对HPLC法测定格列吡嗪片中含量及含量均匀度流动相的改进

闫韶华

河南省周口市食品药品检验所（466000）

格列吡嗪片为第二代磺酰脲类抗糖尿病药，适用于经饮食控制及体育锻炼2～3个月疗效不满意的轻、中度2型糖尿病患者，这类糖尿病患者的胰岛β细胞需有一定的分泌胰岛素的功能，且无急性并发症，无严重的慢性并发症。国家药品标准[1]采用HPLC法测定含量及含量均匀度，本文采用HPLC法，通过对流动相的改进，使格列吡嗪片的检验方法更加合理，准确。实验结果表明，本法简便、快速、准确，精密度高，可用于含量及含量均匀度的测定。

1 仪器与试药

LC-1200型高效液相色谱仪（安捷伦公司生产），VWD型紫外检测器，Agilent化学工作站，普利赛斯电子分析天平。格列吡嗪对照品（批号：100281-200602，中国药品生物制品检定所），格列吡嗪片（瑞阳制药有限公司、辉瑞药业有限公司），甲醇、乙腈均为MERCK牌色谱纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：AgilentlC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（用2.0mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.00±0.05）-乙腈（45∶55∶10）；检测波长：225nm；流速：0.8mL/min；柱温：室温。理论塔板数不低于2000；分离度＞1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

精密称取格列吡嗪对照品，加甲醇溶解后并稀释制成每mL中含格列吡嗪0.5mg的溶液，摇匀，作为储备液。精密量取储备液1.5、2.0、2.5、3.0、4.0mL分别置于25mL容量瓶中，加甲醇10mL，再用0.1mol/L磷酸二氢钠溶液稀释至刻度，摇匀。

2.2.2 线性关系考察

精密称取格列吡嗪对照品0.0264g，按2.2.1项下方法制备对照品溶液，按上述色谱条件，取10μL进样，记录色谱图（图1），以峰面积Y对对照品进样量（μg/mL）作线性回归。结果回归方程（n=5）为：Y=45.497X+677.92，r=0.9996；线性范围为：31.68μg/mL-84.48μg/mL。

2.3 重复性实验

取同一批号样品适量（约相当于格列吡嗪5mg）3份，精密称定，按样品测定项下的方法，测定格列吡嗪片的含量，RSD为0.62%。

2.4 稳定性实验

配制一份供试品溶液，室温下在0、2、4、6、8h测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温8h内基本稳定，RSD=0.70%，n=5。

2.5 精密度试验

取线性关系考察中格列吡嗪浓度为52.80μg/mL的对照品溶液，重复进样5次，结果RSD为1.02%。

2.6 加样回收实验

精密称取已知含量的样品适量（约相当于格列吡嗪5mg）5份，分别置于100mL容量瓶中，加甲醇50mL，超声处理15min使格列吡嗪溶解，用0.1mol/L磷酸二氢钠溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10mL于25mL容量瓶中，分别精密加入格列吡嗪对照品储备液1.00mL，加0.1mol/L磷酸二氢钠溶液稀释至刻度，照样品测定项下的方法测定，结果见表1。2.7 样品含量的测定

表1 回收率测定结果表（n=5）

图1 -1 对照品

图1 -2 样品

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当格列吡嗪5mg），置于100mL容量瓶中，加甲醇50mL，超声处理15min使格列吡嗪溶解，加0.1mol/L磷酸二氢钠溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μL进样测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，测得结果与国家药品标准[1]方法比较，结果见表2。

表2 格列吡嗪片含量及含量均匀度测定结果表（n=2）

2.8 样品含量均匀度的测定

取本品1片，置于50mL容量瓶中，加甲醇25mL，超声处理15min，加0.1mol/L磷酸二氢钠溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，按本文色谱条件，精密量取续滤液20μL进样测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，结果见表2。

3 讨 论

3.1 流动相的选择

采用国家药品标准[1]方法的流动相，高效液相仪的柱压不稳定，基线不平稳，保留时间长，出峰时间慢，通过加入乙腈提高了极性，使出峰时间缩短了一倍，且柱压保持稳定，峰面积或峰高重现性好，偏差较小。

3.2 由于流动相含有盐成分，可以先把流动相混合，放置30min后，再用0.22μm的滤膜过滤，这样可以使基线更平稳。

3.3 本法与《中国药典》2005年版增补本相比较，二者结果无显著性差别，为药品标准的提高，保证药品质量提供了一定的参考。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版增补本[S].北京:化学工业出版社,2005:301.