HPLC法测定毓麟合剂中川续断皂苷Ⅵ的含量

徐玲玲，张玉萱，年 华

（上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院药剂科，上海市 200437）

毓麟合剂由川续断等6味中药组成，主要用于治疗女子不孕症，临床应用疗效确切。处方中川续断为君药，皂苷类成分为其重要成分，川续断皂苷Ⅵ为活性物质。为控制该药的内在质量，确保用药安全、有效，笔者参考《中国药典》[1]，采用高效液相色谱（HPLC）法对毓麟合剂中川续断皂苷Ⅵ进行了含量测定。

1 材料

1.1 仪器

1200型HPLC仪（美国Agilent公司）；Branson B5200S-DT型超声提取器（必能信超声上海有限公司）；80-1型离心机（上海手术器械厂）；BS124S型万分之一天平（德国Sartorius公司）；0.45 μm微孔滤膜（北京Dikma公司）。

1.2 试药

川续断皂苷Ⅵ对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111685-200401）；毓麟合剂（批号：060810、060814、060830、070531、070724）及阴性样品均由本院制剂室提供；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为双蒸水（使用前经0.45 μm微孔滤膜滤过）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Zorbax EcLipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：甲醇-0.01 mol·L-1盐酸溶液（69∶31）；流速：1 mL·min-1；检测波长：212 nm；柱温：20 ℃；进样量：5 µL。色谱见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取经五氧化二磷干燥器减压干燥至恒重的川续断皂苷Ⅵ对照品适量，以流动相制成相应浓度的对照品溶液，即得。每次测定前用0.45 μm微孔滤膜滤过。

2.2.2 供试品溶液 精密吸取本品（批号：060810）1 mL，置10 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密吸取1 mL，置2 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，3000 r·min-1离心5 min，取上清液，即得。进样前用0.45µm微孔滤膜滤过。

2.2.3 阴性对照溶液 按处方比例，取除去川续断药材成分的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制得阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品2.3 mg，加甲醇制成每1 mL含川续断皂苷2.3 mg的溶液，分别精密吸取该溶液0.1、0.2、0.5、1、2、5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释成不同浓度的对照品溶液，分别进样5µL，按上述色谱条件分别进样分析。用其峰面积积分值（Y）对浓度（X）进行线性回归，得回归方程为Y＝1629.9X+72.344（r＝0.9989）。结果表明，川续断皂苷Ⅵ的检测浓度在0.022～0.23 mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.3.2 精密度试验 取同一浓度的川续断皂苷Ⅵ对照品溶液，精密吸取5µL，连续进样5次。结果，RSD＝1.55%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、24 h进样测定。结果，RSD＝1.49%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.4 重复性试验 取同一批样品（批号：060830）共6份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定样品含量。结果，RSD＝1.30%（n＝6），表明方法重复性良好。

2.3.5 加样回收率试验 精密吸取已知含量的本品（批号：060830）1 mL，共9份，分别置10 mL量瓶中，分别精密加入80%、100%、120%的川续断皂苷Ⅵ对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算加样回收率，结果见表1。

2.3.6 样品含量测定 取5批样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5µL，注入液相色谱仪，记录峰面积，计算样品含量，结果见表2。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

表2 毓麟合剂中川续断皂苷Ⅵ的含量测定结果（n＝5）Tab 2 Content determination of asperosaponinⅥin Yulin mixture（n＝5）

3 讨论

取川续断皂苷Ⅵ对照品在200～600 nm波长范围内进行紫外扫描，发现川续断皂苷Ⅵ在212 nm波长处有最大吸收，并且供试品色谱中其它组分在此处可以达到基线分离，灵敏度高，故确定212 nm作为川续断皂苷Ⅵ的测定波长。

本试验采用HPLC法直接测定毓麟合剂中川续断皂苷Ⅵ的含量，无需进一步纯化提取过程。该方法简便、易行、精密度高、重复性好，可用于毓麟合剂的质量控制。

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：59、60.