拜激灵对鳊生长和运输应激的缓解作用研究

黄玉萍 刘 涛 姚瑞清 郑宗林 唐冬梅

鳊（Megalobrama amblycephala）隶属于鲤形目，鲤科，鲌亚科，鲂属。江苏无锡的宜兴、常州的武进等地主要以养殖鳊鱼为主，据初步估计，其鳊鱼的产量占全国鳊鱼总产量的20%之多。但是近年来，随着养殖密度的不断提高，养殖环境逐步恶化，鳊鱼的病害也越来越多，给鳊养殖产业造成较大的经济损失，不少养殖户“闻病色变”。病害的发生与病源、宿主、环境以及三者相互作用密切联系，而目前的养殖模式使鳊鱼养殖面临更为复杂的自然和人为干扰，复杂的应激因子给鳊带来不同程度的胁迫作用，致使其对病原的敏感性增高，常常成为病害发生和流行的重要诱因。与此同时，长途运输过程中鳊也受到较大的应激，常导致应激性充血、脱粘等严重后果。血浆或血清中的皮质醇激素含量随应激强度呈现规律性变化，被广泛用来衡量应激水平的重要指标。血液理化指标也能很好地反映机体生理状态，并用于鱼体病理的诊断。因此，试验拟判断在饲料中补充不同剂量的鳊抗应激产品——拜激灵，测定经人工模拟运输后血液皮质醇激素指标和血液生化指标的变化，探讨抗应激产品对鳊养殖生产和运输中的应激缓解作用，为养殖生产提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 试验鱼及试验设计

试验用鳊为当年人工繁殖的同一批苗种，购自重庆市荣昌县梅石坝渔场，试验在西南大学水产系室内循环养殖系统中进行。试验前暂养1周，每天早、中、晚饲喂对照组饲料3次至饱食。试验采用的养殖设施为长方形玻璃缸(总体积0.4 m3，水体体积0.2 m3)。养殖试验期间均连续充氧（除投饵期间外）。

试验开始前停饲24 h。选择体重接近(3.7±0.3)g、体格健壮的幼鱼1 200尾，随机分配于12个养殖缸，每缸100尾，分别为对照组、BJ1组（500mg/kg拜激灵（英文缩写为 BJL）、BJ2组（1 000mg/kg BJL）和BJ3组（2 000mg/kg BJL）。每天早、中、晚投喂3次，至饱食，投喂结束后 30 min，吸出池内残饵及粪便。养殖试验共进行42 d，试验期间水温（25.0±1.0）℃，pH 值（7.5±0.5），溶氧≥5mg/l，氨氮＜0.2mg/l，余氯＜0.1mg/l。

1.2 试验饲料

饲料由西南大学水产系水产动物营养教研室制作。配制饲料前，饲料原料均经粉碎机粉碎并全部过60目筛，按配方要求均匀混合成粉料，在30℃鼓风干燥箱内干燥24 h，置冰箱0℃保存。“拜激灵（BJL）”产品由拜耳（四川）动物保健有限公司提供。试验饲料具体配方组成和营养成分分析见表1。

表1 试验饲料组成及营养水平

1.3 生长性能相关指标

1.3.1 生长速度

42 d养殖试验后，以鱼质量的鲜重变化、增重率和特定生长率等表示生长速度。增重率(%)＝[(Wt-W0)/W0]×100；特定生长率(%/d)＝[(LnWt-LnWo)/d]×100，W0和Wt分别表示养殖开始和结束时的鱼体质量（g）。

1.3.2 饲料利用效率

以饲料系数和蛋白效率表示，饲料系数=饲料投喂量/鱼体增重量；蛋白效率（%）=(Wt-W0)/F×P，F 指饲料消耗量，P指饲料蛋白质含量。

1.4 抗应激机能测定

1.4.1 应激试验设计

鳊养殖试验结束后停止喂食24 h。BJ1、BJ2和BJ3组的各重复缸中分别取出5尾鱼放入鱼苗运输袋中充入纯氧并打包；对照组则各重复缸中分别取出10尾，每个运输袋中放入5尾鳊充入纯氧并打包（其中1袋为阴性对照，不运输），用皮卡车运输2 h。运输后立即将鱼快速深度麻醉后采集血样。运输过程中皮卡车平均速度为50～60 km/h。

