固相萃取-GC-MS联用法测定何首乌中有机氯农药残留量Δ

周洪波，房志坚，杨立伟，莫结丽，陈浩桉#

（1.广东药学院中山校区，中山市 528458；2.广东省药品检验所，广州市 510180）

有机氯类农药价廉、杀虫效率高，曾广泛被应用，造成环境污染；且其具有毒性，可造成慢性中毒或致畸、致癌、致突变等，还易在动植物体内蓄积，因而世界各国已相继禁止使用该类农药。但由于该类农药化学性质稳定、半衰期长，所以在土壤、地表水中仍有残留。药材安全问题是受到国内、外广泛关注的一个话题，成为影响中药材出口的重要因素之一[1，2]。因此，笔者以10批不同来源根类药材何首乌为研究对象，应用固相萃取技术结合气-质（GC-MS）联用法[3，4]检测了其中9种有机氯农药[5]。

1 仪器与试药

GC-MS联用仪，包括GC6890N型GC仪、5975B inert MS检测器、7983B型自动进样器、MSD化学工作站（美国Agilent公司）；LABOROTA 4003型旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）；KQ-300DA型超声仪（功率300 W，频率50 Hz，昆山市超声仪器有限公司）。

乙酸乙酯、正己烷、乙醚均为农残级（美国TEDIA公司）；无水硫酸钠为分析纯（广州化学试剂厂）；农药标准品：六六六（BHC，包括α-BHC、β-BHC、γ-BHC 和δ-BHC）、滴滴涕（DDT，包括pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT和pp′-DDT）、五氯硝基苯（PCNB），均购于国家标准物质研究中心（纯度均≥99%）；何首乌药材分别来源于广州清平药材市场（1）、河南济源（2）、广州市药材公司（3）、湖北恩施（4）、江西井冈山（5）、广西靖西（6）、广东肇庆（7）、广西田阳（8）、四川峨眉山（9）、广东德庆（10），均由广东药学院房志坚教授鉴定为蓼科植物何首乌（Polygonum multiflorum Thunb.）。

2 方法与结果

2.1 GC条件

毛细管柱：DB-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm），Florisil固相萃取小柱（6 mL，Supleco，美国）；载气：高纯氦气；流速：1 mL·min-1；进样口温度：230℃；进样方式：不分流进样；进样量：1 μL；柱温：初始温度为100 ℃，保持2 min，然后以8 ℃·min-1升温至220℃，再以5℃·min-1升温至250℃，保持10 min；进样口温度：230℃。

2.2 MS条件

电离方式：EI；电离能量：70 eV；接口温度：280℃；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；全扫描离子范围：50～1000 amu，采用选择离子方式进行定量分析，溶剂延迟为5 min。

2.3 标准贮备液的制备

分别精密吸取α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC，pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT和PCNB适量，分置200 mL量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，得到浓度为0.2 μg·mL-1的标准贮备液，备用。

2.4 供试品溶液的制备

精密称取何首乌药材粉末（过40目筛）2.0 g，置具塞锥形瓶中，加水4 mL，混匀，浸泡2 h，精密加入乙酸乙酯50 mL，称重，密塞，超声处理1 h，放冷，用乙酸乙酯补足失重，摇匀，倾取上清液，加无水硫酸钠2 g，振摇，静置，精密吸取上清液25 mL，置50 mL旋转蒸发瓶中，于40℃水浴减压浓缩至近干，在浓缩过程中加适量正己烷-乙醚（85∶15）混合溶液反复洗涤浓缩除尽乙酸乙酯，再用正己烷-乙醚（85∶15）混合溶液多次溶解并转移至Florisil固相萃取柱（正己烷-乙醚（85∶15）混合溶液15 mL预洗）上，然后用上述混合溶液洗脱，收集洗脱液至10 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5 标准曲线的制备与检测限的测定

分别精密吸取标准贮备液适量，以正己烷稀释，制备成一系列不同浓度（1.0、5.0、10、25、50、100、200 ng·mL-1）的混标溶液，分别注入GC仪，按上述条件测定。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标，制备9种有机氯农药的标准曲线，并按3倍信噪比确定检测限。结果，最低检测限为0.5 ng·mL-1，各农药标准曲线的相关系数在0.9990～0.9995范围之内，线性范围为1～200 ng·mL-1。色谱见图1。

从图1中可以看出，对9种有机氯农药标样基本实现了基线分离，可以满足分析的要求。

图1 何首乌的GC-MS图谱A.对照品全扫描色谱图；B.对照品选择离子色谱图；C.样品选择离子色谱图Fig 1 GC-MS chromatogram of P.multiflorumA.full scan chromatograms of reference substance；B.SIM chromatogram of reference substance；C.SIM chromatograms of samples

2.6 重复性试验

取同一批次样品共6份，按“2.4”项下方法平行制备6份供试品溶液，测定并计算各农药含量。结果，各农药含量的RSD在5.7%～8.3%之间，表明方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验

取已知含量的何首乌样品，加入同一浓度的9种有机氯农药混标溶液适量，平行操作6份，挥干溶剂后按“2.4”项下方法平行制备6份供试品溶液，按上述方法分析，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.8 样品残留量测定

精密称取何首乌样品，按上述方法测定9种有机氯农药残留量，结果见表2。

表2 样品中各有机氯农药残留量测定结果（mg·kg-1）Tab 2 Result of the content determination of the residues of organochlorinated pesticides in samples（mg·kg-1）

3 讨论

《中国药典》采用磺化法净化样品，再以GC-电子捕获检测器（ECD）法检测，有其局限性。本试验采用硅酸镁固相萃取小柱对样品进行净化处理，GC-MS法测定样品中9种有机氯农药，方法灵敏、准确，有机溶剂消耗量少，结果令人满意，该法也是目前国际通用方法。

参考2005年版《中国药典》（一部）规定甘草、黄芪等药材中 BHC 不得高于 0.2 mg·kg-1、DDT 不得高于 0.2 mg·kg-1、PCNB不得高于0.1 mg·kg-1可知，本试验所测样品除1种超出规定外，其余均符合规定。

[1]陈家春，贾敏如.中、美、日和欧洲药典中植物药重金属和农药残留量的限量规定及分析[J].华西药学杂志，2003，20（6）：525.

[2]马虹英.浅谈中药中有机氯农药残留问题[J].中国药房，2005，16（21）：1667.

[3]Michelangelo Anastassiades，Steven J Lehotay.Evaluation of analyte protectants to improve gas chromatographic analysis of pesticides[J].J Chromatogr A，2003，1015：163.

[4]Katerina Mastovska，Steven J Lehotay.Optimization and evaluation oflow-pressure gas chromatography-mass spectrometry for the fast analysis of multiple pesticide residues in food commodity[J].J Chromatogr A，2001，926：291.

[5]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：59.