微小染色体维持蛋白5(MCM 5)在大肠癌中的表达及意义

胡 啸，陈 东

（长沙市第一医院，湖南长沙 410005）

大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，肺癌的发生、发展是一个多因素共同参与的多阶段复杂生物学过程，与细胞增殖和凋亡之间的动态失衡相关。细胞周期中任何一个调控环节的失控都可导致细胞增殖的异常，细胞的恶性增殖失调导致肿瘤的发生。微小染色体维持蛋白(minichro-mosome maintenance proteins，MCM)参与了DNA复制起始的调控。MCM5是MCM家族成员之一，近年国外已有研究表明其可作为不典型增生和肿瘤的生物学标记物[1]。本研究采用SP方法检测MCM5蛋白在大肠癌组织中的表达，并分析其与临床病理特征的关系，为大肠癌的治疗策略选择及预后评估提供初步资料。

1 材料与方法

1.1 标本

全部60例大肠癌组织标本均取自2003年1月～2006年6月长沙市第一医院外科手术切除的大肠癌组织，所有大肠癌标本均经过临床和病理确诊，取材前未经过放化疗治疗。另同期收集临床拟诊肠易激综合征，在内窥镜下取自患者大肠粘膜活检组织标本31例，31例均经组织病理学确认为正常组织或轻度炎症。

1.2 试剂

MCM5小鼠抗人单克隆抗体及S-P组化试剂盒购自于福州迈新生物技术公司。

1.3 方法

用S-P免疫组化染色，将石蜡切片脱蜡，梯度酒精脱水至水化。高温高压组织抗原修复DAB显色，苏木素复染，二甲苯透明，中性树胶封固。

1.4 结果判定

以PBS液代替一抗作为阴性对照，用已知阳性的组织切片作为阳性对照。MCM5表达为胞核棕黄色染色。阳性细胞数大于10%为阳性病例，小于10%为阴性病例。

1.5 统计学分析

采用χ2检验，Fisher确切概率法，数据应用SPSS 13.0软件处理。

2 结果

2.1 MCM 5在组织中的表达情况

MCM5阳性为胞核的棕黄性染色，大肠癌细胞中可以见到明显的阳性表达，占63.3%(38/60)，正常大肠组织仅发现1例MCM5表达，差异具有显著性(P＜0.05)，结果见表 1。

表1 不同组织中MCM 5的表达情况

2.2 Dukes分期与MCM 5的关系

Dukes各期大肠癌的MCM5阳性表达差异具有显著性 (P＜0.05)，其中D期癌组织表达高达75.0%(11/16)，结果见表 2。

表2 Dukes分期与MCM 5的关系

2.3 淋巴结转移与MCM 5的关系

由表3可见，伴有淋巴结转移的大肠癌组织中有75.0%(21/28)显示了MCM5阳性，无淋巴结转移的大肠癌组织中有53.1%(17/32)阳性，差异具有显著性(P＜0.05)。

表3 淋巴转移与MCM 5的关系

2.4 组织学分型与MCM5的关系

低度恶性的大肠癌组织中有55.5%(25/45)显示了MCM5阳性，而高度恶性的癌组织中有86.7%(13/15)阳性，差异具有显著性(P＜0.05）(表 4)。

表4 组织学分型与MCM 5的关系

3 讨论

细胞周期调控异常是肿瘤发生的内在原因，在细胞周期中，G1/S的调控点是细胞内外信号经过传递、整合到细胞核，对细胞的增殖进行调控的关键点，它的异常与肿瘤的发生、发展关系密切[2]。细胞增殖调控异常与肿瘤的发生关系密切,而肿瘤细胞增殖活性与肿瘤生物学行为更是密切相关，是用于反映肿瘤良恶性及恶性程度的重要指征。MCM蛋白与细胞周期密切相关,是启动真核细胞DNA复制、调控细胞由G1期进入S期的关键蛋白，其本质是一种核蛋白复合物，目前发现MCM2～7等6种,它们是一组在序列上高度同源、功能上密切相关的蛋白，在静止/分化细胞中MCM蛋白不表达，而在增殖/肿瘤细胞中高表达，是近年来发现的一种较好地反映细胞增殖活性的新指标。大量研究表明[3,4]，MCM蛋白能够敏感而特异地反映细胞增殖的状况，是较Ki-67更为可靠的细胞增殖指标,在判断肿瘤的恶性度及评估预后方面有着较重要的意义。MCM5是MCM蛋白复合物之一，是一种与细胞增殖密切相关的因子，它的检测可直接反映MCM蛋白的表达水平[5]。Sirieix等[6]检测食管标本发现MCM5在食管癌中呈强阳性表达，而在大多数正常食管黏膜中为阴性，提示了MCM5能较好地反映肿瘤细胞的增殖特性，对肿瘤的诊断有一定意义。

本研究结果显示，MCM5与大肠癌的Dukes分期、淋巴结转移、组织分型相关，且存在线性趋势，即大肠癌组织中的MCM5表达水平随着淋巴结转移、分化程度的恶化、Dukes分期增加也增加。提示检测大肠癌组织MCM5可能是区分不同病理分级、分期的有价值的分子标志物，对治疗选择及预后评估有参考意义。但有待于后继更大样本验证之。

[1]Freeman A,Morris LS,Mills AD,et al.Minichromosome maintenance proteins as biological markers of dysplasia and malignancy[J].Clin Cancer Res,1999,5(8):2121-2132.

[2]McKay JA,Douglas JJ,Ross VG,et al.Analysis of key cellcycle checkpoint proteins in colorectal tumours [J].J Pathol,2002,196(4):386-394.

[3]Rodins K,Cheale M,Coleman N,et al.Minichromosome maintenance protein expression in normal kidney and renal cell carcinomas:relationship to rumor dormancy and potential clinical utility[J].Clin Cancer Res,2002,8(4):1075-1081.

[4]Kato H,Miyazaki T,Fukai Y,et al.A new proliferation marker,minichromosome mainten-ance protein 2,is associated with tumor aggressiveness in esophageal squamous cell carcinoma[J].Surg Oncol,2003,84(1):24-30.

[5]Guida T,Salvatore Gb,Faviana P,et al.Mitogenic effects of the upregulation of minichromo-some maintenance proteins inanaplastic thyroid carcinoma[J].J Clin Endocrinol Metab,2005,90(8):4703-4709.

[6]Sirieix PS,O'Donovan M,Brown J,et al.Surface expression of minichromosome maintenance proteins provides a novel method for detecting patients at risk for developing adenocarcinoma in Barrett's esophagus[J].Clin Cancer Res,2003,9(7):2560-2566.