1.4.2 血液样品的制备

运输应激后，用1 ml注射器从尾静脉采集试验鱼的血液，全血不加抗凝剂于4℃下放置2 h，待血液明显分层后以2 000 r/min离心30 min后分离，收集血清，放于-18℃低温冰箱中暂存，用于血液生化指标和血清皮质醇激素含量的测定。

1.4.3 血清皮质醇含量测定

采用放射免疫分析法，试剂盒由南京建成生物技术研究所提供。

1.4.4 血液生化指标的测定

所有生化指标在奥林巴斯（OLYMPUS）AU1000全自动生化分析仪上完成。血液生化指标测定方法见周玉等（2002）介绍的方法进行。每批血样皮质醇含量指标测定在4 h内完成，血液生化指标在24 h内完成。

1.5 统计分析

采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析，先对数据作单因素方差分析(ANOVA)，处理间若有显著差异，再作Duncan's法多重比较，P＜0.05表示差异显著。

2 试验结果

2.1 对生产性能的影响

BJL以500～2 000mg/kg剂量添加于饲料后，42 d养殖试验鳊的生长性能指标见表2。从表2中可以看出，BJL显著提高了鳊的增重率和特定生长率（P＜0.05），但各 BJ组之间无显著差异（P＞0.05）；蛋白效率也因为BJL的补充而显著提高，随着BJL补充量的增加，其蛋白效率有进一步提高趋势，BJ3组较对照组和BJ1组均有显著提高（P＜0.05），而饲料系数则与蛋白效率呈完全相反的趋势，得到有效降低；BJL补充对鳊成活率较对照组显著提高（P＜0.05）。

表2 BJL对鳊生长性能的影响

2.2 运输应激对鳊的影响（见图1a～图1h）

第21 d：经过2 h的运输后，除阳性对照组有1尾死亡外，阴性对照、BJL组均未出现死亡。运输过程中，阳性对照组鱼在氧气袋中随水波的动荡下表现出烦躁不安，快速游动，用头不断冲撞袋壁，试图逃离；BJL组的鳊在运输初期也表现出窜出水面等较激烈反应，持续约15～20 min即恢复平静，静卧袋底或轻轻游动。运输结束后，皮质醇激素含量检测结果表明，运输应激后的鳊血清皮质醇激素含量试验组较阴性对照组均显著提高（P＜0.05），但BJL组的血清皮质醇激素含量比阳性对照组显著降低（P＜0.05）（见图1）。第42 d，其趋势与第21 d相同。

第 21 d：鳊血清总蛋白（TP）和白蛋白（AP）测定结果表明，各运输应激组鳊血清TP和AP均较阴性对照组显著提高（P＜0.05），但其中BJL组的TP和AP较阳性对照显著降低（P＜0.05）。

阳性对照组的鳊血清丙氨酸转氨酶（ALT）和碱性磷酸酶（ALP)较阴性对照组显著提高（P＜0.05），但BJ2和BJ3的血清ALT和ALP与阴性对照组相比无显著差异（P＞0.05），比阳性对照则显著降低（P＜0.05）。

第42 d：各组间TP、AP、ALT和ALP变化趋势与第21d基本一致。不同之处在于BJ2和BJ3的TP，及BJ3的AP与阴性对照无显著差异（P＞0.05）。

图1 鳊运输应激前后血清皮质醇和生化指标的变化

第21 d：除BJ3外，运输组的鱼血糖（GLU）含量与阴性对照相比有显著增加（P＜0.05），但均显著低于阳性对照组（P＜0.05），BJL各组间GLU无显著差异（P＞0.05）。

阳性对照组的血清甘油三酯（TG）和血清总胆固醇（TC）较阴性对照组显著提高（P＜0.05），BJL补充组的血清TG和TC则与阴性对照组无显著差异（P＞0.05）。

