三黄痔疮膏的薄层色谱鉴别

黄 星李德勋肖顺经张远强

（1云南省医疗器械检验所，云南 昆明 650034；2昭通市食品药品检验所，云南 昭通 657000； 3昭通市中医院）

三黄痔疮膏的薄层色谱鉴别

黄 星1李德勋2肖顺经2张远强3

（1云南省医疗器械检验所，云南 昆明 650034；2昭通市食品药品检验所，云南 昭通 657000； 3昭通市中医院）

目的：建立三黄痔疮膏的质量控制方法。方法：采用薄层色谱法对方中的大黄、黄芩、黄柏、栀子、紫草进行定性鉴别。结果：薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰。结论：薄层色谱法简单、易行，重现性好，专属性强，可对三黄痔疮膏进行定性鉴别。

三黄痔疮膏；薄层色谱

三黄痔疮膏为昭通市中医院自拟处方制剂，由大黄、黄芩、黄柏、栀子、紫草等多味中药组成，具有清热解毒，化腐生肌的功效，临床上用于治疗内痔、外痔、混合痔，肛瘘肿痛，出血之症，效果较好。由于目前中药材市场上出现的大黄、黄芩、黄柏、栀子、紫草五味中药的混伪品较多，而本制剂又为提取物制剂。因此，有必要对成品制剂中所含的以上五味中药主要有效成分进行定性鉴别。为此，笔者在参考2005年版《中国药典（一部）》[1]及《中国医院制剂规范》[2]等文献的基础上，采用薄层色谱（TLC）法对制剂中的大黄、黄芩、黄柏、栀子、紫草进行了定性鉴别研究，现报道如下。

1 材料

大黄素对照品（批号：110756-200110）、黄芩苷对照品（批号：110715-200514）、盐酸小檗碱对照品（批号：110713-200609）、栀子苷（批号：0749-9404）、左旋紫草素（批号：769-9001）均购自中国药品生物制品检定所；三黄痔疮膏（批号分别为20090123、20090125、20090127）为昭通市中医院自配制剂；阴性对照品制剂按制剂处方工艺缺味配制，所用药材均鉴别符合《中国药典（一部）》2005年版规定；硅胶G、硅胶H薄层板（青岛海洋化工厂生产）；其他试剂均为分析纯。

2 方法及结果

2.1 大黄薄层色谱鉴别

取三黄痔疮膏5 g，加硅藻土2 g研匀，无水乙醇20 mL，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL使溶解，加盐酸1 mL，置于水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇溶液1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法取缺大黄的阴性对照品制成大黄阴性对照品溶液。另取大黄素对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验[1]，吸取上述供试品及阴性对照品溶液各5 μL，大黄素对照品溶液2 μL，分别点于同一硅胶H板上，以石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中在与大黄素对照品色谱相应的位置上（Rf值为0.56处）显相同的橙黄色荧光斑点，阴性对照品色谱中无此斑点（图1 A）。

图1 TLC图谱

2.2 黄芩薄层色谱鉴别

取三黄痔疮膏5 g，加硅藻土3 g，研匀，加甲醇超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法取缺黄芩的阴性对照品制成黄芩阴性对照品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验[1]，吸取上述三种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中在与栀子苷对照品色谱相应的位置上（Rf值为0.24处）显相同颜色的斑点，阴性对照品色谱中无此斑点（图1 B）。

2.3 黄柏薄层色谱鉴别

取三黄痔疮膏10 g，加石油醚（60～90℃）50 mL，加热搅拌使溶解，加1%盐酸溶液50 mL振摇提取，分取酸水液，用浓氨试液调节pH值至9～10，用三氯甲烷振摇提取2次（40 mL、30 mL），合并三氯甲烷液，挥干，残渣加1%盐酸甲醇溶液1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法取缺黄柏的阴性对照品制成黄柏阴性对照品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验[1]，吸取上述三种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-异丙醇-乙酸乙酯-甲醇-水（6∶1.5∶3∶1.5∶0.3）为展开剂，置于氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上（Rf值为0.80处）显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品色谱中无此斑点（图1 C）。

2.4 栀子薄层色谱鉴别

取三黄痔疮膏5 g，加石油醚（60～90℃）20 mL，加热搅拌使溶解，弃去石油醚，药渣挥干，加乙酸乙酯20 mL，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。同法取缺栀子的阴性对照品制成栀子阴性对照品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验[1]，吸取上述三种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲醇-浓氨试液（4∶5∶4∶5∶0.8）为展开剂，20℃以下展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中在与栀子苷对照品色谱相应的位置上（Rf值为0.33处）显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品色谱中无此斑点（图1 D）。

2.5 紫草薄层色谱鉴别

取三黄痔疮膏8 g，加石油醚（60～90℃）30 mL，加热搅拌使溶解，加2%氢氧化钠溶液30 mL振摇提取，弃去石油醚层，水液加盐酸调至溶液略显红色，再加乙醚30 mL振摇提取，分取提取液，挥至近干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法取缺紫草的阴性对照品制成紫草阴性对照品溶液。另取左旋紫草素对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验[1]，吸取上述三种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中在与左旋紫草素对照品色谱相应的位置上（Rf值为0.59处）显相同的紫红色斑点，再喷以10%氢氧化钾溶液，斑点变为蓝色，阴性对照品色谱中无此斑点（图1 E）。

3 讨论

3.1 上述薄层色谱鉴别试验中，在大黄、黄芩两种供试品的制备过程中加入适量的硅藻土，研匀，起分散作用，便于大黄素和黄芩苷的充分提取。在黄柏、栀子、紫草供试品的制备过程中先加入适量的石油醚（60～90℃），加热溶解后用极性溶剂提取，弃除了制剂中的麻油和羊毛脂等辅料的干扰，使得薄层色谱斑点分离的效果更好。

3.2 上述5种药材的薄层色谱所用的展开剂，均是在参考了有关资料的基础上经过多次试验筛选后得出的。

3.3 从上述试验的结果可以看出：5种药材采用薄层色谱鉴别方法，展开及分离效果良好，阴性对照无干扰，方法简便、快捷，重现性好，可对成品制剂中所含的以上五味中药主要有效成分进行有效检识。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化

学工业出版社，2005:附录31.

[2]中华人民共和国卫生部药政局.中国医院制剂规范[M].北

京:中国医药科技出版社，1995:附录14.

Identified Sanhuang Hemorrhoids Plaster by TLC

Huang Xing1，Li Dexun2，Xiao Shunjing2，Zhang Yuanqiang3（1 Yunnan Institute for Medical Device Control，Kunming 650034，China；2 Zhaotong Institute for Food and Drug Control，Zhaotong 657000，China；3 Zhaotong Hospital of TCM）

Objective:To establish a quality standard for San Huang Hemorrhoids Plaster by TLC.Methods：Rhei radix et rhizoma,Scutellariae radix,Phellodendry chinensis cortex,Gardeniae fructus,Arnebiae radix of San Huang Hemorrhoids Plaster were identified by TLC.Results:The spots were clear,negative control without interference by TLC.Conclusion：TLC was simple with good reproducibility and specificity.It can be used for identifying of Sanhuang Hemorrhoids plaster.

Sanhuang Hemorrhoids Plaster;TLC

黄星，男，副主任药师。研究方向：药品及医疗器械质量标准研究。Tel：13629685495