腐败生物检材中甲基异柳磷的检验

常 靖, 崔 巍, 张蕾萍, 邸玉敏, 杨 俊

(1.公安部物证鉴定中心,北京 100038;2.中国人民公安大学,北京 100038;3.贵州省毕节市公安局,贵州毕节 551700)

0 引言

甲基异柳磷(isofenphos-methyl),化学名称:O-甲基-O-(2-异丙氧基羰基苯基)-N-异丙基柳代磷酸酯,分子式 C14H22NO4PS,结构式如图1所示。甲基异柳磷纯品为淡黄色油状液体,易溶于苯、甲苯、二甲苯、乙醚等有机溶剂,难溶于水,常温下稳定,遇强酸和碱易分解,光和热也能使其加速分解。

图1 甲基异柳磷结构式

甲基异柳磷虽然对地下害虫的防治效果与辛硫磷相近,是防治害虫的优良药剂,但它是一种新型高毒有机磷土壤杀虫剂,被国家列为禁用农药。但在一些地区仍在使用。文献报道,薄层色谱法[1](HPTLC)、紫外-可见分光光度法[2]、气相色谱法[3-5](GC-FPD)、气相色谱质谱联用法[3,6](GC/MS)是分析甲基异柳磷普遍应用的方法。虽然农残检测部门已对蔬菜、水果、肉类、蛋类中建立起标准的检测方法,这些检测方法在检材新鲜的情况下,方法快速、灵敏、简便,而在法庭科学领域,检材高度腐败,如果采用该方法,油脂、色素、腐败蛋白质难以去除,容易造成干扰或漏检。因此,本文介绍一例因甲基异柳磷中毒死亡,尸体脏器组织已高度腐败,检测脏器组织中的甲基异柳磷的方法,供同行参考。

1 案例

2007年 7月 4日,吴 ××被人发现时口吐白沫,送医院抢救无效死亡。2个月后当地公安机关将提取到的死者胃内容 4 g与肝组织 50 g(均已高度腐败)、现场玻璃瓶碎片送至公安部物证鉴定中心检测,要求检验常见有机磷农药。公安部物证鉴定中心遂对该案例进行检验,将腐败胃内容 4 g与肝组织 15g混合经丙酮水浸泡,挥去丙酮去除杂质后,液-液萃取、中性三氧化二铝二次净化,GC/MS分析。结果从死者胃内容及肝组织、现场的玻璃瓶碎片中均检出甲基异柳磷。

2 试验部分

2.1 仪器

岛津公司 GC/MS-5050A气相色谱-质谱联用仪,配 GC-2010工作站。

SORVAU Biofuge Primeore离心机、EYELA CUTE MIXER CM100振荡器。

2.2 试剂

乙酸乙酯、丙酮,均为分析纯试剂。

2.3 色谱条件

色谱柱:DB-5/30m×0.25mm×0.25μm石英毛细管柱;柱温:100℃恒温 3min后以 40℃/min速率程序升温至 280℃恒温 17.5 min,柱流速 1 mL/min;EI源 70 eV,离子源温度 250℃,全扫描,分流比 1∶20。

2.4 检材的提取及净化

玻璃瓶碎片直接用乙酸乙酯提取后经 GC/MS分析。

取死者的肝组织 15g,绞碎与死者胃内容 4 g混合,加丙酮水 30 mL浸泡,离心,取上清液浓缩挥去丙酮至 2mL左右,用乙酸乙酯 6mL×2提取,收集乙酸乙酯液并浓缩至 0.1mL,供 GC/MS分析。

3 结果与讨论

(1)死者的胃内容和肝组织混合提取后经GC/MS分析,所得的总离子流色谱图如图2所示。图2中,分析时间为 8.542min的色谱峰所对应的质谱碎片特征离子及丰度比如图3所示,与 NIST谱库中检索到得甲基异柳磷一致。同时将现场玻璃碎片经有机溶剂提取后供 GC/MS分析,结果所得总离子流图中色谱峰保留时间及其对应的质谱特征碎片离子与死者脏器组织中分析检测结果一致。

图2 胃内容及肝组织混合提取液GC/MS总离子流色谱图

图3 胃内容及肝组织混合提取液(Rt:8.542m in)GC/MS质谱图

(2)甲基异柳磷属高毒有机磷杀虫剂,在生物体内易代谢、分解,在生物脏器组织中分析检测困难。在本案例中由于尸体及生物检材的保存不当,造成生物检材高度腐败,致使毒物在体内再分布、降解以及在腐败检材中的进一步代谢分解,致使检测更加困难,极易漏检。现场物证材料玻璃碎片中检出甲基异柳磷为生物检材的检测提供了一定的检验方向。因此,现场的物证材料对生物检材中毒物检测至关重要,在很大程度上能够为毒物分析提供一定的方向。

(3)甲基异柳磷易溶于苯、甲苯、二甲苯、乙醚等有机溶剂,笔者曾采用苯、甲苯、二甲苯对肝组织进行提取,由于肝组织已高度腐败,采用有机溶剂直接提取,杂质干扰严重,无法进行仪器分析;而采用丙酮水提取,一方面将待测物溶解在丙酮水液中,另一方面丙酮可沉淀检材中腐败蛋白质,同时在挥去丙酮的过程中去除部分油脂及杂质,在此过程中也起到净化的目的,但是由于高度腐败,仪器分析无法去除基质干扰,将提取液又经中性三氧化二铝柱净化后分析,杂质干扰去除却仍未检出甲基异柳磷。但将死者的胃内容及肝组织混合经上述提取过程提取,结果检出甲基异柳磷。由此可见,对于高度腐败的生物检材,提取净化是关键,需谨慎处理,否则极易漏检。

(4)本案例中胃内容量仅仅 4 g,且已高度腐败,单从胃内容或肝组织中提取有机磷农药分析相当困难,完全有可能漏检,笔者将二者合在一起提取,便于检测,最终得到满意结果。

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