸管公司职工医院，河北 武安 056300）

柴黄升板颗粒是由黄芩、大黄、赤芍、羚羊角等13 味中药制成的制剂，具有舒肝清热，凉血止血之功效。用于肝胆火旺所致的肌肤发斑或齿鼻衄，低热盗汗，口苦咽干，手足心热，舌红苔黄，血小板减少性紫癜等疾患。其黄芩具有较好的清热燥湿，泻火解毒等生理活性。本文采用灵敏度高、可靠性好的高效液相色谱法，对该制剂中主要成分黄芩苷的含量测定方法进行了系统的研究，结果方法准确，回收率高，分离度好。

1 仪器与试药

Lc-2010A 高效液相色谱仪（日本岛津），BP211D 电子天平（北京塞多利斯），ks-120D超声波清洗器（天津金洲，频率：50Hz）。

对照品：黄芩苷（批号：110715-200815，含量95.2%，用前不需干燥处理）购自中国药品生物制品检定所。柴黄生板颗粒由河北省廊坊市中医院制剂室提供（规格12g·袋-1批准文号：冀药制字Z20051455）。甲醇为色谱纯（天津市科密欧），水为自制超纯水。

2 色谱条件

色谱柱：SHIMADZU VP-ODSC18(250×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇－水－磷酸（50：50：0.2），流速：1.0ml·min-1，检测波长280nm，柱温 30℃，进样量：10μl。

3 溶液的制备

3.1 供试品溶液的制备

取柴黄生板颗粒的细粉0.5g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声25分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取黄芩苷对照品0.01181g，至50ml 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，备用。精密量取5ml 置25ml 量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度摇匀，即得浓度为56.26ug·ml-1 的对照品溶液。

3.3 阴性样品溶液

按处方比例及工艺制备不含黄芩的阴性样品，照3.1 项下供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液。

4 线性关系的考察

精密吸取对照品贮备液，分别配置成系列浓度的对照品溶液。注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定黄芩苷的峰面积。以对照品的进样量X（μg）对峰面积Y 进行线性回归，回归方程为：Y=-1.285×105+2.059×104X r=0.9998

结果表明，黄芩苷的进样浓度在0.1407～2.2486μg之间呈良好的线性关系。

5 干扰试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，样品色谱中在与对照品相同保留时间处有特征吸收峰，阴性样品色谱中在此保留时间处无特征吸收峰，表明样品中其他成分对黄芩苷的检测无干扰。色谱图见图1。

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6 精密度试验

精密吸取对照品溶液10ul，连续进样5次，照上述色谱条件，分别测定峰面积。结果峰面积的RSD为0.27%。

7 稳定性实验

精密吸取同一批供试品（批号：080722）溶液10μl，照上述色谱条件，每隔4小时进样，连续进样测定5次，其RSD 为1.04%。

8 重复性试验

取同一批号样品（批号：080722）6份，按3.1项下供试品溶液制备方法制备，照上述色谱条件，测的黄芩苷的含量为2.58mg·g-1，其RSD 为0.75%，试验结果表明该方法重复性良好。

9 加样回收率试验

取批号为080722 的样品6份，每份约0.25g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入对照品溶液液25ml（精密吸取对照品贮备液25ml，置 250ml 容量瓶中，制得浓度为28.13μg·ml-1的对照品溶液），按3.1项下供试品溶液制备方法制备，并照上述色谱条件测定含量，计算加样加收率。结果见表1。

10 样品的测定

精密吸取供试品溶液10ul,依本文色谱条件测定，记录峰面积，按标准曲线计算黄芩苷的含量。结果见表2

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11 讨论

11.1 溶剂的选择

分别采用甲醇、乙醇、70%乙醇、50%甲醇为溶剂进行试验，发现采用甲醇为溶剂提取完全，对色谱峰的峰形影响较小，回收率相对较好。

11.2 供试品溶液制备方法的选择

以甲醇为溶剂，采用超声提取的方法。分别超声20分钟、25分钟、30分钟制备供试品溶液，结果发现，超声20分钟所制得的供试品溶液中黄芩苷的含量相对较低，超声25分钟和30分钟所制得的供试品溶液中黄芩苷的含量基本相等。

11.3 流动相的选择

分别以不同比例的甲醇－水－磷酸、甲醇－水－冰醋酸、进行试验，结果表明：甲醇－水－磷酸（50：50：0.2）较为适宜，样品峰的对称性、保留时间、理论踏板数和分离度都比较理想。

11.4 小结

利用RP－HPLC 法测定3 批柴黄升板颗粒中的黄芩苷，为该制剂中黄芩的含量控制提供了重要参考。该方法样品处理简单，结果稳定可靠，重复性良好，可以作为该制剂质量控制的一项重要指标。

[1]中国药典[S].2005年版.一部.211

[2]高立金，郭志鹏.RP-HPLC 法测定柴黄升板颗粒中芍药苷的含量[J].中国药师，2009-09-05.