第42 d：GLU在各组间的变化趋势与第21 d同；BJL补充组的血清TG和TC与阴性对照组无显著差异（P＞0.05）。

3 讨论

试验饲料中补充的拜激灵是以抗应激为主要功效的产品，但在本试验中表现出明显的促长性能。BJL的补充显著提高了鳊的增重率和特定生长率，但500、1 000和2 000mg/kg的补充量之间没有显著差异；BJL的补充能显著提高鳊对饲料蛋白的利用效率，且随补充量的增高而增高，而饲料系数则与蛋白效率相反，呈逐步降低趋势；BJL补充组的鳊成活率较对照组显著提高。试验认为这可能包括如下2个因素：①产品中包含有维生素和矿物质等组分。在实验室水族缸中养殖，水体几乎不能提供任何营养元素，拜激灵中的成分可能给鳊提供更加充裕的营养素；②室内养殖受应激的因素很多，譬如灯光、投喂、换水、人员走动等，可能是拜激灵的补充降低了鱼类对这些因素的应激，提高其健康状况，从而间接促进生长。

由对动物产生有害的应激因子引起的非特异性、生理性紧张状态的现象，称为应激（stress）。当鱼类受到刺激因子的作用后，其下丘脑-垂体-肾间组织轴(HPI)会迅速作用，促进促肾上腺皮质激素（ACTH）的释放，从而导致头肾细胞皮质醇激素的合成与释放。皮质醇激素并不被储存起来而是释放到血液循环系统中，因此，血液中皮质醇浓度可以作为衡量鱼应激强度的指标。

试验显示，鳊对外界环境（运输等）改变具有明显的应激反应。将鳊置于塑料袋中运输产生了明显的应激刺激，皮质醇激素快速升高到原来的5倍以上。表明鳊并不能适应这种新的环境，处于较高的应激状态。运输情况下，鳊不仅处于陌生的环境，更重要的是由车体的颠簸造成水波的震荡以及鱼体间、容器与鱼体间的撞击对鳊的刺激更加强烈。拜激灵的补充虽然没有将皮质醇激素含量降低到阴性对照的水平，但仍较阳性对照有明显的缓解。

由于血液生化指标的变化是以机体组织细胞机能改变和新陈代谢变化为基础的，血液生化指标是反映动物运输应激时体内物质代谢和某些组织器官机能状态变化的一个重要特征。丙氨酸转氨酶(ALT)主要存在于肝脏组织，是肝脏损伤的重要指示酶，运输后鳊血清ALT的升高表明肝代谢极度活跃。运输后ALT显著增高表明运输应激对鳊肝脏造成了一定损伤。损伤的原因可能是皮质醇作用的结果。碱性磷酸酶（ALP）主要用于肝脏疾病时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清ALP明显升高。但饲料中补充拜激灵后，BJL补充组的鳊血液中ALT和ALP都有非常显著的下降，可见拜激灵对于缓解肝损伤有明显效果。

恒定的血糖浓度对维持鱼类正常生命活动有重要的作用。运输后血糖有明显的增高，这与大西洋鲑运输后的血糖变化相同。这可能与运输刺激后皮质醇激素增高有关。皮质类固醇可使机体各组织对葡萄糖的利用率降低，同时使肝脏的糖元异生作用增强，结果使血糖浓度升高。拜激灵有维持血糖稳定的作用。同时，拜激灵的补充对于血液甘油三酯和总胆固醇也有维持稳定的功效。

4 小结

综上所述，鳊在运输等强应激刺激因子作用下，皮质醇激素含量迅速升高，从而引起对机体新陈代谢和生理机能的改变。运输应激的刺激可能导致鳊肝脏等组织的损伤，造成机体不可逆转的生理变化，从而加速了鱼体的死亡，使得鳊的运输困难。拜激灵的补充可以有效提高鳊的抗应激能力，降低应激对肝脏等组织的损伤。

11篇，刊略，需者可函索）