注射用复方骨肽细菌内毒素检查法研究

张晓宇，刘 柳

（保定三九济世生物药业有限公司，河北定兴 072656）

注射用复方骨肽适用于风湿、类风湿性关节炎、骨质疏松、颈椎病等疾病的症状改善，同时用于骨折及骨科手术后愈合，可促进骨愈合和骨新生，为我公司获批生产的冻干粉针剂，其规格为30 mg的多肽物质，热原控制[1]采用家兔法。研究复方骨肽的细菌内毒素检查法的可行性，分析如下：

1 仪器与试药

细菌内毒素工作标准品（规格：5 EU/支，批号：0903140，湛江博康海洋生物有限公司）；鲎试剂（TAL，规格：0.25 EU/ml，批号：0811040、0902202，湛江博康海洋生物有限公司与湛江安度斯生物有限公司）；细菌内毒素检查用水（BET水，规格：5 ml/支，批号：090223，湛江博康海洋生物有限公司）；注射用复方骨肽（规格：30 mg，批号：091003、091108、091205，保定三九济世生物药业有限公司）；并按照2005年版《中国药典》二部中方法所用试管、吸管等玻璃仪器准备。

2 方法与结果

2.1 TAL灵敏度复核

采用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ 等系列浓度进行试验。方法根据《中国药典》2005年版二部附录细菌内毒素检查法[2]进行。结果：两批鲎试剂灵敏度测定值λc均在0.5 λ～2.0 λ范围内，灵敏度符合规定。

2.2 细菌内毒素限值（L）的确定

由公式L=K/M计算，说明书中为L=2 EU/mg，本实验最终限值定为1 EU/mg。

2.3 干扰试验预试验

干扰试验预试验是在进行干扰试验之前要进行的试验，主要目的是排除样品中内毒素的干扰。由同一批号鲎试剂，对不同稀释级别做2支供试品管（NPC），2支供试品阳性对照（PPC），同时以BET水建立2支阴性对照（NC）和 2支阳性对照（PC）。实验结果NC均为阴性，PC均为阳性，结果见表2，由结果可知，样品最大不干扰浓度为30 mg/ml。

表1 干扰试验预试验Tab.1 Pre-experimental interference test

2.4 正式干扰试验

选择3批未检测出热原的供试品，以供试品溶液将细菌内毒素工作标准品制备成 2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ 系列浓度，同时最终供试品溶液的浓度为30 mg/ml，另外同时以BET水制备上述浓度系列的细菌内毒素溶液。分别以上述供试品及BET水制备的内毒素溶液与两个厂家的鲎试剂混合进行干扰试验，并建立两管相应的供试品及BET水阴性对照。结果见表3。由结果可知，Et均在0.5 ES～2.0 ES范围内，且 ES 在 0.5 λ～2.0 λ 范围内，故在 30 mg/ml浓度下，注射用复方骨肽不干扰细菌内毒素与鲎试剂的凝聚反应。

3 讨论

细菌内毒素检查法已经被各国药典正式收载，作为一种新技术与新方法，已经得到广泛的应用。细菌内毒素检查法的优点明显优于家兔法，《中国药典》2000年版新增47种品种采用细菌内毒素检查法，其中生化药品占13种。生化类药品是继抗生素类药品之后需要进行热源检查的第二大类需检药品，而本文针对不同批号的注射用复方骨肽进行细菌内毒素检查法检测，证明原液在30 mg/ml浓度的情况下，注射用复方骨肽对于细菌内毒素与鲎试剂的凝聚反应无干扰作用，足以说明对注射用复方骨肽采用细菌内毒素法是可行的，具有重要的参考意义，建议《中国药典》在鲎试剂的假阳性和特异性方面作一些修订。笔者认为，有必要加快对以上生化药品的研究步伐，充分发挥药学教育和科研部门的潜力和积极性。相信随着用鲎试剂检测药品细菌内毒素的研究深入，将会有更多品种采用此种方法。

表2 注射用复方骨肽（30 mg/ml）细菌内毒素干扰试验Tab.2 Compound Ossotide Injection(30 mg/ml)bacterial endotoxin test

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005:附录XIE85-88.

[2]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[S].北京:中国医药科技出版社,2005:287。

[3]莫水晶.细菌内毒素检查法与论坛[M].北京:湛江博康海洋生物有限公司,2007:6.

[4]中国药学杂志.现代药物分析论坛[M].北京:新华出版社,2001:29-31.

[5]汪穗福,梁瑞琼.2001年中药、生化药细菌内毒素检查法的研究概况[J].中国药品标准,2002,3(3):3-6.

[6]陈艳华,刘岩,杨明堂.细菌内毒素检测法在注射用肝复肽检测中的应用[J].微生物学免疫学进展,2002,30(2):42-43.

[7]马丽,宾漫容,陈焕勇,等.胸腺肽注射液中的细菌内毒素的定量检查[J].中国生化杂志,2002,23(6):302-303.

[8]罗宇芬,劳海燕,林秋晓,等.动态比浊法鲎试验用于注射用β-七叶皂苷钠细菌内毒素检测[J].中国医院药学杂志,2002,22(1):7-8.